摘要
摘要目的研究长非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响，并探讨其机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常甲状腺和甲状腺癌细胞株中AFAP1-AS1的表达。将甲状腺癌细胞株WRO分成3组，AFAP1-AS1沉默表达组(AFAP1-AS1-siRNA组)、阴性对照组(NT-siRNA组)及空白对照组(Blank组)，AFAP1-AS1-siRNA组和NT-siRNA组采用Lipofectamine™ 3000分别转染AFAP1-AS1-siRNA、NT-siRNA，Blank组加入PBST对照。CCK-8检测3组细胞增殖能力，Transwell实验检测侵袭能力，Western blotting检测Rho A、Cyclin D1和MMP-9蛋白的表达情况。结果正常甲状腺细胞株FRTL-5、甲状腺癌细胞株SW579、CAL-62、FRO、WRO的AFAP1-AS1相对表达量分别为1.03±0.04、2.95±0.17、5.31±0.35、7.26±0.49、9.67±0.53，5组间比较差异具有统计学意义(F＝16.932，P＝0.027)；AFAP1-AS1在WRO细胞中表达量最高，因此，选择WRO细胞进行后续实验。AFAP1-AS1-siRNA组、NT-siRNA组、Blank组3组细胞AFAP1-AS1的相对表达量分别为0.23±0.02、1.02±0.04、1.03±0.05，差异具有统计学意义(F＝13.590，P＝0.006)，与NT-siRNA组相比，AFAP1-AS1-siRNA组AFAP1-AS1表达量显著降低(P<0.001)。3组细胞转染后3、4 d的A450值分别为0.68±0.06、1.17±0.09、1.22±0.09，0.96±0.08、1.69±0.11、1.72±0.12，差异均具有统计学意义(F＝7.318，P＝0.016；F＝10.351，P＝0.004)，第3、4 d AFAP1-AS1-siRNA组、NT-siRNA组两组比较，差异均有统计学意义(P＝0.043；P＝0.013)。3组侵袭细胞数分别为(72.8±5.7)个、(145.6±8.9)个、(148.4±7.3)个，差异具有统计学意义(F＝37.273，P＝0.034)，AFAP1-AS1-siRNA组侵袭细胞数少于NT-siRNA组(P＝0.021)。3组细胞Rho A蛋白表达量分别为0.34±0.03、1.02±0.04、1.04±0.03，差异具有统计学意义(F＝9.667，P＝0.013)，AFAP1-AS1-siRNA组Rho A蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(P＝0.018)；3组Cyclin D1蛋白表达量分别为0.52±0.04、1.03±0.02、1.05±0.04，差异具有统计学意义(F＝15.464，P＝0.010)，AFAP1-AS1-siRNA组Cyclin D1蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(P＝0.023)；3组MMP-9蛋白表达量分别为0.42±0.04、1.05±0.03、1.02±0.04，差异有统计学意义(F＝10.328，P＝0.032)，AFAP1-AS1-siRNA组MMP-9蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(P＝0.035)。结论AFAP1-AS1沉默可抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭，其机制可能与下调Rho A、Cyclin D1、MMP-9蛋白表达相关。
出版日期
2020年08月10日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
