摘要
目的：探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME—BOOST免疫程序免疫增强效果。方法：用EcoRI、XhoI和EcoRI、SalI分别双酶切PVAX1及既往构建的pET28a（＋）/C-G250肽-C质粒。利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定。大量提取质粒并分光光度计测质粒含量。将32只雌性昆明小鼠随机分为（A）裸DNA组,（B）DNA-PEI复合物组,（C）DNA-PEI＋蛋白疫苗组,（D）空白对照组。按0,10,20,30天程序经股四头肌注射免疫。C组在第20天及第30天进行蛋白冲击。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度。流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4＋和CD8＋。结果：酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽cDNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中。昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1：1.28×104及CD4＋、CD8＋达26.12%和12.60%,明显高于A组的1：3.2×103和CD4＋,CD8＋占到19.32%和10.74%。而蛋白冲击组的1：5.12×104和CD4＋,CD8＋占到41.96%和15.14%,明显高于B组（P〉0.05）。结论：成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C。该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应。证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用。为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法。
出版日期
2014年11月21日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
