简介：摘要目的探讨肝星状细胞(HSC)特异性肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)基因敲除(IRE1αHSC-/-)对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝纤维化的影响。方法杂交获得IRE1αfl/fl及IRE1αfl/fl/血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)Cre小鼠(美国梅奥诊所胃肠肝病实验中心惠赠)，腹腔注射他莫昔芬(Tamoxifen)诱导PDGFRβCre活化并构建IRE1αHSC-/-小鼠，设为实验组；将IRE1αfl/fl小鼠设为WT组；两组分别予以腹腔注射CCl4或等体积橄榄油(Olive Oil)，根据不同处理分组如下：野生型对照组(WT-O.Oil，n＝5)、基因敲除对照组(IRE1αHSC-/--O.Oil，n＝5)、野生型实验组(WT-CCl4，n＝5)、基因敲除实验组(IRE1αHSC-/--CCl4，n＝5)，6周后处死，获取肝脏组织行苏木精-伊红(HE)染色及天狼猩红染色。蛋白质印迹法(Western blot)及免疫荧光染色比较各组肝脏中IRE1α、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、纤连蛋白(Fibronectin)、PDGFRα、结蛋白(Desmin)蛋白及荧光表达水平；组间比较均采用单因素方差分析。结果与WT比较，IRE1αHSC-/-可以减轻CCl4诱导生成的肝脏大量炎性细胞以及胶原蛋白沉积[(1.56±0.45)%比(2.43±0.49)%，F＝50.300，P<0.01]。Western blot结果显示，IRE1αHSC-/--CCl4组中α-SMA、Fibronectin蛋白表达明显低于WT-CCl4组(3.11±0.88比5.49±1.85、3.21±0.79比5.65±1.97，F＝17.900、18.780，P<0.05)；免疫荧光结果示IRE1αHSC-/--CCl4组中α-SMA、Collagen Ⅰ及Desmin荧光相对表达量明显低于WT-CCl4组，差异有统计学意义[(13.19±3.52)%比(17.91±4.46)%、(18.66±6.73)%比(22.21±7.92)%、(8.85±2.11)%比(11.87±2.07)%，F＝100.300、74.690、71.270，P<0.05]。结论HSC特异性IRE1α基因敲除能够通过抑制HSC活化，减少CCl4诱导的小鼠肝脏中胶原纤维沉积，缓解肝纤维化进程。

简介：摘要目的探讨微小RNA-101a(miRNA-101a)是否通过调控肌醇需要酶1α蛋白(IRE1α)信号通路介导肝星状细胞活化以及对肝纤维化的影响。方法建立CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型，实时定量PCR检测肝组织中miRNA-101a的表达，Western印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、I型胶原、IRE1α的蛋白表达。肝星状细胞(HSC)-T6处理分为HSC组、转化生长因子(TGF)β1活化组、TGFβ1+miRNA-NC组(转染miRNA-101a空白对照质粒)和TGFβ1+miRNA-M组(转染miRNA-101a模拟质粒)。给予对应干预后，检测各组间miRNA-101a、αSMA、I型胶原和IRE1α的表达差异。结果与对照组小鼠相比，实验组小鼠肝组织中纤维沉积明显[(0.17±0.06)%比(2.09±0.39)%]，miRNA-101a相对表达水平下调[(1.00±0.05)比(0.43±0.05)]，差异有统计学意义(均P<0.001)；而且实验组小鼠肝组织αSMA、I型胶原及IRE1α蛋白相对表达水平上调[(1.00±0.23)比(4.09±0.80)、(1.00±0.21)比(4.98±1.19)、(1.00±0.24)比(3.27±0.65)]，差异有统计学意义(均P<0.001)。TGFβ1处理抑制HSC-T6细胞miRNA-101a表达，诱导HSC-T6活化，导致αSMA、I型胶原以及IRE1α蛋白表达上调；TGFβ1+miRNA-M组中miRNA-101a表达水平(1.89±0.20)明显高于TGFβ1+miRNA-NC组(0.59±0.19)，差异有统计学意义(P<0.001)。过表达miRNA-101a后，αSMA、I型胶原蛋白表达明显降低[(2.65±0.69)比(0.84±0.13)、(3.15±0.59)比(1.31±0.25)]，差异有统计学意义(均P<0.05)；IRE1α蛋白表达亦下调[(2.63±0.47)比(1.03±0.15)]，差异有统计学意义(P<0.001)。结论miRNA-101a可能通过抑制IRE1α信号通路抑制肝星状细胞活化和肝纤维化形成。