简介：摘要目的观察大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用。方法选用小鼠GC-1精原细胞，设置对照组(A组)、对照＋大黄素组(B组)、模型组(C组)、模型＋大黄素组(D组)。C组和D组加入氯化钴(CoCl2)至终质量浓度为100 μmol/L，然后培养细胞24 h构建精索静脉曲张缺氧模型。B组和C组加入大黄素至终质量浓度为40 μmol/L。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法及流式细胞仪测定细胞凋亡水平，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白质表达水平，采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞Caspace-3和bax的基因表达水平，组间比较采取t检验。结果CCK-8实验示C组和D组细胞存活率低于A组[(51.70±3.52)%、(77.84±5.18)%比(100.00±0.00)%，t＝23.767、7.410，P值均<0.05]，差异有统计学意义，且D组细胞存活率高于C组[(77.84±5.18)%比(51.70±3.52)%，t＝7.229，P<0.05]，差异有统计学意义。流式实验示D组凋亡细胞比例低于C组[(10.54±0.68)%比(21.23±1.01)%，t＝15.207，P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot结果示D组Caspace-3和bax蛋白表达水平低于C组(0.713±0.020、0.819±0.022比1.134±0.025、1.271±0.019，t＝22.722、26.813，P值均<0.05)，差异有统计学意义。RT-qPCR结果示D组Caspace-3和bax表达水平低于C组(1.52±0.18、1.80±0.21比3.53±0.23、4.27±0.31，t＝11.920、11.426，P值均<0.05)，差异有统计学意义。结论大黄素通过抑制细胞凋亡对精索静脉曲张缺氧模型的精原细胞起保护作用。

简介：摘要目的探讨甘油-3-磷酸脱氢酶1-样酶(GPD1L)对肾透明细胞癌的影响及其机制。方法选择来自肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因表达综合(GEO)的两个主要的微阵列数据库(GSE16441、GSE36895、GSE53757、GSE66270、GSE68417)，探讨在肾透明细胞癌(ccRCC)肿瘤样本中低表达基因，并进行生存分析。选择与患者生存差异最显著的基因GPD1L进行体外验证。体外培养正常人肾小管上皮细胞HK-2及ACHN、786-O、769-P 3种人肾细胞癌细胞株，利用聚合酶链反应(PCR)和Western blot验证GPD1L在肾癌细胞株中的表达量。利用GSE16441微阵列数据进行GPD1L的单基因富集分析，观察GPD1L参与调控的相关通路。随后利用pcDNA3.1过表达质粒，过表达ACHN、769-P肾癌细胞中GPD1L的表达，利用划痕、原位缺口末端标记法(TUNEL)、流式细胞术和Western blot探讨GPD1L对肾癌细胞迁移、凋亡的影响。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。结果对5个ccRCC微阵列数据集的综合分析确定了ccRCC中SLC4A1、GPD1L、CLCNKB 3个显著的低表达基因，并且这3个基因的表达量均与患者的生存时间呈正相关(P<0.05)。PCR和Western blot结果表明，在ACHN、786-O、769-P 3种细胞株中，GPD1L mRNA和蛋白的表达水平显著低于HK-2细胞(转录表达值：0.163±0.067比1.000±0.124，t＝7.838，P<0.01；0.338±0.171比1.000±0.124，t＝6.982，P<0.01；0.626±0.147比1.000±0.124，t＝5.632，P<0.05)。Western blot结果显示，在ACHN、769-P肾癌细胞中，pcDNA-GPD1L组GPD1L蛋白的表达量明显高于pcDNA-Vector组(条带相对灰度值：2.343±0.371比1.000±0.122，t＝5.776，P<0.01；3.207±0.537比1.000±0.082，t＝6.224，P<0.01)；肾癌样本中GPD1L单基因GSEA富集分析显示凋亡相关通路被明显抑制。同时，pcDNA-GPD1L组细胞凋亡率明显高于pcDNA-Vector组[流式：(30.14±1.05)%比(5.20±1.21)%，t＝7.775，P<0.01；(28.54±2.13)%比(3.44±1.34)%，t＝6.862，P<0.01]，划痕结果也显示pcDNA-GPD1L组细胞增殖能力明显低于pcDNA-Vector组。结论过表达GPD1L能够通过激活肾透明细胞癌内的细胞凋亡，而抑制肾透明细胞癌的发展。

简介：摘要目的观察TGX-221对人膀胱癌的抗肿瘤作用效果，并探究其作用机制。方法选取人膀胱癌T24与5637细胞株作为研究对象。将T24及5637细胞分为PBS对照组、5和10 μmol/L TGX-221实验组，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度的TGX-221抑制肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC50)值，并同时检测对细胞活力的影响；使用细胞划痕实验和Transwell实验检测TGX-221对肿瘤细胞侵袭、迁移能力的抑制；使用流式细胞仪检验TGX-221干预对膀胱肿瘤细胞周期与细胞凋亡的影响，利用蛋白印迹法探寻干预后膀胱肿瘤细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)相关通路蛋白变化情况，研究可能的作用机制。两组之间的比较使用独立样本t检验，多组间比较使用单因素方差分析。结果TGX-221处理24 h后，5637、T24细胞株的半数致死浓度分别为15、30 μmol/L，实验组细胞增殖能力低于对照组[(66.81±4.12)%、(83.41±5.06)%比(100.00±5.65)%(5637细胞)；(78.71±5.75)%、(89.34±4.75)%比(100.00±4.50)%(T24细胞)]，实验组细胞迁移率显著降低[(34.10±3.29)%、(68.74±6.32)%比(100.00±1.52)%(5637细胞)；(69.78±6.06)%、(86.03±4.98)%比(100.00±6.55)%(T24细胞)]，实验组细胞侵袭能力显著降低[(18.44±5.17)个、(30.89±3.76)个比(51.22±4.84)个(5637细胞)；(50.33±6.26)个、(75.72±5.72)个比(101.11±8.91)个(T24细胞)]，细胞周期实验表明，实验组细胞周期大量停滞于G0及G1期[(72.40±2.22)%、(60.96±1.95)%比(45.00±3.15)%(5637细胞)；(65.88±3.05)%、(53.61±3.17)%比(43.61±1.26)%(T24细胞)]，实验组细胞凋亡率明显升高[(15.07±1.27)%、(9.93±0.97)%比(5.77±0.61)%(5637细胞)；(16.13±0.91)%、(11.06±1.19)%比(7.91±0.65)%(T24细胞)]，蛋白印迹实验中，实验组磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)等蛋白含量明显下调，B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白含明显上调。结论TGX-221可以抑制人膀胱癌5637与T24细胞的增殖、侵袭及迁移能力，抑制其细胞周期，促进细胞凋亡，其抑制侵袭及迁移能力的机制与蛋白激酶B(Akt)/β-catenin信号通路有关。

简介：摘要目的观察人软骨糖蛋白39(YKL-40)在肾透明细胞癌组织及外周血中表达水平，探讨其与预后的相关性。方法选取2014年1月30日至2016年6月30日武汉大学人民医院行肾透明细胞癌根治术的110例患者作为观察组、同期我院体检且体检结果正常者50例[男26例，女24例，年龄(46.7±5.5)岁]作为对照组。取术后新鲜肾透明细胞癌组织及癌旁组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测YKL-40 mRNA表达水平，应用SPSS 25.0统计软件分析。结果观察组术前外周血YKL-40水平[(186.9±15.7) μg/L]高于对照组[(115.1±12.5) μg/L]及手术后YKL-40水平[(146.3±13.5) μg/L，t＝20.565、28.478，P<0.05]，差异有统计学意义。外周血中YKL-40与淋巴结转移具有相关性(t＝5.047，P<0.05)。共98例患者完成随访，随访成功率为89.1%，中位随访时间为47.5个月，3年生存率为62.34%。外周血中YKL-40升高患者总生存期(OS)短于降低患者(χ2＝6.296，P<0.05)，差异有统计学意义，而癌组织中YKL-40升高与降低患者OS差异无统计学意义(χ2＝0.030，P>0.05)。多因素Cox分析显示，Fuhrman分级[OR(95%CI)：1.854(1.289～7.659)]、淋巴结转移[OR(95%CI)：2.335(1.359～10.656)]、外周血中YKL-40[OR(95%CI)：1.335(1.185～6.987)]是经手术治疗肾透明细胞癌OS的独立影响因素(P<0.05)，差异有统计学意义。结论肾透明细胞癌外周血中YKL-40水平升高，且与OS密切相关，可能成为其预后标志物。癌组织中YKL-40水平未见升高，血清YKL-40可能并非来源于癌细胞。

简介：摘要目的探讨微纤丝相关蛋白4(MFAP4)对肾透明细胞癌(ccRCC)的作用及其机制。方法2020年6月至2020年12月武汉大学人民医院泌尿外科收集的30对肾癌组织及细胞标本，通过实时定量免疫荧光PCR和免疫印迹方法检测MFAP4蛋白表达量；利用腺病毒构建过表达MFAP4稳转肿瘤细胞株，通过细胞迁移和侵袭实验检测MFAP4对ccRCC细胞株的影响，利用免疫荧光和免疫印迹技术检测MFAP4对ccRCC的作用机制。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验。结果在肾癌组织样本和肾肿瘤细胞株中MFAP4的转录水平(转录表达值：5.22±2.61比32.08±7.12，t＝17.68，P<0.05)和蛋白水平表达量(条带相对灰度值：1.00±0.01比2.30±0.25，t＝9.18，P<0.05)显著高于正常组。同时，MFAP4过表达组ccRCC侵袭细胞数量显著高于转染对照组(细胞数：907±63比1 997±101，t＝12.87，P<0.05；1 208±98比2 364±121，t＝15.87，P<0.05)，免疫荧光和免疫印迹结果提示，过表达MFAP4降低LC3B表达量(条带相对灰度值：1.00±0.01比0.65±0.08，t＝46.42，P<0.05；1.00±0.01比0.67±0.06，t＝26.46，P<0.05)，促进p62表达(条带相对灰度值：1.00±0.01比2.27±0.04，t＝7.93，P<0.05；1.00±0.01比2.17±0.08，t＝9.15，P<0.05)。结论MFAP4可能通过抑制细胞自噬促进肾癌进展。

简介：摘要目的探讨微小RNA-325(miRNA-325)在肾小管上皮细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型中的作用及其机制。方法选取人肾小管上皮细胞HK-2，建立适当的肾小管上皮细胞H/R模型(缺氧24 h复氧2 h)。将HK-2细胞分为对照组、H/R组、H/R+抑制剂(inhibitor)组和H/R+抑制剂阴性对照(inNC)，转染miRNA-325 inhibitor和inNC后进行缺氧复氧处理，然后进行后续实验。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测HK2细胞在H/R后活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)等的表达水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HK2细胞中miRNA-325、Caspase-3和XIAP mRNA表达水平。使用双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-325与XIAP 3’端非编码区(3’UTR)之间的关系。组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果H/R组细胞凋亡率高于对照组[(12.11±1.65)%比(3.88±0.24)%，t＝8.311，P<0.05]；H/R+Inhibitor组细胞凋亡率低于H/R组[(7.60±3.07)%比(12.11±1.65)%，t＝4.557，P<0.05]。Western blot结果显示，实验组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)、(0.63±0.01)、(0.61±0.02)比(0.41±0.01)，F＝212.095，P<0.05]和bax[(0.53±0.02)、(0.63±0.01)、(0.64±0.04)比(0.41±0.02)，F＝105.138，P<0.05]蛋白表达量显著高于对照组，bcl-2[(0.57±0.02)、(0.52±0.02)、(0.49±0.01)比(0.62±0.02)，F＝89.498，P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)、(0.24±0.03)、(0.24±0.01)比(0.33±0.03)，F＝27.575，P<0.05]表达量显著低于对照组；H/R+Inhibitor组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)比(0.61±0.02)，t＝11.437，P<0.05]和bax[(0.53±0.02)比(0.64±0.04)，t＝7.253，P<0.05]的表达低于H/R组，bcl-2[(0.57±0.02)比(0.49±0.01)，t＝9.471，P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)比(0.24±0.01)，t＝4.231，P<0.05]的表达量高于H/R组，差异均有统计学意义。qRT-PCR结果显示，实验组miRNA-325[(7.27±0.30)、(4.66±0.21)、(7.11±0.25)比(1.05±0.13)，F＝1453.045，P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.52±0.05)、(1.26±0.06)、(1.53±0.05)比(1.00±0.01)，F＝241.375，P<0.05]表达水平显著高于对照组，而XIAP mRNA[(0.38±0.01)、(0.76±0.02)、(0.39±0.02)比(1.01±0.02)，F＝2569.583，P<0.05]表达低于对照组；H/R+Inhibitor组miRNA-325[(4.66±0.21)比(7.27±0.30)，t＝24.236，P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.26±0.06)比(1.52±0.05)，t＝11.451，P<0.05]低于H/R组，而XIAP mRNA[(0.76±0.02)比(0.38±0.01)，t＝45.678，P<0.05]高于H/R组，差异均有统计学意义。荧光素酶活性检测表明共转染miRNA-325的野生型组酶活性低于对照组[(0.69±0.03)比(1.01±0.02)，t＝22.809，P<0.05]，而突变型组酶活性无明显变化[(1.04±0.11)比(0.99±0.06)，t＝0.983，P>0.05]。结论XIAP是miRNA-325的靶基因之一，抑制miRNA-325可以下调凋亡蛋白的表达，降低细胞凋亡率，从而保护肾小管上皮细胞。

简介：摘要目的探究RNA结合蛋白FOX1(RBFOX1)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧(H/R)模型中对细胞氧化应激及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法构建HK-2细胞缺氧/复氧(缺氧16 h，复氧4 h)模型，实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测RBFOX1的基因表达水平。将HK2细胞随机分为Control组、H/R组、H/R+NC组、H/R+RBFOX1组；Control组细胞正常培养，H/R+NC组和H/R+RBFOX1组分别转染对照质粒及RBFOX1过表达质粒后行缺氧/复氧处理。比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性；流式细胞仪检测各组细胞中活性氧(ROS)的含量；流式细胞术检测各组细胞凋亡水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测各组RBFOX1、Nrf2、磷酸化Nrf2(p-Nrf2)及HO-1的蛋白表达水平。多组差异比较采用单因素方差分析，两两比较采用单样本t检验。结果RT-qPCR结果显示缺氧/复氧处理后的HK-2细胞RBFOX1基因的表达量低于Control组(0.357±0.022比1.000±0.000，t＝28.979，P<0.01)。Western blot结果也显示H/R组的RBFOX1表达量低于Control组(0.515±0.038比0.734±0.023，t＝4.955，P<0.01)。H/R+RBFOX1组RBFOX1(0.942±0.074比0.515±0.038、0.629±0.080，F＝10.932，P<0.05)、HO-1(0.839±0.068比0.638±0.033、0.622±0.052，F＝5.167，P<0.05)的蛋白表达水平及p-Nrf2/Nrf2比值(0.864±0.034比0.577±0.047、0.541±0.058，F＝13.896，P<0.01)明显高于H/R组和H/R+NC组，与Control组差异无统计学意义(P>0.05)。ROS流式检测结果表明H/R+RBFOX1组的活性氧水平明显低于H/R组和H/R+NC组[(5.25±0.10)%比(8.98±0.12)%、(9.76±0.21)%，F＝248.098，P<0.01]；MDA酶标仪检测结果显示H/R+RBFOX1组的MDA含量明显低于H/R组和H/R+NC组(3.506±0.098比5.034±0.087、5.176±0.089，F＝102.103，P<0.01)；SOD酶标仪检测结果显示H/R+RBFOX1组内的SOD活性高于H/R组和H/R+NC组(0.415±0.011比0.215±0.003、0.250±0.030，F＝32.681，P<0.01)。细胞凋亡流式检测结果表明H/R+RBFOX1组的细胞凋亡水平明显低于H/R组和H/R+NC组[(22.98±0.40)%比(28.70±0.68)%、(30.70±0.68)%，F＝44.029，P<0.01]，但高于Control组[(22.98±0.40)%比(4.84±0.43)%，t＝30.734，P<0.01]。结论RBFOX1在HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型中具有抑制细胞氧化应激的作用，这一作用与Nrf2/HO-1信号通路有关。

简介：摘要目的利用体外模型探讨着丝粒蛋白M(CENPM)对肾纤维化的影响及其机制。方法体外培养人源肾小管上皮细胞(HK-2)，先用0、10、20、50 ng/ml的转化生长因子-β(TGF-β) HK-2 24 h，利用蛋白质印迹法(Western blot)和细胞免疫荧光检测CENPM蛋白表达；倒置显微镜观察HK-2细胞形态变化。随后利用腺病毒载体构建sh-CENPM病毒转染HK-2细胞，将细胞分为3组：短发卡RNA(shRNA)空白载体组；shRNA+TGF-β组(TGF-β 50 ng/ml处理24 h)；sh-CENPM+TGF-β组(sh-CENPM腺病毒转染+TGF-β处理)。利用细胞免疫荧光检测Fibronectin(Fn)表达，Western blot检测胶原蛋白、核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白及凋亡蛋白表达；同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NF-κB下游白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度变化；流式细胞术检测3组细胞内活性氧(ROS)水平。两组间比较采用t检验。结果50 ng/ml TGF-β处理24 h后CENPM表达量显著升高(2.85±0.32比1.00±0.01，t＝9.803，P<0.01)，且HK-2细胞形态由卵圆形变为长梭形。与shRNA+TGF-β组比较，利用sh-CENPM腺病毒抑制CENPM表达后，能明显减少TGF-β诱导的Fn及COL-I的表达(1.74±0.27比2.37±0.21，t＝2.635，P<0.05；1.98±0.34比3.23±0.26，t＝2.477，P<0.05)，且抑制NF-κB信号通路的激活，减少下游IL-1β(144.23±18比297.45±41.63，t＝6.278，P<0.01)、IL-6(197.46±27.51比378.43±41.22，t＝7.954，P<0.01)和TNF-α(311.42±31.57比557.38±49.34，t＝10.290，P<0.05)的生成，缓解细胞内ROS的产生及细胞凋亡。结论抑制CENPM能够通过反向调节肾小管上皮细胞内的炎性反应及细胞凋亡，减缓肾纤维化的发展。

简介：摘要目的观察三七总皂苷(PNS)对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响，并探讨其诱导凋亡的机制。方法2019年9月至2020年7月，选取人膀胱癌T24细胞株(购自中国科学院上海生命科学研究院)作为研究对象。将T24细胞分为对照组(加PBS)、实验组(低浓度组100 mg/L、高浓度组200 mg/L)，检测其被不同浓度的PNS处理12、24、48 h后的细胞活力；在经过PNS(100、200 mg/L)处理48 h后，使用细胞划痕实验、Transwell评估处理后T24细胞迁移、侵袭能力的变化，通过流式细胞仪检测干预后T24细胞凋亡状况，利用蛋白质印迹法(Western blot)法检测T24细胞在处理后活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和Hippo信号通路关键蛋白TEA结构域转录子1(TEAD1)、Yes协同蛋白1(YAP1)和大肿瘤抑制基因1(LATS1)的表达水平。组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果PNS处理48 h后，实验组细胞增殖活力显著低于对照组[(63.28±5.81)%、(39.38±3.34)%比(103.00±3.30)%，F＝126.045，P<0.05]；细胞划痕实验提示PNS处理后，实验组膀胱癌T24细胞系的迁移率显著降低[(25.99±2.25)%、(9.79±0.44)%比(52.50±2.29)%，F＝398.345，P<0.05]；Transwell结果说明PNS(100、200 mg/L)能够显著减弱T24细胞株的侵袭性[(249.67±28.01)、(152.67±7.64)个比(397±30.12)个，F＝77.856，P<0.05]；流式细胞仪结果显示，PNS(100、200 mg/L)处理48 h后，实验组细胞凋亡率[(9.55±0.39)%、(15.08±0.94)%]相对于对照组[(6.86±0.68)%]明显升高(F＝105.821，P<0.05)；Western blot结果表明，实验组中抗凋亡蛋白bcl-2(0.43±0.06、0.17±0.04比0.80±0.08)和Hippo信号通路中TEAD1(0.38±0.05、0.17±0.04比0.62±0.06)和YAP1(0.40±0.04、0.23±0.06比0.53±0.02)等蛋白的表达量显著降低，而cleaved Caspase-3(0.39±0.04、0.50±0.03比0.24±0.02)、LATS1(0.51±0.07、0.73±0.04比0.28±0.05)的表达明显上调(F＝87.713、55.109、38.325、53.658、47.578，P<0.05)。结论三七总皂苷能够抑制人膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭等能力，并能诱导T24细胞发生凋亡，其中的机制可能与激活Hippo-YAP信号通路相关。

简介：摘要目的探讨芳香烃受体核转录蛋白样1(BMAL1)对肾纤维化的影响及机制。方法将HK-2细胞简单随机分组：对照组(A组)、转化生长因子-β1(TGF-β1)-5 ng/ml组(B组)、TGF-β1-10 ng/ml组(C组)、TGF-β1+si-BMAL1组(D组)、TGF-β1+BMAL1-OE组(E组)、TGF-β1+si-BMAL1+PD98059组(F组)，各组给予相应的干预措施，用蛋白质印迹法(Western blot)检测BMAL1、纤维连接蛋白(Fibronectin)、Ⅰ型胶原纤维蛋白(COL-Ⅰ)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达量。将24只SD雄性大鼠简单随机分组：假手术组(G组)、UUO-3 d组(H组)、UUO-7 d组(I组)、UUO-7 d+sh-BMAL1组(J组)，各组给予相应干预措施，用马松(Masson)染色观察肾间质胶原纤维表达，用Western blot检测BMAL1、Fibronectin、COL-Ⅰ、E-cadherin、ERK、p-ERK蛋白的表达量。两组间比较采用t检验。结果随着TGF-β1的浓度增加，HK-2细胞BMAL1、Fibronectin、COL-Ⅰ表达量逐渐升高；随着UUO时间延长，大鼠的BMAL1、Fibronectin、COL-Ⅰ表达量、Masson染色肾间质蓝色胶原纤维面积比值逐渐升高；D组的Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量高于C组(4.94±0.74、3.46±0.28、3.18±0.48比3.14±0.52、2.42±0.20、2.05±0.31，t＝3.455、5.269、3.400，P<0.05)，BMAL1、E-cadherin表达量低于C组(0.28±0.11、0.25±0.10比2.69±0.27、0.58±0.08，t＝-14.179、-4.586，P<0.05)；E组的Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量低于C组(1.76±0.21、1.69±0.12、1.52±0.11比3.14±0.52、2.42±0.20、2.05±0.31，t＝-4.032、-5.375、-2.788，P<0.05)，BMAL1、E-cadherin表达量高于C组(3.80±0.36、0.79±0.05比2.69±0.27、0.58±0.08，t＝4.244、3.875，P<0.05)；J组的Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量高于I组(16.48±1.42、3.68±0.31、2.36±0.44比8.93±2.35、2.65±0.31、1.55±0.14，t＝6.258、5.141、4.440，P<0.05)，BMAL1、E-cadherin表达量低于I组(0.51±0.21、0.22±0.07比5.26±0.48、0.55±0.09，t＝-19.928、-6.841，P<0.05)；F组Fibronectin、COL-Ⅰ、p-ERK表达量低于D组(4.03±0.29、2.51±0.24、0.85±0.09比4.94±0.74、3.46±0.28、3.18±0.48，t＝-1.979、-4.475、-8.196，P<0.05)，E-cadherin表达量高于D组(0.43±0.05比0.25±0.10，t＝2.828，P<0.05)。结论BMAL1可通过抑制ERK磷酸化改善肾纤维化。

简介：摘要目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测不同复氧损伤时间点TRPV4的表达变化；分别采用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术检测转染TRPV4对GC-1细胞增殖和凋亡的影响；采用Western blot法检测睾丸组织中转染TRPV4对GC-1细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和细胞色素C(Cyt-C)表达的影响，组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果对照组及缺氧复氧组(0、6、12、24、48和72 h)TRPV4的蛋白表达水平分别为0.19±0.02、0.35±0.03、0.42±0.04、0.46±0.04、0.62±0.05、0.54±0.05、0.45±0.04。缺氧复氧组TRPV4表达显著高于未缺氧GC-1细胞的对照组，并在复氧24 h达到峰值(F＝6.898，P<0.05)，差异有统计学意义；缺氧复氧组中细胞增殖水平明显低于对照组(52.32±4.58比100.00±7.63，t＝-9.280，P<0.05)，差异有统计学意义，细胞凋亡水平高于对照组(15.60±1.72比4.08±0.87，t＝10.352，P<0.05)，差异有统计学意义；过表达TRPV4组中细胞增殖水平低于其对照组(23.65±3.98比51.35±4.67，t＝-7.820，P<0.05)，差异有统计学意义，细胞凋亡水平高于其对照组(26.93±2.15比14.62±1.68)，t＝7.814，P<0.05)，差异有统计学意义；沉默TRPV4组中细胞增殖水平高于其对照组(72.49±6.21比53.18±5.14，t＝4.150，P<0.05)，差异有统计学意义，细胞凋亡水平低于其对照组(9.71±1.25比15.07±1.64，t＝-4.502，P<0.05)，差异有统计学意义。缺氧复氧组中Caspase-3和Cyt-C表达水平高于对照组(0.70±0.06比0.20±0.02，t＝13.693，P<0.05；0.74±0.07比0.26±0.03，t＝10.917，P<0.05)，差异有统计学意义；过表达TRPV4组中Caspase-3和Cyt-C表达水平高于其对照组(1.25±0.11比0.69±0.07，t＝7.439，P<0.05；1.38±0.14比0.72±0.07，t＝7.303，P<0.05)，差异有统计学意义；沉默TRPV4组中Caspase-3和Cyt-C表达水平低于其对照组(0.46±0.05比0.68±0.06，t＝-4.879，P<0.05；0.45±0.05比0.72±0.06，t＝-5.988，P<0.05)，差异有统计学意义。结论TRPV4在GC-1细胞中高表达，其可能通过改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力，从而影响睾丸IRI的发生发展。

简介：摘要目的研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型，RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平；分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对GC-1细胞增殖和凋亡能力的变化；荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系，Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平。结果miR-29a随着复氧损伤时间的增加，其表达显著降低，而TRPV4的表达明显增加；过表达miR-29a能显著促进GC-1细胞的增殖能力，抑制细胞凋亡水平。沉默miR-29a可使GC-1细胞的增殖能力明显减弱，凋亡水平增加；荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因。过表达miR-29a能明显抑制GC-1细胞的TRPV4表达，而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达。结论MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力，从而影响睾丸IRI的发生发展。

简介：摘要目的探讨时钟基因芳烃受体核转位因子样蛋白1(Bmal1)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白2(Smad2)通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧后纤维化中的作用。方法将HK-2细胞随机分组：正常对照组(A组)、缺氧/复氧组(B组)；siCTRL组(C组)、siBmal1组(D组)、HR +siCTRL组(E组)、HR+ siBmal1组(F组); HR + siCTRL +二甲基亚砜(DMSO)组(G组)、HR+ siCTRL+白藜芦醇(Resveratrol)组(H组)、HR+ siBmal1 +DMSO组(I组)、HR+ siBmal1 + Resveratrol组(J组)，用小干扰RNA(siRNA)敲低Bmal1，各组给予相应干预措施，蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞Bmal1、SIRT1、TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad蛋白2(p-Smad2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、锌指转录因子1(snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达量。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。结果B组Bmal1、SIRT1指标低于A组(0.310±0.039、0.248±0.037比0.668±0.161、0.416±0.049，t＝3.046、3.873，P<0.05)，而B组TGF-β1、p-Smad2指标高于A组(0.734±0.022、0.563±0.07比0.280±0.102、0.190±0.021，t＝6.115、7.062，P<0.05)；D、E组Bmal1、SIRT1指标低于C组(0.547±0.031、0.647±0.029比0.754±0.036，0.311±0.024、0.339±0.017比0.450±0.032，t＝6.335、3.289、5.861、4.688，P<0.05)，D、E组TGF-β1、p-Smad2指标高于C组(0.314±0.011、0.379±0.007比0.072±0.009，0.399±0.015、0.313±0.025比0.240±0.013，t＝15.910、20.150、7.736、3.553，P<0.05)；F组Bmal1、SIRT1指标低于D、E组(0.199±0.033比0.547±0.031、0.647±0.029，0.158±0.016比0.311±0.024、0.339±0.017，t＝10.950、14.000、6.433、7.606，P<0.05)，F组TGF-β1、p-Smad2指标高于D、E组(0.443±0.026比0.314±0.011、0.379±0.007，0.488±0.026比0.399±0.015、0.313±0.025，t＝8.472、4.233、4.304、8.488，P<0.05)；H组Bmal1、SIRT1指标高于G组(0.964±0.026、0.444±0.031比0.629±0.036、0.339±0.019，t＝11.830、4.829，P<0.05)，而H组TGF-β1、p-Smad2指标低于G组(0.235±0.022、0.213±0.016比0.386±0.027、0.297±0.011，t＝7.583、4.867，P<0.05)；I组Bmal1、SIRT1指标低于G组(0.484±0.018、0.183±0.015比0.629±0.036、0.339±0.019，t＝5.115、7.189，P<0.05)，I组TGF-β1、p-Smad2指标高于G组(0.497±0.015、0.637±0.025比0.386±0.027、0.297±0.011，t＝5.613、19.620，P<0.05)；J组Bmal1、SIRT1指标低于H组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.964±0.026、0.444±0.031，t＝13.600、7.660，P<0.05)，J组TGF-β1、p-Smad2指标高于H组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.235±0.022、0.213±0.016，t＝4.430、14.430，P<0.05)；J组Bmal1、SIRT1指标高于I组(0.579±0.030、0.278±0.019比0.484±0.018、0.183±0.015，t＝3.351、4.358，P<0.05)，J组TGF-β1、p-Smad2指标低于I组(0.323±0.012、0.463±0.015比0.497±0.015、0.637±0.025，t＝8.767、10.050，P<0.05)。结论时钟基因Bmal1通过调控SIRT1抑制TGF-β1/Smad2信号通路进而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后纤维化。