简介：目的：构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法：采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMASPIN-400柱分级分离后,收集500bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2kb,平均插入片段长度大于1kb。结论：建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。

简介：目的：构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法：以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料，提取柱头的总RNA，用亲和层析法分离纯化mRNA，利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果：羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2．5×10^5；扩增后文库的库容量约为4×10^8，重组率为96％，插入片段大小为0．4～3kb，平均长度在0．8kb左右。结论：构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库，为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

简介：Dharmacon公司完成了世界第一个完整基因组siRNA文库，靶向基因包含整个人类基因组。SiARRAY文库是使用公司的SMARTselection和SMARTpool技术开发出来的，对高通量功能基因研究具有明显节约时间和降低成本作用。一个SMARTpoolsiRNA试剂和4个单独的si-RNAs对应人类一个基因。这样每个基因都有5个对应基因沉默反应让研究人员对基因沉默的效果进行独立的验证。

简介：为研究人血小板因子4(hPF4)的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应(RTPCR)从人红白血病细胞系HEL细胞总RNA中扩增出hPF4基因cDNA序列,将其克隆至pUC18载体中.序列分析证实克隆片段与文献报道的hPF4基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hPF4基因cDNA.

简介：调控血小板生成的血小板生成素(Thrombopoi-erin,TPO)基因序列最近被阐明,这为人们了解血小板的发育调节打开了缺口,同时也为临床治疗血小板贫血提供了一种极有潜力的候选蛋白因子。为了研究TPO的结构与功能的关系,探索其体外高效表达的途径,同比较不同人种TPOcDNA序列的多态性,我们参照文献发表的西方人TPOcDNA序列,用聚合酶

简介：P16ink4是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`（ink4）基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16ink4cDNA。扩增得到556bp片段（包括引物两端酶切位点的16bp）克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16ink4cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16ink4cDNA已成功地得到克隆。

简介：本实验将含有人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因cDNA的重组真核表达质粒直接注射小鼠骨骼肌,观察了hGM-CSF基因在小鼠体内的分泌表达情况。ELISA结果显示注射重组质粒DNA后,第15天左右小鼠血液hGM-CSF的表达量最高,约有97ng/ml,第20天次之,第25天和第10天的表达量相近,约有49ng/ml。生物学活性检测结果表明,实验组小鼠血液有维持TF-1依赖株细胞的生长作用。表明重组质粒DNA直接注射骨骼肌不仅能表达hGM-CSF,而且表达产物有生物学恬性。