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13 个结果
  • 简介:目的:合成新型蛋白转导PTD4,研究其细胞内穿膜效应及在体组织分布。方法:设计并采用固相合成法合成新型蛋白转导PTD4,用FAM(羧基荧光素)进行标记,采用高效液相色谱仪(HPLC)和质谱仪测定其纯度与相对分子质量;采用荧光倒置显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察其在细胞内的穿膜情况;采用裸鼠活体成像观察穿膜肽在体内的组织分布及代谢特性,并切片观察各组织器官的分布情况。结果:合成了新型蛋白转导PTD4,纯度为95.76%,相对分子质量为1776.5;PTD4在体外的穿膜效应有时间与浓度依赖性,约24h代谢完毕,且共聚焦显微镜细胞层扫证实穿膜肽进入胞内;尾静脉注射的PTD4在裸鼠体内可迅速分布于各组织器官,但组织分布不均一,且有时间与浓度依赖性,6h后荧光强度下降了大半,且腹腔注射方法不如尾静脉注射的穿膜效率高。结论:采用Fmoc固相肽合成法可成功合成蛋白转导PTD4;PTD4能高效穿透细胞膜,穿膜效应呈时间与浓度依赖性;PTD4在体内能迅速分布于各组织细胞。

  • 标签: 蛋白转导 细胞穿膜肽 组织分布 固相合成
  • 简介:目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导(PTD)的TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TATPTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。

  • 标签: 蛋白转导域 SARA/SBD融合蛋白 原核表达 纯化 生物学活性
  • 简介:目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构分析,构建SRK13-b结构的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RT-PCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1mmol/LIPTG诱导,用Ni—NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构蛋白进行纯化。结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构蛋白进行诱导表达及纯化,SDS—PAGE显示相对分子质量约43×10^3的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构的融合蛋白。结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。

  • 标签: 羽衣甘蓝 自交不亲和 S13-b位点受体激酶 原核表达 纯化
  • 简介:利用蛋白质转导结构(PTDs)可以将与之融合表达的蛋白质直接送入细胞中.将通过筛选噬菌体展示锌指文库得到的特异作用于SV40启动子上9bp序列的三锌指结构的序列插入含有TAT蛋白的蛋白质转导结构的表达载体pET-TAT-NLS中,构建融合蛋白的表达载体pET-TAT-NLS-clone3.融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中得到了可溶性表达,含量约占总蛋白的18%;并通过镍亲和凝胶层析柱得到了较好的纯化融合蛋白.

  • 标签: TAT 蛋白质转导结构域 SV40启动子 三锌指结构 融合蛋白 可溶性表达
  • 简介:本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞.这一点与在Ca2+依赖糖识别结构(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同.本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除了CRD结构编码序列,进一步探讨CRD结构的生物学功能.由于该突变体序列GC含量较高,因此将该缺失突变体序列克隆在GST融合表达载体中进行融合表达.通过低温(28℃)诱导,表达产物主要以可溶蛋白的形式存在.利用亲和层析纯化CRD结构完全缺失的hSCGF突变体融合蛋白,通过检测重组突变分子的协同刺激造血活性有无改变来初步探讨CRD结构在hSCGF分子中的生物学功能.研究结果表明,去掉完整CRD结构的突变分子仍然具有造血刺激活性.据此推断CRD结构在hSCGF分子中可能对于受体配体结合起辅助作用.

  • 标签: 细胞生长因子 缺失突变体 Ca^2+ 结构域 糖识别 生物学活性
  • 简介:2010年10月27日,北京微谷生物医药有限公司(新型疫苗国家工程研究中心)与颇尔中国生命科学在北京国家会议中心签署了战略合作协议,双方将共同推进新型疫苗合作。北京微谷生物医药有限公司副总经理张振龙先生和颇尔公司生物制药部亚太区市场总监董彦先生作为双方代表签署该协议。

  • 标签: 合作协议 生物医药 生命科学 北京 中国 国家工程研究中心
  • 简介:随着互联网技术的完善和云计算技术的兴起,物联网的实现也变得触手可及。而物联网的建设与发展必将面临安全因素的制约。本文概述了物联网各层级的框架结构,并对各层安全策略进行初步的探讨,总结了各层面临的安全威胁及相关的安全技术。

  • 标签: 物联网技术 云计算技术 构架结构
  • 简介:随着网络信息技术的发展,食品安全信息管理系统可以通过网络向消费者提供食品安全信息,并可以提供及时、快捷、方便的食品安全网络服务,对食品安全监督工作起到积极的促进作用,建立食品安全信息管理网络将有效的保障食品安全监管工作的有利进行。本文就国内外食品安全管理中信息化技术的应用进行了总结分析,为加强食品安全管理提供参考。

  • 标签: 食品安全 信息化 供应链 措施
  • 简介:随着计算机技术的发展,已经广泛应用于人们的工作和生活中。随之网络和信息安全方面也越来受到人们的重视。本文从网络安全漏洞检测与攻击图构建两方面进行分析,探讨增强计算机安全性能的相关措施。

  • 标签: 计算机网络安全 漏洞检测 攻击图设计 计算机技术
  • 简介:骨外科因其特殊性,临床护理中不安全因素较多,包括院方因素、患者及其家属因素,院方应加强风险控制,积极培养提高护理人员综合能力,增加设施设备投入,加强对患者及其家属的教育宣传,抑制不安全因素,提高护理质量。

  • 标签: 骨外科 临床护理 不安全因素 应对策略
  • 简介:目的:卡培他滨治疗晚期乳腺癌疗效及安全性进行分析.方法:对180名患者进行病理上的确诊和分析,确定病人为乳腺癌晚期.对病人用药时采取每天2500mg/m2的方式,即每日早餐与晚餐之后半个小时进行服用,连续应用两周之后休息一周.若病人的癌细胞扩散现象未得到有效控制,呈现继续蔓延的情况,立刻停止对该药物的使用.患者使用卡培他滨片之后的效果分为效果显著、有效以及无效.结果:临床表现为疗效显著的患者有46例,病情得到了完全程度上的缓解;临床表现为有效的患者83例,病情得到了控制,部分病情得到缓解;51例患者临床表现为无效.腹泻患者41例,不良反应发生率22.8%;色素沉淀患者49例,手足综合征63例,其余类不良反应27例.结论:卡培他滨在对于晚期乳腺癌的治疗上表现显著,而其产生的不良反应患者大多能够忍受,适合于在临床实践当中应用.

  • 标签: 卡培他滨 晚期乳腺癌 不良反应
  • 简介:食品安全与人们的健康密切相关,如果食品安全无法得到保证,不但身心健康得不到保障,同时也会对经济和社会造成严重的影响。我们需要运用科学的食品质量检测机制来确保食品安全,分析当前国内在种养殖、食品加工和流通等环节上存在的诸多问题,以及食品质量安全标准的不完善和不统一,食品安全监管部门存在职能不清,缺乏监督等问题。因此,在紧抓国内的食品安全和食品质量管理上,有着重要的现实意义。

  • 标签: 食品质量 检验 问题 对策