简介：摘要目的分析血红素加氧酶-1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对肝移植急性排斥反应大鼠肠道屏障功能的影响。方法无特定病原体4~5周龄、40~60 g雄性Brown Norway(BN)大鼠2只提取BMMSCs，通过腺病毒转导HO-1；24只7~8周龄、200~220 g雄性Lewis大鼠为供体，30只8~9周龄、220~240 g雄性BN大鼠为受体，"二袖套"法建立原位肝移植急性排斥反应模型。BN大鼠随机分为5组：Sham组仅开腹关腹；NMP组供肝NMP 4 h；BMP组供肝NMP 4 h+门静脉灌注BMMSCs；HBP组供肝同BMP组，但灌注HO-1/BMMSCs；FK506组供肝NMP 4 h，肝移植术后灌胃他克莫司，每组6只。术后第14天取材检测并计算排斥活动指数(RAI)，HE染色及透射电镜分别观察肠道病理改变和超微结构，Western印迹检测肠道组织紧密连接蛋白表达，酶联免疫吸附法检测血清脂多糖、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)。结果HBP组、FK506组RAI为(2.80±0.84)分、(2.20±0.84)分，显著低于NMP组(7.60±1.14)分、BMP组(6.00±1.58)分，差异均有统计学意义(均P<0.05)。肠道HE染色NMP组肠绒毛明显稀疏、皱缩，排列杂乱，BMP组、HBP组、FK506组较NMP组肠道损伤程度减轻。电镜观察HBP组肠上皮细胞微绒毛丰富且排列整齐，细胞间紧密连接结构完整。Western印迹检测闭锁小带-1相对表达，HBP组(0.87±0.06)，高于NMP组(0.41±0.12)和FK506组(0.52±0.15)；闭合蛋白相对表达HBP组(1.28±0.26)，高于NMP组(0.27±0.18)和FK506组(0.63±0.22)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。HBP组血清脂多糖、D-乳酸和DAO浓度均低于NMP组、FK506组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HO-1/BMMSCs联合NMP可以保护肝移植术后急性排斥反应BN大鼠的肠道屏障功能。

简介：摘要目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对肝硬化大鼠肠道菌群的影响。方法2019年3月至9月，选取115只SD大鼠(军事医学科学院实验动物中心提供)腹腔注射四氯化碳(CCL4)建立肝硬化模型后，采用随机数表法分组方式分为模型组、BMSCs组及小檗碱组，分别注射磷酸缓冲盐溶液(PBS)、BMSCs及小檗碱灌胃处理，另选取10只大鼠作为对照组，干预后处死各组大鼠，苏木精-伊红(HE)及天狼星红染色检测肝脏组织病理学改变，生化分析仪检测血清白蛋白(ALB)与总胆红素(TBIL)，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清层黏连蛋白(LN)含量变化；采集各组大鼠粪便标本，对细菌16S rDNA基因V3～V4区进行聚合酶链式反应(PCR)扩增，并进行高通量测序，两组间数据比较采用独立样本t检验，3组数据间比较采用单因素方差分析。结果BMSCs组大鼠肝组织Ishak评分及分期[(4.00±0.63)分、4.50±0.55]均低于模型组[(7.83±0.75)分、5.83±0.41]，差异有统计学意义(t＝3.833、1.333，P<0.05)；BMSCs组大鼠血清ALB含量[(29.65±1.38) g/L]高于模型组[(22.76±2.67) g/L]，差异有统计学意义(t＝6.882，P<0.05)；TBIL及LN的含量[(3.09±0.25) μmol/L、(45.19±1.86) ng/ml]均低于模型组[(10.75±1.14) μmol/L、(56.69±2.00) ng/ml]，差异有统计学意义(t＝7.658、11.497，P<0.05)；BMSCs组大鼠肠道菌群中脱硫弧菌科及脱硫弧菌属丰度明显高于模型组，梭菌科及梭状芽胞菌属丰度明显低于模型组。结论BMSCs移植治疗可以有效改善肝硬化大鼠的肝功能及肝纤维化程度，其机制可能与调节其肠道菌群有关。

简介：摘要目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对肝移植急性排斥反应大鼠肠道菌群的影响。方法2020年4月至10月，选取24只雄性Lewis大鼠为供体，24只雄性Brown Norway大鼠为受体，"二袖套"法建立大鼠肝移植急性排斥反应模型，根据以下处理肝脏方法将大鼠分为四组：假手术组(Sham组)、NMP组(NMP组)、NMP/BMSCs组(BMP组)和他克莫司组(FK506组)，在术后第7天处死各组大鼠，苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理学；生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量；酶联免疫吸附测定(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测血清和肠道组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量；对各组大鼠粪便标本进行高通量测序，获得16SrDNA数据。两组间数据比较采用独立样本t检验，多组数据比较采用单因素方差分析。结果BMP组肝窦内充血、炎性细胞浸润程度减轻；排斥活动指数(RAI)(4.17±0.75)低于NMP组(7.67±0.82，t＝7.720，P<0.05)，差异有统计学意义；血清ALT、AST和ALP[(254.02±35.55) U/L、(457.42±131.22) U/L、(169.60±65.61) U/L]水平低于NMP组[(362.22±57.73) U/L、(741.67±87.19) U/L、(269.93±43.51) U/L，t＝3.909、4.419、3.196P<0.05]，差异有统计学意义；肠道菌群丰度增加，变形菌门占比下降，阿克曼菌科占比上升，花生四烯酸代谢、上皮细胞的细菌侵袭通路丰度下降；血液中炎性因子TNF-α和IL-6[(66.01±12.46) pg/ml、(130.3±9.67) pg/ml]浓度低于NMP组[(127.1±17.85) pg/ml、(169.9±8.25) pg/ml，t＝6.276、6.975，P<0.05]，差异有统计学意义；肠组织中炎性因子TNF-α和IL-6[(1.85±0.17)、(3.47±0.22)]的mRNA水平低于NMP组[(2.71±0.34)、(9.45±1.34)，t＝3.955、7.604，P<0.05]，差异有统计学意义。结论BMSCs联合NMP可以减轻大鼠肝移植术后急性排斥反应，同时对大鼠肠道菌群紊乱具有调节作用。