简介：摘要目的观察膝骨关节炎（OA）患者胫骨平台软骨组织中软骨细胞集落的形成及对膝OA发展的意义。方法根据国际骨关节炎协会（OARSI）人关节软骨组织学等级评定系统获取0~1级、2~3级、4级三组软骨标本，制作组织学切片观察软骨细胞集落形成；免疫组化技术检测集落中软骨细胞Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、基质金属蛋白酶13（MMP-13）表达情况；获取0~1级、4级两组软骨标本，提取过渡层软骨细胞进行体外培养至第三代，观测24 h增殖率及细胞生长状态。两组间数据比较使用成组t检验。结果OARSI等级0~1级组软骨组织浅表层完整、细胞数量多、过渡层软骨细胞无集落形成，2~3级组软骨组织浅表层破损、细胞数量明显减少、过渡层软骨细胞无集落形成，4级组软骨组织浅表层消失、过渡层出现明显软骨细胞集落；集落中软骨细胞Ⅱ型胶原表达减少，Ⅹ型胶原和MMP-13表达明显增多。体外培养0~1级组过渡层软骨细胞24 h增殖率较4级组低（8%±4%比16%±6%，t=3.722，P=0.002），细胞无明显集落样生长，而4级组软骨细胞呈集落样生长。结论膝OA早期软骨组织浅表层存在时、过渡层软骨细胞增殖率低不形成集落；膝OA中期软骨组织浅表层缺失、过渡层软骨细胞增殖率增高并形成集落，集落中的软骨细胞呈现肥大化改变。

简介：摘要目的探讨慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬水平及对细胞凋亡的影响。方法雄性4周龄Sprague-Dawley（SD）幼鼠40只，按照随机数字表法分为正常对照组（蒸馏水灌胃）和CRF组（腺嘌呤150 mg·kg-1·d-1灌胃），连续灌胃6周后处死幼鼠，X线测量胫骨长度，组织学切片测量比较胫骨生长板宽度，应用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测生长板软骨细胞凋亡率；体外培养正常对照组和CRF组幼鼠胫骨生长板软骨细胞至第3代，应用TUNEL技术检测软骨细胞凋亡率，应用荧光双染技术观测软骨细胞线粒体与自噬溶酶体共定位情况，应用Western印迹法检测线粒体标志蛋白线粒体外膜转位酶（translocase of the outer mitochondrial membrane-20，Tom-20）和自噬标志轻链蛋白-3（light chain-3，LC-3）表达情况，应用透射电镜观察软骨细胞线粒体自噬情况。结果与正常对照组相比，CRF组幼鼠胫骨长度较短[（27.32±5.81）mm比（35.43±3.61）mm，t=5.226，P<0.001]，生长板相对宽度较窄（0.56±0.19比1.00±0.21，t=6.744，P<0.001），软骨细胞凋亡率较高（17.2%±4.8%比5.1%±3.4%，t=6.505，P<0.001）。CRF组体外培养生长板软骨细胞凋亡率高于正常对照组（11.8%±6.2%比3.1%±1.2%，t=4.357，P<0.001），荧光双染技术结果显示CRF组软骨细胞线粒体与自噬溶酶体出现明显的共定位现象，CRF组软骨细胞LC-3蛋白（t=8.944，P<0.001）及Tom-20蛋白（t=6.708，P<0.001）表达均少于正常对照组，电镜结果显示CRF组软骨细胞内出现较多的自噬囊泡吞噬线粒体并降解的现象。结论CRF幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬水平出现增高现象，导致线粒体减少，引起软骨细胞凋亡、数量减少，最终导致胫骨发育不良。

简介：摘要目的观察SD大鼠乳鼠胫骨生长板软骨细胞甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein，PTHrp)的表达情况并分析其对印度刺猬蛋白(indian hedgehog，IHH)-PTHrp信号通路的意义。方法SD大鼠乳鼠10只，颈椎脱臼处死后取膝关节标本并制作组织学切片。应用免疫组织化学技术检测PTHrp蛋白在乳鼠胫骨生长板的表达区域，同时应用原位杂交技术检测生长板PTHrp mRNA的表达区域；应用免疫组织化学技术检测IHH-PTHrp信号通路关键因子IHH蛋白、Patched(Ptc)蛋白、PTHrp受体蛋白在胫骨生长板的表达区域。结果乳鼠胫骨生长板软骨膜下软骨细胞、生长板前肥大区软骨细胞内均表达PTHrp蛋白及PTHrp mRNA；IHH蛋白主要在生长板前肥大区软骨细胞内表达，Ptc蛋白主要在生长板周围软骨膜细胞内表达，PTHrp受体蛋白主要在生长板增殖区软骨细胞内表达，少量在前肥大区软骨细胞内表达。结论乳鼠胫骨生长板软骨膜下软骨细胞和前肥大区软骨细胞内均表达PTHrp蛋白；PTHrp蛋白在前肥大区软骨细胞内表达，可以补充调控胫骨生长板纵向发育的IHH-PTHrp信号通路学说。

简介：摘要目的观察慢性肾功能不全（CRI）大鼠胫骨生长板软骨细胞自噬功能改变对细胞凋亡的影响。方法雄性4周龄SD幼鼠20只，分为假手术组（暴露左侧输尿管，10只）和CRI组（结扎左侧输尿管，10只）。术后6周处死大鼠前收集24 h尿液并检测总蛋白，处死大鼠后心腔取血检测血肌酐、血尿素氮浓度；取双侧胫骨近端固定脱钙制作组织学切片，番红固绿染色观测胫骨生长板增殖区软骨细胞柱细胞数量，免疫荧光检测软骨细胞自噬指标轻链蛋白3（LC-3）的细胞表达率，Tunel技术检测软骨细胞凋亡率，免疫组化检测软骨细胞糖原指标糖原蛋白1的表达水平。结果与假手术组相比，CRI组24 h尿蛋白[（163.5±11.3）mg比（38.6±9.8）mg，t=25.620，P<0.001]，血肌酐[（67.3±16.2）μmol/L比（28.4±11.5）μmol/L，t=5.974，P<0.001]，血尿素氮[（16.4±6.4）mmol/L比（4.8±2.0）mmol/L，t=5.198，P<0.001]均增高；CRI组胫骨生长板增殖区软骨细胞柱细胞数量减少[（4.2±2.1）个比（9.1±3.8）个，t=3.109，P=0.006]，软骨细胞LC-3蛋白阳性表达率降低[（27.2±12.6）%比（51.4±18.2）%，t=3.457，P=0.003]，糖原蛋白1累积增多[（6.1±2.5）分比（3.5±1.8）分，t=2.669，P=0.016]，凋亡率增高[（17.2±4.8）%比（5.1±3.4）%，t=6.505，P<0.001]。结论肾功能不全大鼠胫骨生长板软骨细胞自噬功能下降，糖原累积增多，凋亡率增高，软骨细胞数量减少。

简介：摘要目的探讨慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）幼鼠胫骨生长板软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路对生长板发育的影响。方法雄性4周龄SD幼鼠40只，被随机分为对照组（蒸馏水灌胃，n=20）和CRF组（腺嘌呤150 mg·kg-1·d-1灌胃，n=20），连续灌胃6周后处死全部幼鼠，比较两组幼鼠胫骨长度。micro-CT扫描仪测量胫骨近端生长板宽度，组织切片番红固绿染色检测胫骨生长板宽度。提取幼鼠胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至第3代，免疫组织化学染色法检测软骨细胞Ⅱ型胶原（Collagen Ⅱ）、基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）及β联蛋白（β-catenin）的表达。Western印迹法检测软骨细胞CollagenⅡ、MMP-13、β-catenin蛋白表达水平。结果与对照组相比，CRF组幼鼠胫骨长度较短[（27.32±5.81）mm比（35.43±3.61）mm，t=5.226，P<0.001]，生长板宽度较窄[（0.72±0.22）mm比（1.13±0.27）mm，t=5.096，P<0.001]。软骨组织番红固绿染色结果显示，CRF组幼鼠生长板相对宽度较对照组窄（t=6.744，P<0.001）。免疫组化及Western印迹结果示，与对照组比较，CRF组软骨细胞CollagenⅡ蛋白表达减少（t=8.212，P<0.001），MMP-13（t=13.091，P<0.001）和β-catenin（t=7.534，P<0.001）蛋白表达增多。结论CRF幼鼠胫骨生长板软骨细胞Wnt/β-catenin通路相关蛋白呈高表达状态，是软骨细胞加速退变分化、生长板出现闭合趋势的原因之一。