护肝片质量标准研究

刘晓燕

摘要：目的确定新工艺、新方法生产的护肝片质量符合相关质量标准，判断新工艺、新方法的可行性。方法利用包层光谱鉴定法对护肝片中的五味子、猪胆粉、柴胡等有效物质进行鉴别。并利用高效液相色谱法对五味子醇甲含量进行测定。结果供试品特征斑点清晰且与对照品一致，与阴性样品不同，五味子醇甲含量约为50mg/片。结论新工艺生产的护肝片符合相关质量标准。

关键词：护肝片；质量标准；工艺

前言：

护肝片是一种治疗慢性肝炎以及早期肝硬化的重要中医药配方。同时，它还是被收录在《中国药典》的一种基本药物配方，在我国慢性肝炎以及早期肝硬化治疗中具有重要意义。随着科技的快速发展，护肝片已经进入标准化、大规模生产的时代[1]。在这样的时代背景下做好护肝片质量标准研究工作，为相关医药公司提供更为科学合理的质量标准具有重要意义。

1影响护肝片质量的具体内容

护肝片是一种利用重要萃取技术结合现代化大规模生产的药物。一般来说影响护肝片质量的因素主要有萃取技术、包合技术以及薄膜包衣的加工工艺。目前常用的萃取技术为临界二氧化碳萃取法，常用的包合技术为β-环糊精包合技术。这些新工艺的投入使用有效弥补了传统工艺中存在的不足，提高护肝片的产品质量。为了制定新工艺下的护肝片产品质量，我们对护肝片的主要组成成分柴胡、五味子、猪胆粉等进行含量检测。所使用的主要方法为HPLC检测法。

2实验所需的试药以及仪器

在实验过程中，我们将主要用到以下设备：C18柱、高效液相色谱仪、电热恒温水浴锅、电子天平、毛细管。所需要的试药为利用新工艺生产的护肝片。所需参照品具体有：五味子醇甲对照品、五味子乙素对照品、柴胡皂苷d对照品、猪去氧胆酸对照品。以上所需的所有对照品均有专业的药品、生物品鉴定所提供。此外，还需要适量的猪胆粉、五味子、柴胡、橄榄根、茵陈、绿豆、蒸馏水、甲醇色谱等物品。

3实验方法分析

为确保护肝片的质量标准科学有效，本实验中所涉及的所有实验方法都必须按照相关技术标准进行。其中所涉及到的主要方法有重量差异检查法、薄层色谱鉴别法。重量差异检查法是根据相关标准对护肝片的重量差异进行鉴别，从而促使护肝片的质量符合相关规定。

利用薄层色谱鉴别法对护肝片各物质含量进行检查主要是对包括五味子、柴胡、猪胆粉等物在内的各有效物质进行检查。

3.1对五味子有效物质进行薄层色谱鉴别

将10片利用新工艺、新技术制作而成的护肝片去除薄膜包衣，研磨成粉，使用电子天平秤2.5g，置于烧杯，加50ml正乙烷静置。第二日加热至80℃～85℃，回流2小时。将混合液进行过滤，药渣单独存放以便后续使用。将滤液用低温蒸干，取2ml乙酸乙酯加入，制成供试品溶液[2]。取等量不含有五味子的阴性样品，制成阴性样品溶液。取1g五味子乙素对照品加入1L甲醇液体中，摇晃均匀备用，制成对照品溶液。按照《中国药典》所记载方法分别取上述溶液2μl，分别点在同一个硅胶薄层板上，利用甲苯-乙酸乙酯作为展开剂，展开后晾干，利用紫外线灯光进行检查。我们可以发现，供试品溶液中与对照品相应位置上的斑点颜色相同，与阴性样品检测结果不同。

3.2对柴胡有效物质进行薄层色谱鉴别

取18g护肝片，去除薄膜包衣，研磨成粉后加入35ml甲醇。对混合液进行加热回流30分钟，进行过滤。将残渣置于15ml水中进行溶解，振摇提取溶液，每次15ml，共计3次，制作成正丁醇液，加入相同体积氨试液，摇匀后静置，待分层结束后，分离出上层，回收正丁醇直至残渣完全变干，再取甲醇1ml进行溶解，从而制成供试品溶液。取不含有柴胡的阴性样品利用相同操作方法制成阴性样品溶液。取适量柴胡皂苷a与柴胡皂苷b对照品制作对照溶液。分别取上述溶液各5μl点于硅胶G薄层板上，并用乙酸乙酯-乙醇-水作为展开剂，晾干后喷含有二甲氨基苯甲醛的硫酸溶液，60℃环境下加热至斑点出现，利用紫外线光灯进行检查，可以发现供试品与对照品相同位置颜色相同，与阴性样品颜色表现不同。

3.3对猪胆粉有效成分进行薄层色谱鉴别

本实验所使用材料为进行五味子有效成分鉴定时的药渣。取0.5g药渣，待正乙烷挥发完全后，加入5ml含10%的氢氧化钠溶液，在120℃的条件下进行水解4小时，冷却完全后利用盐酸溶液调节pH值，直至pH值显示为2～3，转入离心管，水洗液同样加入离心管内。离心操作取出上清液，添加20ml乙酸乙酯进行振摇提取操作，将提取液放置于水浴上进行蒸干，将残渣加入到5ml的乙醇中进行溶解，从而制成供试品溶液。取不含有猪胆粉的阴性样品利用相同的方法制作阴性样品溶液。取猪去氧胆酸对照品，制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液使用。按照相关规定取每种溶液各5μl分别点于统一硅胶G薄层板上，使用异辛烷-乙醚-正丁醇-冰醋酸-水的上层溶液作为展开剂，待展开后晾干[3]。晾干后喷以含10%硫酸的乙醇溶液，在105℃环境下加热至斑点出现。利用紫外光灯进行检查。通过观察我们可以发现供试品溶液与对照品相同位置上的颜色相同，与阴性样品不相同。

4对照试验分析

在以上三组实验中，我们可以发现，利用新工艺、新方法制造的护肝片在薄层色谱鉴别操作下呈现出与有效物质五味子乙素对照品、柴胡皂苷a与柴胡皂苷b、猪去氧胆酸对照品相同的光谱反应。对此，我们可以得出结论利用新工艺、新方法制作的护肝片含有各项中药有效物质。然而，在确定新工艺制作的护肝片是否符合相应质量标准时，我们还需要对五味子醇甲的含量进行测定分析。

5含量测定实验

取五味子醇甲对照品制成0.1025mg/ml的对照品溶液。取研磨后的护肝片样本2.5g，加入25ml乙酸乙酯，加热回流、冷却、过滤，洗涤溶液后将洗液与滤液进行混合，加热至完全蒸干，利用甲醇溶解后加入10ml量瓶中添加10ml甲醇进行摇匀过滤等操作。相同方法制作阴性样品溶液。制作含量为0.205mg/ml的溶液，分别将不同含量的液体加入甲醇至10ml，利用不同浓度的对照品溶液进行对比，确定五味子醇甲含量。根据2005年出版的《中国药典》，每片护肝片的五味子醇甲含量不得少于0.28mg，据此，可以准确判断出新工艺的护肝片质量是否符合标准。

结语：

对新工艺生产的护肝片进行有效成分鉴别以及含量测定是判断护肝片是否有效的重要依据。对此，我们必须根据《中国药典》的相关检测规定，进行科学检测。首先利用薄层色谱鉴别对五味子、柴胡、猪胆粉等有效成分进行鉴别，然后对五味子醇甲的含量进行科学检测，最终确定新工艺护肝片是否符合相关标准。

参考文献

[1]孙黎明，梁军，王杰姝，等.护肝片中5种木脂素成分的高效液相-荧光检测研究[J].中医药学报，2015（3)：13-16.

[2]柴振平，黄占周，何丽娟，等.护肝片薄膜包衣工艺研究[J].中国医院用药评价与分析，2016，16（6)：803-805.

[3]卫亚洁，张泽坤，关彦玲，等.护肝片高效液相色谱指纹图谱及多成分定量分析研究[J].中南药学，2018（1)：31-34.

课题编号：GZD1317046

黑龙江省青年专项课题

课题名称：高职院校药品质量检测技术课程虚拟仿真实验教学项目建设研究与实践。