简介:摘要目的探讨大鼠正畸过程中牙周组织糖酵解途径变化。方法48只雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为对照组、正畸7 d组、正畸14 d组,建立大鼠正畸牙齿移动模型。采用游标卡尺测量大鼠正畸治疗后牙齿移动距离;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠牙槽骨组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6表达水平;采用微量法检测大鼠牙槽骨组织中糖酵解途径关键酶丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)的活性;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测糖酵解上游调控因子信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达水平,计量数据比较采用t检验。结果正畸7 d组[(0.476±0.017) mm]、正畸14 d组[(0.715±0.027) mm]大鼠牙齿移动距离明显高于对照组(0 mm),差异有统计学意义(t=16.563、20.730,P<0.05)。正畸7 d组[(139.411±5.985) ng/ml]、正畸14 d组[(196.068±8.972) ng/ml]大鼠牙槽骨组织中TNF-α的水平明显高于对照组[(33.556±2.756) ng/ml],差异有统计学意义(t=10.361、13.426,P<0.05)。正畸7 d组[(297.829±10.309) ng/ml]、正畸14 d组[(372.771±14.675) ng/ml] IL-1β的水平明显高于对照组[(127.656±4.274) ng/ml],差异有统计学意义(t=7.852、10.446,P<0.05)。正畸7 d组[(251.620±10.925) ng/ml]、正畸14 d组[(320.611±14.981) ng/ml] IL-6的水平明显高于对照组[(94.633±4.394) ng/ml],差异有统计学意义(t=9.156、12.749,P<0.05)。正畸7 d组[(109.654±5.093) U/mgprot]、正畸14 d组[(163.626±5.282) U/mg蛋白]大鼠牙槽骨组织中PK的活性明显高于对照组[(57.083±2.852) U/mg蛋白],差异有统计学意义(t=6.363、9.532,P<0.05)。正畸7 d组[(120.173±7.187) U/mg蛋白]、正畸14 d组[(171.069±6.230) U/mg蛋白] LDH的水平明显高于对照组[(78.421±4.030) U/mg蛋白],差异有统计学意义(t=5.580、7.644,P<0.05)。正畸7 d组[(38.503±1.895) U/mg蛋白]、正畸14 d组[(51.411±3.095) U/mg蛋白] PFK的水平明显高于对照组[(24.236±1.200) U/mg蛋白],差异有统计学意义(t=5.591、7.447,P<0.05)。正畸7 d组(1.099±0.050)、正畸14 d组(1.494±0.053)大鼠牙槽骨组织中STAT3的蛋白表达水平明显高于对照组(0.604±0.045),差异有统计学意义(t=7.066、9.332,P<0.05)。正畸7 d组(1.317±0.049)、正畸14 d组(1.664±0.058) HIF-1α的蛋白表达水平明显高于对照组(0.748±0.043),差异有统计学意义(t=6.248、8.693,P<0.05)。结论大鼠正畸牙齿移动过程中牙周组织糖酵解水平明显增强,并可能进一步加剧正畸过程中牙周组织的炎性反应。
简介:【摘要】目的:探讨翠云草总黄酮(TFS)对胃癌细胞增殖、凋亡、糖酵解水平的影响及其对环状RNA_0009910(circ_0009910)的调控作用。方法:体外培养人胃癌细胞AGS,使用不同浓度的TFS处理细胞,同时分别将pcDNA、pcDNA-circ_0009910转染至AGS细胞,继而使用TFS处理细胞;采用MTT法与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用乳酸脱氢酶比色法检测乳酸含量,以及检测葡萄糖消耗;采用qRT-PCR法检测circ_0009910的表达量;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:TFS处理后可明显降低细胞活力与Bcl-2蛋白水平及葡萄糖消耗、乳酸水平(P<0.05),减少克隆形成数(P<0.05),提高凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),降低circ_0009910的表达水平(P<0.05),且呈剂量依赖性;与TFS-H+pcDNA组比较,TFS-H+pcDNA-circ_0009910组细胞活力、Bcl-2蛋白水平及葡萄糖消耗、乳酸水平显著升高(P<0.05),克隆形成数显著增多(P<0.05),凋亡率及Bax蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:翠云草总黄酮可通过下调circ_0009910的表达从而促进胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,以及降低糖酵解水平。
简介:摘要头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是严重危害人类生命及健康的疾病之一。糖酵解是一种糖的分解代谢途径,高度活跃的糖酵解代谢是肿瘤细胞的特征之一,异常增加的葡萄糖摄取和乳酸堆积赋予了肿瘤细胞更好的生长优势。但其在HNSCC恶性进展中的生物学功能及其与免疫微环境、信号通路的相互作用有待进一步明确。顺铂是HNSCC最常用的化疗药物之一,肿瘤细胞多药耐药性的产生可能是影响其疗效的主要原因。以往肿瘤耐药的机制研究显示细胞糖酵解水平降低,本文着重探讨HNSCC顺铂耐药的糖酵解特征,以阐明糖酵解对抗肿瘤药物耐药性的影响和作用机制。
简介:摘要目的研究糖酵解通路关键酶在婴幼儿血管瘤中的表达变化并探究其作用。方法收集从2020年6月至2020年12月在四川大学华西医院小儿外科行手术切除的8例婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)组织标本。免疫组织化学分析增殖期组织与消退期组织中糖酵解关键酶的表达,进一步在细胞水平采用Western blot分析在血管瘤内皮细胞(hemangioma-derived endothelial cell,HemEC)与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的表达情况。应用CCK8、Transwell与Annexin V/PI法检测抑制剂PFK15干预磷酸果糖激酶2/果糖2,6二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)表达后的HemEC的增殖、迁移及凋亡能力。结果在增殖期血管瘤组织中,糖酵解关键酶葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,Glut1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、PFKFB3、磷酸果糖激酶1(phosphofructokinase-1,PFK1)、M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)及乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的表达水平均高于消退期血管瘤组织。在细胞表达层面,Western blot结果显示,增殖期HemEC中糖酵解关键酶的表达水平均高于HUVEC。使用PFKFB3特异性抑制剂PFK1干预细胞后,HemEC增殖受到显著抑制(P<0.05),HemEC迁移受到显著抑制(163±12比64±7,P<0.01),细胞凋亡升高(11.67±0.74比7.25±0.41,P<0.01)。结论糖酵解关键酶在IH增殖期血管瘤组织中比消退期组织中表达高,在HemEC中表达强于HUVEC。阻断糖酵解关键酶PFKFB3的活性能抑制HemEC增殖,促进凋亡。
简介:摘要结直肠癌(CRC)是一种高度侵袭性的恶性肿瘤,在全球范围内,其发病率和死亡率分别位居第3位和第2位。近年来,免疫检查点抑制剂(ICIs)的问世,为恶性肿瘤患者带来了新的希望。但是这些以T细胞为基础的免疫治疗仅在少数患者中有效。研究显示,肿瘤细胞和CD8+T细胞之间的相互作用是影响免疫治疗疗效的关键因素。像快速增殖的肿瘤细胞一样,活化后的CD8+T细胞主要依赖糖酵解维持细胞增殖和功能发挥。在肿瘤微环境(TME)中,CRC细胞通过消耗大量的葡萄糖挤压CD8+T细胞的营养来源,同时伴随着乳酸等代谢毒物的产生和胞外堆积,最终导致CD8+T细胞糖酵解受损,细胞逐渐丧失功能变为耗竭和衰老,阻碍有效的抗肿瘤免疫治疗。因此,深入了解肿瘤细胞与CD8+T细胞糖代谢之间的相互作用,可以为研发更加有效的联合治疗提供策略。本文就此研究领域的进展做一综述。
简介:摘要目的探讨分泌性中耳炎患者中耳积液糖酵解代谢物变化及其与炎症水平的关系。方法选取2018年2月到2022年2年驻马店市中心医院收治的57例分泌性中耳炎患者和同期57例健康体检者作为研究对象,收集两组研究者的中耳积液,采用代谢组学分析与糖酵解相关的代谢物的变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组中耳积液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平。培养人中耳上皮细胞系(HMEEC),分为采用1 mmol/L和10 mmol/L乳酸处理24 h,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析炎症因子mRNA和细胞因子水平。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析组蛋白乳酸化水平。组间数据比较采用t检验。结果分泌性中耳炎中耳积液中糖酵解主要产物乳酸水平[(5.37±0.80) mmol/L]明显高于健康者[(1.41±0.25) mmol/L],差异有统计学意义(t=17.690,P<0.05)。分泌性中耳炎患者中耳积液中TNF-α和IL-1β水平[(70.02±8.73)、(90.65±12.54) ng/ml]明显高于健康者[(26.09±6.76)、(11.69±1.63) ng/ml],差异有统计学意义(t=14.890、23.360,P<0.05)。1 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞TNF-α和IL-1β mRNA水平(1.46±0.14、2.14±0.12)明显高于对照细胞(1.05±0.09、1.20±0.14),差异有统计学意义(t=6.015、7.877,P<0.05)。10 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞TNF-α和IL-1β mRNA水平(2.14±0.12、2.29±0.11)明显高于1 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞TNF-α和IL-1β mRNA水平(1.46±0.14、1.73±0.09),差异有统计学意义(t=17.900、15.250,P<0.05)。1 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞TNF-α和IL-1β蛋白水平[(34.23±3.24)、(24.36±2.72) ng/ml]明显高于对照细胞[(15.33±2.52)、(11.86±2.31) ng/ml],差异有统计学意义(t=11.270、8.587,P<0.05)。10 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞TNF-α和IL-1β蛋白水平[(51.68±3.90)、(44.63±4.07) ng/ml]明显高于1 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞TNF-α和IL-1β蛋白水平[(34.23±3.24)、(24.36±2.72) ng/ml],差异有统计学意义(t=8.434、10.130,P<0.05)。1 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞组蛋白乳酸化水平(1.42±0.13)明显高于对照细胞(0.83±0.09),差异有统计学意义(t=9.246,P<0.05)。10 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞组蛋白乳酸化水平(1.96±0.19)明显高于1 mmol/L乳酸处理的HMEEC细胞(1.42±0.13),差异有统计学意义(t=5.789,P<0.05)。结论分泌性中耳炎患者中耳积液中糖酵解产物乳酸水平显著增加,高乳酸影响了中耳上皮细胞炎症因子的分泌。
简介:摘要目的通过生物信息学方法对皮肤黑色素瘤中糖酵解相关基因进行分析并构建预后模型,对黑色素瘤患者进行精准分组以提高治疗的针对性。方法获取癌症基因组图谱(TCGA)数据库中皮肤黑色素瘤患者[470例,男290例,女180例,中位年龄58岁(15~90岁)]的mRNA表达谱和临床相关数据,并以基因型和基因表达量关联数据库(GTEx)中的正常皮肤组织样本(812例,男467例,女345例)作为对照。采用基因集富集分析(GSEA)富集出与皮肤黑色素瘤显著相关的糖酵解通路差异表达基因。通过Cox回归分析筛选与黑色素瘤预后显著相关的mRNA,并构建黑色素瘤患者预后风险评分(RS)模型。根据风险评分模型RS值的中位值,将符合生存分析条件的450例黑色素瘤患者分为高风险组和低风险组,分析两组生存时间、生存率的差异,并通过绘制ROC曲线,评估RS值对黑色素瘤患者10年、20年死亡风险的预测价值。结果通过GSEA分析发现糖酵解相关的REACTOME_GLYCOLYSIS通路在黑色素瘤样本中显著富集,标准化富集评分(NES)为1.74,错误发现率(FDR)为0.016。通过对该通路117个差异表达基因(上调71个,下调46个)的单因素和多因素Cox回归分析,筛选出9个与皮肤黑色素瘤预后密切相关的mRNA分子,包括4个保护性因子(STAT3、MLXIPL、IDUA和AURKA)和5个危险性因子(KIF20A、PGM1、GYS1、ALG1和HDAC4)。根据多因素Cox回归分析的回归系数及各基因mRNA表达水平,建立预后风险评分模型:RS=0.31×KIF20A + 0.19×PGM1 - 0.27×STAT3 + 0.24×GYS1 - 0.25×MLXIPL - 0.19×IDUA + 0.33×ALG1 - 0.28×AURKA + 0.26×HDAC4。以RS值的中位值0.83作为cut-off值,将患者分为高风险组(225例)和低风险组(225例),高风险组的总体生存时间为(6.72±0.55)年,明显少于低风险组的(13.60±1.03)年(P<0.001);且高风险组的10年、20年生存率明显低于低风险组(24.1% vs. 50.9%;0 vs. 25.2%;P值均<0.001);RS值对黑色素瘤患者的10年和20年生存预测的ROC曲线下面积分别为0.730、0.749。多因素Cox回归分析显示,RS值是黑色素瘤预后的独立预测因素。结论所构建的皮肤黑色素瘤预后风险评分模型可以有效地对患者进行预后风险评价,为后续筛选与糖酵解相关的预后较差患者并进行针对性治疗的研究提供基础。
简介:摘要目的观察骨形成蛋白4 (BMP4)对人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中糖酵解水平的影响。方法实验研究。将体外培养的hRMEC分为正常组、4-羟基壬烯醛(HNE)组(4-HNE组)、4-HNE+BMP4处理组(BMP4组)。4-HNE组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE;BMP4组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE刺激6 h后,再加入100 ng/ml重组人BMP4。采用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;噻唑蓝比色法检测4-HNE对细胞生存力的影响;细胞划痕实验、Transwell小室法测定4-HNE对细胞迁移能力的影响。采用实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测正常组、4-HNE组细胞中BMP4、SMAD同源物9 (SMAD9) mRNA、蛋白相对表达量。采用Seahorse XFe96细胞能量代谢分析仪测定正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解代谢水平。组间比较采用单因素方差分析。结果正常组、4-HNE组、BMP4组hRMEC内ROS水平分别为21±1、815±5、810±7。与正常组比较,4-HNE组、BMP4组ROS水平显著升高,差异有统计学意义(F=53.40、50.30,P<0.001)。正常组、4-HNE组细胞生存力分别为1.05±0.05、1.28±0.05;迁移率分别为(0.148±0.005)%、(0.376±0.015)%;穿过小孔的细胞数分别为(109.0± 9.6)、(318.0±6.4)个。与正常组比较,4-HNE组细胞生存力、细胞迁移率、穿过小孔细胞数量明显提高,差异均有统计学意义(F=54.35、52.84、84.35,P<0.05)。4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9 mRNA相对表达量分别为1.680±0.039、1.760±0.011;与正常组比较,差异有统计学意义(F=53.66、83.54,P<0.05 )。正常组、4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9蛋白相对表达量分别为0.620±0.045、0.860±0.190和0.166±0.049、0.309±0.038;与正常组比较,差异有统计学意义(F=24.87、53.84,P<0.05 )。正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平分别为1.21±0.12、2.84±0.24、1.78±0.36,2.59± 0.11、5.34±0.32、2.78±0.45和2.64±0.13、5.20±0.28、2.66±0.33;与正常组比较,差异均有统计学意义(4-HNE组:F=86.34、69.75、58.45,P<0.001;BMP4组:F=56.87、59.35、58.35,P<0.05)。4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平比较,差异均无统计学意义(F=48.32、56.33、55.01,P>0.05)。结论BMP4通过糖酵解诱导hRMEC的增生和迁移。
简介:摘要目的探讨神经轴突导向因子2(Slit2)对神经胶质瘤细胞的增殖、迁移和糖酵解的影响。方法选取2018年6月到2022年6月河南省商丘市第一人民医院收治的61例神经胶质瘤和癌旁组织作为研究对象,采用免疫组织化学分析Slit2蛋白在神经胶质瘤和癌旁组织的阳性率。将神经胶质瘤细胞株U251堆积分为对照组和Slit2 KD组,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和体外移植瘤实验分析细胞增殖;采用Transwell和划痕实验分析细胞迁移;采用试剂盒检测葡萄糖提呈和乳酸水平;采用生物化学酶法检测己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。组间比较采用t检验。结果神经胶质瘤组织中Slit2蛋白表达阳性率(43/61,72.13%)明显低于癌旁组织(16/61,26.23%),差异有统计学意义(χ2=12.091,P<0.05)。对照组细胞活力(1.86±0.07)明显高于Slit2 KD组细胞(1.22±0.08),差异有统计学意义(t=13.910,P<0.05)。对照组细胞在体内成瘤体积[(829.50±44.12) mm3]明显高于Slit2 KD组细胞[(531.00±64.42) mm3],差异有统计学意义(t=12.090,P<0.05)。对照组细胞在体内成瘤重量[(4.63±0.66) g]明显高于Slit2 KD组细胞[(2.22±0.20) g],差异有统计学意义(t=11.070,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(81.17±4.49)个]和划痕愈合率[(78.33±8.04)%]明显高于Slit2 KD组细胞(56.50±6.66)[(54.67±6.21)%],差异有统计学意义(t=7.525、5.703,P<0.05)。对照组细胞己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性(0.96±0.04、0.95±0.04、0.97±0.04)明显高于Slit2 KD组细胞(0.64±0.09、0.73±0.04、0.51±0.05),差异有统计学意义(t=7.961、8.963、15.780,P<0.05)。对照组细胞葡萄糖摄取量和乳酸水平[(0.75±0.08)、(3.92±0.31) mmol/L]明显高于Slit2 KD组细胞[(0.32±0.04)、(2.75±0.28) mmol/L],差异有统计学意义(t=12.350、6.782,P<0.05)。结论Slit2在神经胶质瘤细胞中高表达,通过调节糖酵解通路关键酶活,介导神经胶质瘤细胞的增殖和迁移能力。