简介:摘要目的构建hIL-10基因的酵母表达载体,为hIL-10在毕赤酵母高效表达和生物学功能研究奠定基础。方法采用PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增hIL-10基因,以内切酶EcoRI/XbaI对hIL-10基因和质粒pPICZαA进行酶切,将酶切产物进行连接,纯化连接产物并电转化E.coliDH5α,用含Zeocin的LB培养基筛选重组大肠杆菌并抽提质粒进行酶切和DNA测序鉴定;以重组质粒电转化感受态毕赤酵母,以不同浓度Zeocin的YPDS平板筛选重组酵母菌株并对重组酵母作菌落PCR鉴定。结果经PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增获得大小约540bp的片段;重组质粒经EcoRI/XbaI酶切后获得约540bp和3500bp的两种片段;DNA测序结果与Genbank中hIL-10基因序列一致;重组酵母经菌落PCR也获得540bp的片段。结论成功构建了hIL-10基因的酵母表达载体pPICZαA-hIL-10。
简介:为获得宿主菌,研究了十二烷基硫酸钠(SDS)对枯草芽孢杆菌中质粒的消除.将过夜培养的枯草芽孢杆菌24/pMX45接种于含SDS(0-0.00800)的LB培养基中,当SDS浓度(w/v)大于或等于0.00600时,菌体不能生长.SDS的亚致死浓度为0.00500,其致死率达9900.菌液稀释后涂LB平板,再随机挑选单菌落至抗性平板,检测由质粒编码的红霉素抗性是否丢失.氯化铯-溴化乙锭梯度离心及质粒DNA的电泳图像证实了24/pMX45的衍生菌株A7中的质粒已完全被消除.A7延迟期较短,并且细胞浓度高于24/pMX45.用SDS处理8h后,24/pMX45的遗传标记开始丢失,消除率持续增高至22h,随之消除质粒的菌体量保持恒定.在未经SDS处理的对照实验中,相同条件下培养24h及48h后,没有发现质粒自然丢失的现象,因此SDS能消除枯草芽孢杆菌中的质粒.
简介:【摘要】课堂教学源于教材,教材是教学的素材,是教师教和学生学的材料,教师如何“用教材来教”,如何在教学过程中“用好教材”,还要以教师在教学过程中对学生学习现状与进程的把握为决策依据。新课程主张“用教材教”,新课程标准也强调教师不应只是被动的课程执行者,而应成为课程的开发者、决策者和创造者。