简介:摘要目的对比血浆胞裂蛋白9(septin 9,SEPT9)和多配体蛋白聚糖2前体(syndecan-2,SDC2)甲基化联合检测与4种血清肿瘤标志物对结直肠癌诊断效果的差异。方法本研究选择2019年3—12月在徐州医科大学附属医院就诊的128例患者为研究对象进行病例对照研究。所有研究对象均行胃肠镜检查,根据病理结果分3组,结直肠癌组74例,结直肠腺瘤组7例,以胃肠镜检查未见异常或有炎性息肉或增生性息肉者作为对照组(47例)。128例研究对象均采用罗氏Lightcycler 480Ⅱ实时荧光定量聚合酶链式反应仪检测血浆SEPT9基因和SDC2基因甲基化的水平,采用罗氏Cobas 8000电化学发光仪检测血清甲胎蛋白、癌胚抗原、糖类抗原125和糖类抗原199的浓度,采用χ2检验比较各标志物在3组中的阳性检出率,采用Medcalc绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),对各指标诊断结直肠癌的价值进行分析。结果SEPT9基因和SDC2基因甲基化在结直肠癌组的单独阳性检出率分别为81.1%(60/74)和67.6%(50/74),当两个基因甲基化联合检测后提升至85.1%(63/74)。甲胎蛋白、癌胚抗原、糖类抗原125和糖类抗原199在结直肠癌组中阳性检出率分别为1.4%(1/74)、33.8%(25/74)、6.8%(5/74)、13.5%(10/74),4种肿瘤标志物联合检测时仅提升至43.2%(32/74),3组阳性检出率比较,除了甲胎蛋白和糖类抗原125外(χ2值分别为3.847、2.430,P均>0.05),其余各指标组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。SEPT9甲基化、SDC2甲基化、甲胎蛋白、癌胚抗原、糖类抗原125和糖类抗原199用于预测诊断结直肠癌的曲线下面积(area under the curve,AUC)(95%CI)分别为0.854(0.781,0.910)、0.795(0.715,0.861)、0.575(0.485,0.662)、0.685(0.597,0.764)、0.603(0.513,0.689)和0.631(0.541,0.715),两种DNA甲基化标志物联合检测的AUC(95%CI)为0.872(0.801,0.924),4种血清肿瘤标志物联合检测的AUC(95%CI)为0.712(0.625,0.789)。两种DNA甲基化标志物联合检测的AUC优于甲胎蛋白、癌胚抗原、糖类抗原125、糖类抗原199的AUC,差异均有统计学意义(甲胎蛋白:Z=4.990,P<0.001;癌胚抗原:Z=3.743,P<0.001;糖类抗原125:Z=4.951,P<0.001;糖类抗原199:Z=3.983,P<0.001);两种基因甲基化联合检测的AUC优于4种血清标志物联合检测对结直肠癌的诊断,差异有统计学意义(Z=3.334,P<0.001)。结论血浆中SEPT9基因和SDC2基因甲基化联合检测比4种血清肿瘤标志物联合检测更适合结直肠癌非侵入性诊断。
简介:以分离筛选、鉴定的假单胞菌为研究材料,提取假单胞菌的基因组为模板基因.设计引物进行PCR扩增。扩增的条件为94℃预变性4min,98℃变性10S,58℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃复性10min。用试剂盒回收PCR产物,以PGEM—TEasyVector为载体。产生重组质粒,转化到大肠杆菌(E’coli)JM109细胞中,于LB平板上进行蓝白筛选阳性克隆。提取阳性克隆的质粒,电泳筛选滞后质粒,EcoRⅠ酶切验证后进行测序,检测弹性蛋白酶基因在JM109Ecoli细胞中的表达。结果表明:PCR扩增出1,67kh的基因片段。并成功克隆在EcoliJM109细胞中:挑取白斑提取的质粒,检测有滞后质粒,EcoRⅠ酶切检测到3.0kh的载体和1,67kb的基因片段;以滞后质粒为模板再次进行PCR扩增,扩增出1.67kb基因片段。证明该质粒为重组质粒,经上海博亚生物技术公司测序为1.67kh的基因片段。并在EcoliJM109细胞中表达。
简介:目的:从海洋来源的铜绿假单胞菌中筛选多株具有鼠李糖脂合成能力的菌株。方法:以9株分离自不同海洋环境的铜绿假单胞菌为研究对象,考察并比较其发酵合成鼠李糖脂生物表面活性剂的表面活性、产量和产物成分的差异,扩增并比对合成途径中的关键基因。结果:9株菌的发酵产物均具有表面活性,其中菌株1A01151发酵液的表面活性最强,表面张力值可降低至28mN/m;9株菌的基因组中均含有鼠李糖脂合成途径中关键基因rhlAB和rhlC,都具有合成单、双鼠李糖脂的能力;菌株1A01151和1A00364的发酵产量最高(2.69g/L),产物经LC-MS/MS检测,所合成的鼠李糖脂同系物组分不同,双糖双脂的含量最高(1A01151:75.96%;1A00364:61.01%)。结论:海洋来源的铜绿假单胞菌是具有鼠李糖脂高产潜力的菌株,可用于合成性能不同、组成多样的鼠李糖脂生物表面活性剂。
简介:摘要1例主诉为"腹泻、便血3年"的12岁患儿就诊于西安市儿童医院消化内科,通过肠镜发现肠道黏膜慢性炎症伴糜烂,经病理组织活检确诊为组织胞浆菌病,行胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)基因测序提示复合杂合突变。经对症及抗真菌治疗,预后良好。
简介:摘要目的探讨SOX9蛋白和K-Ras蛋白在胃癌组织中表达及临床意义。方法选择义乌市中心医院于2016年1月至2020年1月行手术且经病理检查证实为胃癌患者120例为观察对象,取癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学法检测SOX9蛋白和K-Ras蛋白阳性表达;采用Western Blot检测SOX9蛋白和K-Ras蛋白表达灰度值。比较癌组织与癌旁组织SOX9蛋白和K-Ras蛋白阳性率,不同病理特征SOX9蛋白和K-Ras蛋白阳性率,及癌组织与癌旁组织SOX9蛋白和K-Ras蛋白表达灰度值。结果癌组织SOX9蛋白阳性率[69.17%(83/120)]和K-Ras蛋白阳性率[58.33%(70/120)]高于癌旁组织[15.00%(18/120)和11.67%(14/120)](χ2=72.227、57.436,均P<0.05)。不同性别、年龄、分化程度和TNM分期SOX9蛋白表达阳性率和K-Ras蛋白表达阳性率比较差异无统计学意义(均P>0.05);淋巴结转移患者SOX9蛋白表达阳性率(92.45%)高于无淋巴结转移患者(50.75%)(χ2=24.136,P<0.05)。淋巴结转移患者K-Ras蛋白表达阳性率(79.25%)高于无淋巴结转移患者(41.79%)(χ2=17.079,P<0.05)。癌组织SOX9蛋白表达灰度值(0.87±0.15)和K-Ras蛋白表达灰度值(0.56±0.13)高于癌旁组织(0.12±0.03)和(0.10±0.03)(t=53.079、37.769,均P<0.05)。结论SOX9蛋白和K-Ras蛋白在胃癌组织中高表达,且与淋巴结转移密切相关。
简介:摘要目的探讨骨形成蛋白(BMP)-6和BMP-9在糖尿病合并骨折时的表达改变及其与骨折愈合的关系。方法将44只6周龄雄性SD大鼠采用Excel简单随机化分法分为糖尿病组(DM,n=22)和非糖尿病组(ND,n=22)。DM组腹腔注射链脲佐菌素枸橼酸溶液(STZ)50 mg/kg,ND组注射等体重比枸橼酸溶液。2周后于两组动物左股骨制造横断骨折。骨折后的第2、4、8周行影像学和组织形态学骨折愈合评估。通过机械负荷评估骨痂的强度。采用免疫印迹法(Western blot)定量分析骨组织中BMP-6和BMP-9的表达变化。影像学结果以Image J软件进行图像分析。实验数据以SPSS 13软件进行t检验分析。结果骨折后4周糖尿病组骨痂显著小于非糖尿病组(DM组1.64±0.14,ND组2.14±0.18,t=5.499,P<0.05,n=8);骨痂内钙化比例显著低于非糖尿病组[DM组(53.40±6.49)%,ND组(60.61±2.13)%,t=1.976,P<0.05,n=8];骨痂机械强度显著低于非糖尿病组[DM组(161.85±38.33) kPa,ND组(217.49±39.63) kPa,t=2.135,P<0.05,n=6]。相对分子质量为35×103的BMP-6表达在DM组骨折股骨中表达显著低于ND组骨折股骨。分析较大相对分子质量BMP-6条带与35×103 BMP-6的变化关系,结果提示,35×103 BMP-6的显著下调可能与BMP-6的成熟过程受到糖尿病病理因素抑制有关。BMP-9的表达与糖尿病和骨折无关。结论糖尿病骨折愈合过程受损与BMP-6 35×103片段表达下调相关。而BMP-6的成熟过程障碍可能是导致上述差异的重要原因。
简介:摘要目的探讨人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)蛋白的哪种结构域更适合激发赫赛汀抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)效应。方法真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白,即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对蛋白相对分子质量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测这些蛋白与赫赛汀的结合能力。自然杀伤(natural killer,NK)细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫塞汀ADCC效应的能力差异。结果成功获得纯度较高的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc,HER2-His和T276-T652-His都表现出较好的结合能力,T276-T652-Fc结合较差,T23-561-Fc则完全不结合。此外,HER2-Fc、HER2-His、T276-T652-Fc、T276-T652-His、T23-561-Fc的EC50值分别为0.16、0.17、0.16、0.15、1.12。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的效应,HER2-Fc组CD107a表达量最高可达61.50%,IFN-γ的分泌可达38.10%。T276-T652-His组CD107a的表达最高可达63.00%,IFN-γ的分泌可达43.10%,与HER2-Fc作用相当。该效应呈浓度梯度依赖性,蛋白低浓度0.5 μg/mL时,赫赛汀的ADCC效应降低,且组间差异有统计学意义(t值分别为4.21、4.24、6.51、3.17、3.44、3.05、3.34、2.82、8.55、11.52、4.50、2.96、5.58、6.03、3.77、4.42,P值均<0.05)。结论验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用,且与HER2-Fc相当,为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。
简介:摘要目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎患儿血清IgA、IgG、IgM水平变化的临床意义。方法抽取2015年11月至2020年10月郑州大学附属郑州中心医院收治的332例呼吸道感染患儿。根据患儿血清是否存在RSV,将其分为RSV组(138例)与非RSV组(194例),检测并比较RSV组与非RSV组患儿血清IgM、IgA与IgG水平及阳性率。根据年龄不同将RSV组患儿分为在5~9岁RSV患儿组(12例)、12个月~5岁RSV患儿组(28例)、6~12个月RSV患儿组(48例)及0~6个月RSV患儿组(50例),比较4组患儿的IgM、IgA与IgG阳性率。结果与非RSV组比较,RSV组患儿IgM(t=10.776,P<0.001)与IgG水平(t=7.703,P=0.010)均降低,IgA(t=11.853,P<0.001)水平升高。在4个不同年龄RSV患儿组中,5~9岁RSV患儿组的IgG的阳性率(χ2=26.211,P<0.001)与IgA的阳性率(χ2=26.906,P<0.001)最高;12个月~5岁RSV患儿组的IgA的阳性率最高(χ2=26.906,P<0.001)。结论RSV感染肺炎患儿血清IgG、IgA与IgM水平会发生变化,但IgG、IgA与IgM等三种免疫球蛋白都不能单独用于RSV感染的早期辅助诊断。RSV感染肺炎的早期临床诊断依据影像学、临床症状与体征三种因素联合。
简介:摘要目的探讨巨噬细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9(card9)在胰腺腺泡细胞导管组织转化中的作用。方法构建3条靶向card9的小分子干扰RNA(siRNA-card9),荧光显微镜下观察转染巨噬细胞的荧光强度,采用实时定量PCR法检测巨噬细胞card9 mRNA表达量,筛选巨噬细胞的最佳转染效率。将5×105巨噬细胞和100 μg/ml β葡聚糖体外常规培养12、24 h后,分成阳性细胞组(巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9-/-巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阴性细胞组,采用蛋白质免疫印迹法检测各组巨噬细胞card9蛋白表达水平。取1×105巨噬细胞、1×105胰腺腺泡细胞加入Transwell小室上下层共培养120 h后,分为阳性细胞组(巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9-/-巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组,取下室的胰腺腺泡细胞,采用免疫荧光化学染色法检测腺泡细胞导管组织转化标志物CK19蛋白表达。结果siRNA-card9转染巨噬细胞24 h荧光强度最强,浓度为200 nmol/L时抑制效率最高。阳性细胞组、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组、β葡聚糖刺激阴性细胞组培养24 h后,巨噬细胞card9蛋白表达量分别为0.81±0.05、1.46±0.05、0.42±0.06、0.46±0.06,β葡聚糖刺激阳性细胞组较阳性细胞组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光较阳性细胞组明显增强,且呈β葡聚糖剂量依赖性;而阴性细胞组、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光强度均较阳性细胞组显著降低。结论巨噬细胞card9表达水平升高可诱导腺泡细胞导管组织转化,提示可能存在card9介导的胰腺癌发病机制。