简介：摘要目的初步建立抗新型冠状病毒受体结合域(receptor-binding domain, RBD)IgG定量ELISA检测方法，用于COVID-19静注人免疫球蛋白生产中原料血浆、原液和成品的效价检测。方法将已知的具有中和活性的COVID-19康复者恢复期血浆作为参比标准品，选用RBD抗原包被的间接ELISA试剂盒，采用双对数拟合曲线建立定量ELISA，确定其最佳线性范围；制备室内质控品，并对其进行标定；对该方法进行稀释线性、平行性、准确度、精密度验证。用建立的方法对3批COVID-19静注人免疫球蛋白的原料血浆、原液及成品进行检测，并与化学发光法及中和实验结果进行相关性分析。结果确定标准曲线线性范围为稀释倍数1~8、批内准确度88.50%~108.58%，批间准确度100.63%~103.98%；批内精密度3.83%~14.68%，批间精密度5.67%~13.15%；标准品和原料血浆、原液、半成品的平行性好。ELISA效价与化学发光法及中和实验相关性较好。结论成功建立抗新型冠状病毒RBD IgG定量ELISA检测方法，可用于COVID-19静注人免疫球蛋白的效价检测，作为内部放行方法。

简介：摘要目的探讨COVID-19康复者恢复期血浆及COVID-19静注人免疫球蛋白(human intravenous immunoglobulin，IVIG)(COVID-19-IVIG)IgG及亚类的水平。方法选择2020年2月至3月国药集团武汉血液制品有限公司采集的COVID-19康复者恢复期血浆及制备的COVID-19-IVIG作为研究组，选择健康者单采血浆及IVIG作为对照组。采用免疫比浊法检测并比较免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)及IgG亚类水平。分析COVID-19-IVIG中IgG亚类与其他蛋白之间的相关性。结果健康者单采血浆的IgG3、IgG4水平显著高于恢复期血浆(P<0.05)，但IgG1、IgG2水平差异无统计学意义(P>0.05)。恢复期血浆IgM水平与血型〔相关系数(r)＝0.649〕、抗体效价(r＝0.696)呈正相关(P<0.05)，IgG1(r＝0.745)、IgG2(r＝0.952)水平与IgG呈正相关(P<0.05)。COVID-19-IVIG的IgG1/∑4i=1 IgGn显著高于恢复期血浆(t＝3.633，P<0.05)，而IgG4/∑4i=1 IgGn显著低于康复者混合血浆(t＝-4.899, P<0.05)，两组间IgG2/∑4i=1 IgGn和IgG3/∑4i=1 IgGn差异无统计学意义(t值分别为-0.974和-0.280，P值均大于0.05)。COVID-19-IVIG与IVIG的IgG亚类分布差异无统计学意义(P>0.05)。在COVID-19-IVIG中，仅IgG2水平与α2巨球蛋白呈负相关(P<0.05)。结论恢复期血浆IgG亚类水平与健康者单采血浆有一定差异。COVID-19-IVIG制备过程中存在IgG亚类水平的变化，COVID-19-IVIG IgG亚类齐全，与IVIG IgG亚类水平相近。

简介：摘要目的考察包被不同种类的胶体金标记(金标)抗原对抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)抗体快速检测测试卡检测质量的影响。方法采用抗2019-nCoV抗体样本盘检测厂家L包被有不同金标抗原的胶体金测试卡，比较产品的灵敏度、特异度、准确度和正确指数，暂时以准确度>95%、正确指数>0.85为合格标准。结果厂家L的6个批次分别包被有重组2019-nCoV的刺突(spike，S)+核衣壳(nucleocapsid，N)蛋白(L002)、受体结合域(receptor-binding domain，RBD)+N蛋白(L003)、N蛋白(L004)、RBD蛋白(L006)、S蛋白(L007)、N+S蛋白(L008)的测试卡，检测IgG的准确度/正确指数分别为98.38%/0.966、97.30%/0.946、97.84%/0.954、90.82%/0.873、97.86%/0.958、95.72%/0.919；检测IgM的准确度/正确指数分别为90.51%/0.736、95.57%/0.890、73.10%/0.298、68.37%/0.331、83.96%/0.533、87.17%/0.658。结论所有金标抗原包被的测试卡检测IgG均合格，只有RBD与N蛋白组合的包被金标抗原测试卡检测IgM合格，通过优化包被的金标抗原种类可提高测试卡检测IgM的质量。

简介：摘要目的建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)灭活血浆的工艺及其质量标准。方法采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆，开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查，进行亚甲蓝光照灭活，并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等，判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化，血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml，抗体滴度未出现明显下降，各项检测结果均符合质量要求。结论确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。

简介：摘要目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况，并结合试剂盒要求，建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时荧光定量PCR检测方法，并从专属性、检测限(limit of detection, LOD)、重复性及中间精密度对该方法进行系统性的验证，对20份COVID-19康复者恢复期血浆样本进行性能确认。结果专属性：阳性样本及阴性样本均能被有效检出；检测限：1×LOD～2×LOD企业参考品19次检测开放阅读框1a/b和/或核衣壳蛋白基因为阳性；重复性和中间精密度：两种阳性对照基因以及内部质控在不同荧光通道的循环阈值的相对标准偏差均符合要求。性能确认：康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测结果均为阴性。结论该检测方法专属性强、稳定可靠、重复性好，适用于COVID-19康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测。

简介：摘要目的探讨pH值、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)含量和离心条件对PEG4000粉末用于去除人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor，C1-INH)制备原料中的IgM效果的影响，并通过对羧甲基(carboxymethyl，CM)离子交换层析中洗脱盐离子浓度的筛选，分离活性与非活性C1-INH。方法向不同pH值的C1-INH制备原料中加入不同质量分数的PEG4000，于不同条件下离心后，用特定蛋白检测仪对离心后上清液中IgM和C1-INH含量进行检测，确定PEG沉淀法纯化C1-INH的最佳条件。将离心后上清液调节pH后作为CM离子交换层析上样样品，使用不同盐离子浓度的洗脱液对活性C1-INH进行分离，确定最佳的盐离子浓度。结果在弱酸性pH(6.8)下，当PEG4000质量分数为12%，离心条件15 000×g、25 ℃、20 min时，IgM去除率>99%，且C1-INH的回收率>80%；在盐离子浓度为200 mmol/L时，产物中C1-INH的比活性最大(4.43 IU/mg)，且绝大多数杂质蛋白得以去除。结论优化条件下，PEG4000能有效去除C1-INH制备原料中的IgM，且能保持较高的C1-INH回收率；CM离子交换层析能对活性与非活性C1-INH进行有效分离，并去除大多数杂质蛋白。