黄芩中有效成分的提取工艺探讨

周现军(河南省安阳市中医药学校河南安阳45500

【关键词】黄芩渗漉法连续回流提取法多靶点多部位有效部位群

黄芩为常用的清热燥湿药,广泛用于湿热证和热毒证,具有显著疗效。近年来的研究表明,黄芩还有降血糖、抗癌等药理作用。黄芩的主要成分有:黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷和汉黄芩素等。本试验在黄芩苷和黄芩素等的定量基础上,对其提取工艺进行了探讨。

1材料与仪器

1.1材料

黄芩购于安阳市药材站，经鉴定为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根。黄芩苷（批号：0315—9345）、黄芩素（批号：0315—8965）对照品购于郑州市药材总公司。汉黄芩苷（批号：6902—8975）和汉黄芩素（批号：6903—8762）对照品购于邯郸市药材站。

1.2仪器

索氏提取器（郑州市化学仪器厂）、渗漉筒（郑州市化学仪器厂）、色谱柱LiChrosorbRp—C18（150mm×4mm，5μm）［Waters公司］、色谱柱Shim-PackCLC-ODS（150mm×5mm）［Waters公司］

2方法与结果

2.1提取液的制备

2.1.1煎煮法取500g黄芩粗粉，加5倍量水煎煮2次，每次40分钟，提取液浓缩至500ml。

2.1.2渗漉法取500g黄芩粗粉，加5倍量80％乙醇渗漉，渗漉液减压蒸馏浓缩至500ml。

2.1.3浸渍法取500g黄芩粗粉，加5倍量水浸泡2次，每次1天，浸出液合并浓缩至500ml。

2.1.4连续回流提取法：取黄芩粗粉500g，加5倍量乙醚，用索氏提取器连续提取10小时，提取液浓缩至500ml。

2.2标准曲线的制备

2.2.1黄芩苷、黄芩素标准曲线的制备分别精密称取黄芩苷、黄芩素0.3500g、0.2500g分别置于10ml量筒中，加甲醇至刻度，分别精密量取2ml，置20ml量筒中，加甲醇至刻度，分别吸取2、4、6、8、10、12、14μl进样，色谱条件为：色谱柱LiChrosorbRp—C18（150mm×4mm，5μm）；流动相为甲醇—2.5％醋酸，检测波长为270nm，以峰面积（Y）对进样量（X）回归，得回归方程，黄芩苷的回归方程：Y=936.9567163X－0.5634721，r=0.99998，黄芩素的回归方程：Y=1025.X+2.354687,r=0.99999，黄芩苷量在0.158—1.256μg与峰面积呈良好的线性关系，黄芩素量在0.145—1.030μg与峰面积呈良好线性关系。

2.2.2汉黄芩苷、汉黄芩素工作曲线的制备

分别精密称取汉黄芩苷、汉黄芩素对照品0.0150g、0.0230g，分别溶于50ml甲醇溶液中，分别取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，溶于10ml量筒，加甲醇至刻度，分别取5μl进样，色谱条件：Shim—PackCLC—ODS（150mm×5mm）柱，甲醇—水—0.2％醋酸钠（100：100：50）为流动相，检测波长为300nm，以峰面积Y对进样量X（μg）回归，得回归方程，汉黄芩苷的回归方程Y=351678.41X－4512.36，r=0.9918,汉黄芩素的回归方程Y=68057.13X－36365.39，r=0.9898。

2.3供试品溶液的制备

2.3.1分别取4种方法的提取液各50ml，分别用150ml氯仿萃取3次，回收氯仿，残渣置20ml量筒中，用甲醇溶解，并加至刻度，过滤，用于测定黄芩苷和黄芩素。

2.3.2分别取4种方法的提取液各50ml，调节PH值为2.5，分别用200ml石油醚萃取3次，母液用NaOH调节PH值为8.5—9.8，用150ml石油醚萃取3次，向萃取液中滴加浓HCl至PH值为3.5回收石油醚，残渣置50ml量筒中，用甲醇溶解并加至刻度，过滤，用于测定汉黄芩苷和汉黄芩素。

2.4提取方法的比较

将各供试品溶液按照各成分标准曲线下条件进行测定，结果见表1。

表一不同提取方法对提取效果的影响

方法黄芩苷黄芩素汉黄芩苷汉黄芩素

(mg/g)(mg/g)(mg/g)(mg/g)

煎煮法3.35612.53620.48360.1597

渗漉法4.15132.78961.03050.3841

连续回流提取法6.78764.21531.16760.9392

浸渍法2.85192.76310.58620.3365

2．5确立综合评判方法

把各成分权重定为0.25，确定出综合评判公式:G=0.25X/Xmax+0.25Y/Ymax+0.25Z/Zmax+0.25W/Wmax，式中X、Y、Z、W分别为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷和汉黄芩素的提取率（mg/g）。

对表1中数据进行处理，可知四种方法的G值顺序为：连续回流提取法＞渗漉法＞煎煮法＞浸渍法，连续回流提取法提取出的各种成分远高于其它三种方法，故确定提取黄芩的最佳方法为连续回流提取法。

2.6筛选提取条件

以黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素为指标，以乙醚为溶媒，选择影响连续回流提取法的主要因素：乙醚的体积分数、提取时间、溶媒用量、药材粉碎度，设计9个水平，选用U9（96）表安排试验，筛选最佳提取条件，测定各实验结果的提取率和G值，详细结果见表2，同时，将数据进行处理后，其结果为G=0.753128+0.004123A-0.003426B-0.005381C-0.002687D,P=0.0289＜0.05，方程有意义

表二U9均匀设计结果（n=3）

15052108.83653.12530.56760.26330.4035

25563109.67104.23560.49170.25300.5122

360742010.56705.16780.58970.36980.6283

465852012.69716.23580.51290.26870.6856

570963013.19258.36540.53370.46320.7012

6801073016.98718.96520.75160.68160.8970

7851284015.87957.69850.86930.65940.7982

8901494014.36927.23150.75640.56870.7956

99516105014.36958.36240.79540.69520.7835

根据均匀设计的特性，最优的实验结果与优化结果最为靠近，由表2可知，6号实验为优化组合，结果表明，乙醚的体积分数和提取时间对提取效率影响最大，而溶媒用量影响不大，药材的粉碎度不能太大，也不能太小，结合实际，将最优实验条件定为：用6倍量85％乙醚，药材粉碎过30目筛，提取12小时。将该实验与6号实验平行进行，结果见表3

表三对比实验

组别A％B/hC/倍D/目Xmg/gYmg/gZmg/gWmg/gG

优化实验801073016.98718.96520.75160.68160.8970

最优实验851263017.15049.05620.86320.71240.9018

3讨论

3.1黄芩苷和黄芩素是黄芩中的主要有效成分，其含量高，活性强，具有重要的药理作用，在评价黄芩质量上有重要意义。

3.2在不同条件下各类有效成分的提取效果具有显著差异，这说明单纯以某一指标成分来评价提取工艺均不全面，甚至会得出相反的结论。

3.3在用索氏提取器连续回流提取过程中，曾用乙醇和氯仿为溶媒进行提取，但出现大量油状物，且杂质峰较多。换用乙醚后，有效的避免了这些问题。

参考文献

[1]郑虎占.中药现代研究与应用（第一卷）［M］.北京：学苑出版社，1996,562-571,597-620.

[2]中华人民共和国药典（二部）.北京：化学工业出版社，2000.113.

[3]刘继勇.均匀设计法优选痹痛宁贴剂的处方基质配比.中草药，2005,36(2):202-205.