简介:摘要目的探讨新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSP1)对I型干扰素(type I interferon,IFN-I)应答的影响及其作用机制。方法为研究SARS-CoV-2的NSP1对I型IFN产生的影响,构建NSP1表达质粒,并通过免疫荧光检测其蛋白表达能力。通过双荧光素酶报告基因实验检测NSP1对IFN-β启动子激活的作用。构建NSP1突变体M1(K163AH164A)和M2(△161-180),验证突变位点对IFN-β启动子激活的影响。结果NSP1显著抑制维甲酸诱导基因蛋白I、黑色素瘤分化相关蛋白5、线粒体抗病毒信号蛋白、TANK结合激酶1、干扰素调节因子3、干扰素调节因子7诱导的下游IFN-β启动子的激活,并对I型IFN通路的各关键分子的蛋白表达具有抑制作用,NSP1 C端的KH基序是其发挥抑制作用的关键位点。结论SARS-CoV-2 NSP1能够拮抗宿主I型干扰素免疫应答,实现病毒的天然免疫逃逸。
简介:摘要目的探讨三结构域蛋白27(TRIM27)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞炎症反应中的作用机制。方法收集2018—2019年于温州医科大学附属平阳医院接受手术治疗的NSCLC患者的癌组织和正常癌旁组织(距离癌组织5 cm)各10例,利用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测TRIM27 mRNA和蛋白的表达水平。TRIM27 siRNA敲减实验分为NCTRIM27组、TRIM27 siRNA组、NCTRIM27+TNF-α组、TRIM27 siRNA+TNF-α组;白细胞介素6(IL-6) siRNA敲减实验分为NCIL-6组和IL-6 siRNA组。采用Western blot法检测各组细胞系中TRIM27、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、TNFR2以及TNFR相关炎症因子蛋白的表达水平。结果不同分期NSCLC组织中TRIM27表达水平(Ⅰ期为2.81±0.58,Ⅱ期为3.32±1.38,Ⅲ期为3.67±1.24)均高于对应正常癌旁组织(分别为1.01±0.15、0.92±0.10和1.05±0.12,均P<0.05)。NCTRIM27组和NCTRIM27+TNF-α组细胞中TRIM27 mRNA的表达水平分别为0.94±0.12和1.67±0.03,TRIM27蛋白表达水平分别为0.31±0.02和0.38±0.01,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NCTRIM27+TNF-α组和TRIM27 siRNA+TNF-α组细胞中IL-6 mRNA的表达水平分别为11.35±0.12和5.62±0.15,VCAM-1 mRNA的表达水平分别18.75±0.17和9.35±0.11,STAT3 mRNA表达水平分别16.54±0.10和8.12±0.10,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NCIL-6组和IL-6 siRNA组细胞中IL-6 mRNA的表达水平分别为1.10±0.07和0.52±0.16,STAT3 mRNA的表达水平分别为1.01±0.01和0.48±0.12,TRIM27 mRNA的表达水平分别为1.03±0.01和0.30±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NSCLC组织和细胞中,TRIM27呈高表达,且促进TNF-α基因的表达,可能通过调控TNF-α诱导IL-6/STAT3信号通路促进肺癌炎症反应的发生。
简介:摘要目的探讨三结构域蛋白27(TRIM27)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞炎症反应中的作用机制。方法收集2018—2019年于温州医科大学附属平阳医院接受手术治疗的NSCLC患者的癌组织和正常癌旁组织(距离癌组织5 cm)各10例,利用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测TRIM27 mRNA和蛋白的表达水平。TRIM27 siRNA敲减实验分为NCTRIM27组、TRIM27 siRNA组、NCTRIM27+TNF-α组、TRIM27 siRNA+TNF-α组;白细胞介素6(IL-6) siRNA敲减实验分为NCIL-6组和IL-6 siRNA组。采用Western blot法检测各组细胞系中TRIM27、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、TNFR2以及TNFR相关炎症因子蛋白的表达水平。结果不同分期NSCLC组织中TRIM27表达水平(Ⅰ期为2.81±0.58,Ⅱ期为3.32±1.38,Ⅲ期为3.67±1.24)均高于对应正常癌旁组织(分别为1.01±0.15、0.92±0.10和1.05±0.12,均P<0.05)。NCTRIM27组和NCTRIM27+TNF-α组细胞中TRIM27 mRNA的表达水平分别为0.94±0.12和1.67±0.03,TRIM27蛋白表达水平分别为0.31±0.02和0.38±0.01,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NCTRIM27+TNF-α组和TRIM27 siRNA+TNF-α组细胞中IL-6 mRNA的表达水平分别为11.35±0.12和5.62±0.15,VCAM-1 mRNA的表达水平分别18.75±0.17和9.35±0.11,STAT3 mRNA表达水平分别16.54±0.10和8.12±0.10,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NCIL-6组和IL-6 siRNA组细胞中IL-6 mRNA的表达水平分别为1.10±0.07和0.52±0.16,STAT3 mRNA的表达水平分别为1.01±0.01和0.48±0.12,TRIM27 mRNA的表达水平分别为1.03±0.01和0.30±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NSCLC组织和细胞中,TRIM27呈高表达,且促进TNF-α基因的表达,可能通过调控TNF-α诱导IL-6/STAT3信号通路促进肺癌炎症反应的发生。
简介:摘要目的探讨非肌肉肌球蛋白重链(Nonmusclemyosinheavychain9,MYH9)在肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织中的表达水平及其与临床参数的相关性。方法采用免疫组织化学方法、WesternBlotting检测60例肝癌组织及其癌旁组织中MYH9蛋白表达情况。WesternBlotting检测人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2及人正常肝细胞株LO2中的MYH9蛋白表达情况。结果MYH9蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为63.33%(38/60),明显高于癌旁组织中的表达率41.67%(25/60),P<0.05;MYH9蛋白在肝癌组织中的表达相对量(1.078±0.130)较癌旁组织(0.775±0.111)明显增高,P<0.05;MYH9蛋白在SMMC-7721及HepG2细胞株中的表达相对量(分别为1.627±0.107、1.317±0.095)均明显高于LO2(0.925±0.060,P<0.05)。MYH9蛋白表达与患者肿瘤大小、门静脉侵犯、Edmondson分级及TMN分期有关,P<0.05,而与性别、年龄、AFP及HBsAg无关,P>0.05。结论MYH9蛋白在肝癌组织的表达显著高于癌旁组织,可能为肝癌的治疗带来一个新的方向。
简介:摘要目的观察三基序蛋白29(TRIM29)、三基序蛋白59(TRIM59)对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移能力的影响。方法以RNA干扰(RNAi)技术由病毒介导法构建稳定表达TRIM29以及TRIM59短发卡RNA(shRNA)的NSCLC细胞株。以实时荧光定量(Real-time PCR)法检测小干扰RNA(siRNA)干扰后的TRIM29以及TRIM59基因表达情况,采用细胞迁移(Transwell)小室法检测siRNA干扰后NSCLC细胞株的迁移能力,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC细胞中的人类直系同源物(Twist1)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。采用t检验。相关性分析采用皮尔逊(Pearson)法进行评价。结果TRIM29处理组、TRIM59处理组及联合处理组穿过基质膜的迁移细胞数均低于空白组、对照组,且联合处理组穿过基质膜的迁移细胞数低于TRIM29处理组、TRIM59处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。TRIM29处理组、联合处理组TRIM29 mRNA相对表达量低于空白组和对照组,而TRIM59处理组、联合处理TRIM59 mRNA相对表达量低于空白组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。TRIM29处理组、TRIM59处理组及联合处理组Twist1蛋白相对表达量均低于空白组、对照组,且联合处理组Twist1蛋白相对表达量低于TRIM29处理组、TRIM59处理组;TRIM29处理组、TRIM59处理组及联合处理组E-cadherin蛋白相对表达量均高于空白组、对照组,且联合处理组Twist1蛋白相对表达量高于TRIM29处理组、TRIM59处理组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经皮尔逊(Pearson)相关性分析可得,TRIM29、TRIM59 mRNA相对表达量和Twist1蛋白相对表达量均呈正相关,而与E-cadherin蛋白相对表达量呈负相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TRIM29、TRIM59对NSCLC迁移能力具有积极促进作用,其主要作用可能和调控Twist1、E-cadherin蛋白表达有关。
简介:非谓语动词是高中英语中非常重要的一个知识块。它不仅在单项填空中所占比例较大,同时也是短文改错的必考考点。另外,在阅读理解和完形填空的短文中,正确理解其中的非谓语动词也往往是答好题目的一个重要因素。本期我们推出这个非谓语动词专题,主要为同学们介绍非谓语动词的几个命题热点以及同学们可能遇到的几个难点。值得说明的是,动词后接另一动词作宾语时该用不定式还是动名词这一问题,本来是一个非常重要的高考考点,但本期专题没有涉及,是因为我们在上一期(2007年第11期)已刊发了一篇《非谓语动词作宾语的四种类型》的文章,同学们若想了解有关知识,可参考该期内容。