简介：在实践中,力求从建构教学模式的角度构建一个四阶段的对话教学模式,以便将对话教学的理论具体化为教学实践中的可操作之物,增强对教学过程的指导性,避免教学实践中的盲目无序。本文首先对高中语文对话教学的现状分析,最后阐述了语文对话教学模式的实现策略。当然,语文对话教学模式的开展还需要很多条件,最主要的是:改变教学观念,提高教师水平:优化教学环境,力促学生主动参加。

简介：人体解剖学是一门以器官的形态学习为主的基础学科,选择有效的教学模式能够实现优化学习的目的。本课题笔者在分析互动教学模式在人体解剖学教学中的优势的基础上,进一步对多媒体教学软件在解剖学教学中的应用进行了探究,最后为构建多媒体教学软件的互动教学模式提出了一些具有价值性的参考依据。

简介：为了响应国家的号召,各大高等院校均纷纷开设双语课程。与经济发达地区相比,西部地方本科院校双语课程的开设,教育理念滞后,教育基础薄弱,教师资源与教材资源匮乏,学生程度不一,存在诸多问题。针对这些问题,联系西部地方本科院校的实际情况,提出加强课程建设,优化教学模式、加强师资、教材建设,建立合理的评价体系,循序渐进的有效的开展双语教学。

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

简介：据调查显示,自从2000年开始,中国就相继启动了一系列的卫生监督体系的改革,这些卫生监督体系的改革为中国的卫生行业的发展提供更多的发展机会,也是中国的卫生体系非常大的进步。而作为卫生监督体系中非常重要的组成部分,精神文化建设也取得了非常显著的成绩。近年来,随着中国卫生监督系统的逐渐完善,专家和学者将更多的精力放在卫生监督精神文化建设这一层面上,旨在形成一个较为系统并且较为完整的精神文化建设体系。现如今,随着新时期的到来,精神文化建设也取得了一定的成就,这对发展中国卫生监督系统有着非常重要的意义。

简介：由于现代化的发展,图书馆已投入到市场经济的竞争中,怎样构建图书馆的核心竞争力已成为图书馆将来生存和发展的关键。文章解释了图书馆核心竞争力的定义,目前图书馆核心竞争力的现况,并从资源、人才、管理理念、服务创新等几方面论述了图书馆核心竞争力的构建。

简介：目的：构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法：采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMASPIN-400柱分级分离后,收集500bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2kb,平均插入片段长度大于1kb。结论：建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。

简介：目的：构建天然免疫胞内识别受体核苷酸寡聚域1（NOD1）真核表达质粒。方法：NOD1基因片段经PCR扩增获得，经酶切后连接到真核表达载体pcDNA3／flag中，对挑选出的阳性克隆测序，将序列正确的重组质粒pnag—NOD1转染293T细胞，用Western印迹检测目的蛋白的表达，同时用NF-κB的萤光素酶报告基因检测NOD1蛋白的活性。结果：pflag-NOD1可以在真核细胞293T中表达，并可以增强NF-κB报告基因的转录活性。结论：构建了重组质粒pnag—NOD1，在细胞中表达NOD1后能够提高NF—κB转录的生物活性，为进一步研究NOD1的功能奠定了基础。

简介：由中科院生命科学与生物技术局、科技部中国生物技术发展中心、天津市科委和中国生物工程学会主办，中科院微生物所、中科院天津工业生物技术研发中心（筹）和天津市高新技术成果转化中心联合承办的“中国工业生物技术发展高峰论坛2008”4月18日上午在天津港保税区开幕。来自海内外30余家企业、60多个高校和科研机构的400余名代表参加了本届论坛活动。

简介：目的：构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法：以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料，提取柱头的总RNA，用亲和层析法分离纯化mRNA，利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果：羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2．5×10^5；扩增后文库的库容量约为4×10^8，重组率为96％，插入片段大小为0．4～3kb，平均长度在0．8kb左右。结论：构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库，为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

简介：为了解决专利申请前期专利文献检索过程新颖性和创造性的把握,本文设计了一种申请决策模型,模型通过拟申报专利主题的关键词、ICP分类号等方式结合,从原始专利数据库提取专利数据,将提取出的专利数据进行清洗后进行二次加工,用选定的数学统计模型对入选专利平均评分后,给予申请人或发明人明确的授权可能性评估结果。

简介：目的：分析物种间miRNA序列的共同点和差异点,为后续miRNA研究奠定基础。方法：从miRBase数据库下载8种模式生物,即智人、小鼠、大鼠、果蝇、线虫、拟南芥、水稻、玉米的全部miRNA,通过生物信息学相关软件及方法对其进行分析。结果：各物种成熟miRNA序列长度均约为22nt,植物miRNA长度分布范围较动物更集中;而pre-miRNA则相反,植物pre-miRNA的长度变异远大于动物;各物种miRNA序列第一个碱基倾向于U,而其他位点的碱基在不同物种间变异较大;miRNA的保守性有一定的范围,不存在在所有物种中均保守的miRNA。结论：找到了miRNA间的一些共同点及差异点,可为后续miRNA鉴定注释提供借鉴。

简介：通过历年退耕还林工程实施现状分析,探讨退耕还林模式并在实践中摸索出一些成功的造林模式,以达到山地的综合利用,对扶贫开发进程、更好的解决民生问题,确保退耕还林工程退得下,还得上,能致富,不反弹,以顺利实施国家的新一轮的退耕还林工程.

简介：目的:建立无线粒体DNA(mtDNA)的人肺腺癌ρ^0A549细胞系。方法:在含50ng/mL溴化乙锭(EB)、100μg/mL丙酮酸钠和50μg/mL尿嘧啶核苷的RPMI1640细胞培养基中传代培养A549细胞;用低剂量EB连续诱导培养35d后,采用光镜观察、TaqMan探针法实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定无mtDNA的ρ^0A549细胞系;采用MTT法测定ρ^0A549细胞增殖曲线。结果:倒置显微镜下野生型ρ^+A549细胞为多角形,ρ^0A549细胞形态呈拉长枝状;qPCR结果显示,低剂量EB诱导35d的ρ^0A549细胞中无mtDNA的存在。Western印迹结果显示,ρ^+A549细胞中能表达核基因编码的线粒体蛋白SDHA和ATP5A,也能表达线粒体基因组编码的蛋白MT-COXI和MT-ATP6;ρ^0A549细胞中无MT-COXI和MT-ATP6蛋白表达,但核基因编码的SDHA和ATP5A蛋白能够正常表达。MTT结果显示,与ρ^+A549细胞相比,ρ^0A549细胞生长速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建和鉴定了无mtDNA的人肺腺癌ρ^0A549细胞系,为后续探讨mtDNA缺失或突变与人肺腺癌发生之间的关系奠定了实验基础。

简介：目的：通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白（ECFP）慢病毒表达载体。方法与结果：根据增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白。结论：通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体。

简介：利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72～96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48～96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达.

简介：目的：基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法：利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan~R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan~R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果：构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论：建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。

简介：目的：构建猪α-1，3-半乳糖转移酶（GGTA1）基因的正负筛选打靶载体。方法：以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板，采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段；以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂，在XbaI和ClaI位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3’端；以长约5．4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂，于NotI位点插入该质粒中聊D基因的5’端；2．7kb的负筛选标记船基因位于载体中同源短臂的3’端外侧。结果与结论：酶切、PCR及测序结果表明，同源臂被正确连接至质粒pLoxP，成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL／GT。

简介：PCR扩增了集胞藻PCC6803的slr1761基因,进一步以PGEM-T为载体将其克隆到大肠杆菌中,构建了P1761质粒。通过DNA体外重组,以卡那霉素抗性基因插入目的基因片段,构建了既含目的基因上游及下游序列、又携带选择性标记卡那霉素抗性的PK1761质粒。该质粒转化野生型集胞藻PCC6803细胞,利用同源重组原理获得了能在含卡那霉素的培养基上正常生长的基因敲除突变株。对该突变株基因组DNA进行PCR扩增,验证了其基因结构的正确性。

简介：目的：从真核细胞中获得骨形态发生蛋白2（BMP2）编码基因，构建其真核表达载体并进行鉴定。方法：提取人HeLa细胞总RNA，经反转录后用特异性引物扩增BMP2编码区，连接至pcDNA3．1载体，筛选阳性克隆并进行功能学鉴定。结果：反转录PCR获得1100bp的片段，经分子克隆后鉴定序列与BMP2一致，并且在真核细胞中能够诱导Smad1／5／8的磷酸化。结论：构建了真核表达载体pcDNA3．1-BMP2并验证了其体内功能，为后续探讨BMP2在骨发育中的作用机制打下基础。