简介：摘要目的分析肠道病毒71型2011年本地流行株VP1基因特征学特征。方法收集2011年本地手足口病患者临床标本332份，进行EV71荧光定量RT-PCR鉴定，采用RT-PCR对15株分离到的EV71进行VP1编码区基因扩增，并对扩增产物进行核苷酸序列测序和分析。根据VP1测序结果与国内外报道的各基因型和基因亚型EV71VP1序列进行同源性和亲缘进化分析。结果165份标本鉴定为EV71，分离株的VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别是97.5%～99.9%和99.4%～100%。与C4a亚型的核苷酸和氨基酸最高。亲缘进化树显示，本地株全部属于C4基因亚型的C4a进化分支。结论本地区分离的EV71与近几年国内其他地区EV71分离株亲缘关系很近，有共同进化的趋势，属于C4基因亚型的C4a进化分支，并存在多个传播链。

简介：

简介：目的了解河南省2009年肠道病毒71型（EV71）流行株VP1基因特征。方法采用RT-PCR方法从手足口病患者粪便、咽拭子样品中扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建序列遗传发育树。结果262份样品中,VP1基因RT-PCR扩增鉴定结果显示111份样品阳性,选取其中20份样品进行VP1基因全序列测定,结果显示其与C4亚型代表株核苷酸同源性为90.8%～93.6%,氨基酸同源性为94.0%～99.3%。结论河南省手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型。

简介：目的阐述引起安徽省2008年手足口病（hand,footandmouthdisease,HFMD）流行的肠道病毒71型（enterovirus71,EV71）基因特征。方法采集HFMD暴发初期患者标本,进行病毒分离、培养,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定上述培养物。扩增病毒株及核酸样本的VP1编码区全基因,并进行序列测定和分析。结果暴发初期分离出3份病毒株,经中和试验及RT-PCR证实为EV71。根据VP1全基因序列与EV71基因型、亚型参考株构建亲缘性关系树,17份测序结果与C4亚型聚为一簇,与A、B、C1、C2、C3、C4基因型别（亚型）的核苷酸的同源性分别为：82.0%-83.0%、84.3%-85.4%、89.7%-91.1%、89.1%-90.7%、88.3%-89.8%、93.0%-94.6%;氨基酸的同源性分别为：93.9%-95.2%、96.6%-97.6%、97.9%-98.6%、98.6%-99.3%、98.3%-98.9%、98.6%-99.6%;簇内比较显示,1株2006年的EV71毒株与另16份2008年样本在C4亚型内又分属两个亚簇,核苷酸、氨基酸的同源性分别为：96.2%-96.9%、98.3%-99.3%。结论引起安徽省2008年HFMD的EV71为C4亚型,与2006年分离的1份毒株有差异,提示安徽省存在C4亚型的不同分支。

简介：用原子力显微镜（AFM）观察线性DNA并探讨其成像条件。用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VP1基因DNA片段，纯化回收后配制成含和不含1mmol/LMgCl2的水溶液，DNA终浓度为100μg/ml。分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上，吸收1min，用滤纸吸去残液，氮气吹干，在室温下采用MultiModeAFMNanoscopeⅢa的敲击模式成像。同时比较新制备和多次使用过的探析所获得图像的质量，对两种探针进行扫描电镜观察。电泳证明获得了0.83kb的VP1基因DNA线性片段，Mg^2+存在时，DNA在云母片上吸附延展较好，所获图像质量优于无Mg^2+时。新制备的探针较多次使用过的探针所获图像分辨率更高。DNA分子的表现宽度为18±2.9nm，高度为0.8±0.2nm。说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子，Mg^2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象。

简介：目的：预测柯萨奇病毒A组10型（CVA10）的VP1蛋白的线性B细胞抗原表位,为CVA10疫苗研制提供理论基础。方法：分析我国近年流行的CVA10分离株的VP1序列进化特征;选择代表株以DNAStar软件预测其VP1蛋白序列的二级结构、亲水性、柔韧性、表面可能性和抗原指数等指标,根据这些指标综合分析预测VP1蛋白中可能的B细胞表位区域。结果：相对于CVA10原型株,我国CVA10分离株的VP1序列已发生了较大的变化;CVA10代表株的VP1中存在较多的β转角,而无规则卷曲结构较少;根据VP1序列的理化性质和二级结构等多种特征,预测到9个可能的线性B细胞表位。结论：成功预测到我国CVA10分离株VP1可能的B细胞表位区域,为CVA10表位疫苗的研发提供了理论基础。

简介：根据GenBank公布的小鹅瘟病毒VP1基因保守序列设计了一对引物,建立了检测小鹅瘟病毒PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该PCR方法对小鹅瘟病毒扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对小鹅瘟病毒检测的灵敏性为1pg总DNA量。以上结果表明,该PCR方法特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于小鹅瘟的早期确诊和病毒鉴定。

简介：摘要目的了解云南省手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)监测中分离到的2株柯萨奇病毒A12型(Coxsackievirus A12, CV-A12)VP1区基因序列特征。方法对HFMD监测中获得的临床标本开展RD细胞上的病毒分离培养，通过荧光定量PCR和测序方法鉴定为CV-A12的毒株，进一步对其VP1区进行序列测定，并搜集GenBank中CV-A12其他型别的参考株，共同构建系统进化树，分析CV-A12的VP1区基因特征。结果获得2株CV-A12分离株的VP1区序列(888 bp)，与2018年的云南参考株毒株同源性最高，其VP1区氨基酸在多个位点上与其他云南参考株存在特异突变。结论云南省HFMD标本中发现的CV-A12已经发生地区特异性VP1基因变异。

简介：摘要目的了解浙江省衢州地区儿童病毒性脑炎埃可病毒(Echovirus, ECHOV)优势血清型与变迁并分析ECHOV VP1基因分子特征。方法采集53例病毒性脑炎患儿脑脊液标本进行病毒分离培养。采用荧光RT-PCR和PCR分别检测脑脊液标本中人肠道病毒(human enterovirus，HEV)包括ECHOV、柯萨奇病毒(coxsackie virus，CV)和新型肠道病毒(enterovirus，EV)，以及流行性乙型脑炎病毒(japanese encephalitis virus, JEV)、腮腺炎病毒(mumps virus, MuV)、西尼罗病毒(west nile virus，WNV)、基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)和巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)。HEV阳性脑脊液标本采用RT-PCR法扩增HEV-B组全长VP1基因序列，测序后用多种生物信息学软件分析ECHOV VP1基因型、基因重组和遗传进化特征。结果RD细胞分离培养出6株毒株，但Hep-2细胞分离培养结果均阴性。11份标本HEV通用荧光RT-PCR结果阳性，但其他病毒检测结果均阴性。11份HEV阳性标本中6份检出ECHOV，与分离培养结果一致，分别为4株ECHO6、1株为ECHO7和1株ECHO30血清型，柯萨奇病毒和EV检测结果均阴性。4株ECHO6病毒属于ECHO6-C2基因亚型，但分为ECHO6-41/46和ECHO6-45/48两个流行克隆，ECHO7和ECHO30分别属于ECHO7-C和ECHO30-C基因型。ECHO6与ECHO30病毒在进化过程中存在VP1基因重组。结论ECHOV是该地区儿童病毒性脑炎主要病原体，且可能存在局部暴发流行。ECHO6与ECHO30病毒VP1基因存在重组可能性，ECHO6有成为ECHOV优势血清型的可能。

简介：摘要目的原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5，CV-A5)VP1蛋白，并制备抗VP1多克隆抗体(多抗)，为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5 VP1-ΔN56后，克隆至原核表达载体pGEX-6P-1，获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)，表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔，制备多抗。结果重组表达载体构建成功，融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明，获得的兔多抗效价为107，可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。

简介：摘要目的了解辽宁省手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)患者中分离到的柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A group 6 type, CV-A6)VP1区基因特征。方法收集2014—2018年辽宁省14个市送检的HFMD患者非肠道病毒A组71型(enterovirus A group 71 type, EV-A71)和非柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirusA16, CV-A16)肠道病毒(enterovirus, EV)的阳性标本，通过细胞培养法分离EV，提取病毒RNA，用RT-PCR法对EV VP1区基因扩增和序列测定。利用Blast对测序结果比对后确定病毒基因型别。对鉴定为CV-A6的分离株利用软件DNAStar和MEGA5.0进行VP1区同源性分析，并构建系统进化树。结果2014—2018年辽宁省共收到非EV-A71和非CV-A16其他EV的阳性标本7 379份，用人横纹肌瘤细胞(rhabdomyosarcoma cells, RD)分离出111株CV-A6。通过遗传进化分析显示，CV-A6流行株形成A、B、C、D分支，D分支分为D1～D3亚分支，2014—2018年43株辽宁省CV-A6分离株处在D2和D3亚分支，D2亚分支11株，D3亚分支32株。辽宁CV-A6分离株间的VP1区基因核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为91%～100%和95.5%～100%；与处在A分支的原型株Gdula的核苷酸同源性为79%～82%，氨基酸同源性为90.9%～92.4%，亲缘关系较远；与2008年芬兰变异株KM114057共同处在D分支，亲缘关系近，核苷酸同源性为93%～96%，氨基酸同源性为93.9%～98%。结论辽宁省CV-A6分离株有D2和D3分支共同流行传播，其中D3分支是优势流行株。

简介：摘要目的分析并比较2016年浙江省温岭地区EV71型轻、重症手足口病(HFMD)患儿病毒分离株VP1和VP4区基因特征及进化关系。方法研究对象为2016年浙江省温岭市第一人民医院分离鉴定的EV71型HFMD患儿，随机选取轻、重症HFMD患儿EV71病毒株各6例，进行VP1和VP4区基因扩增和测序，利用DNAStar和Mega 6.0软件对测序结果与美国国立生物信息中心公布的EV71典型基因代表株(A、B1～5、C1～4亚型)进行核苷酸和氨基酸比对分析，并构建系统进化树。结果轻、重症手足口病患儿性别(χ2＝14.51，P<0.05)和年龄(t＝2.82，P<0.05)差异无统计学意义。两组EV71分离株的VP1区核苷酸同源性为95.8%～99.6%，氨基酸同源性为99.1%～100%；VP4区核苷酸同源性为95.0%～99.9%，氨基酸同源性为99.0%～100%，轻、重症EV71分离株同源性高。它们与典型C4a基因型代表株最接近，氨基酸同源性为：96.6%～100%(VP1)和94.3%～100%(VP4)。3例EV71型重症HFMD患儿分离株分别出现VP1区V170L突变(缬氨酸→亮氨酸)，VP1区A293S(丙氨酸→丝氨酸)以及VP4区T7A(苏氨酸→丙氨酸)，其他未见明显突变。结论2016年浙江温岭地区轻、重症HFMD患儿EV71病毒分离株VP1和VP4区同源性高，且均属于C4a基因亚型。其中几个位点的氨基酸突变可能与浙江温岭地区HFMD患儿疾病危重有关。

简介：摘要目的阐明河南省安阳市柯萨奇病毒A10(CV-A10)手足口病流行状况，分析其VP1基因变异和进化特征，为CV-A10病毒研究及手足口病防控工作提供依据。方法收集2011—2015年安阳地区医院收治的手足口临床病例，获得人口流行病学信息和粪便标本，利用荧光定量PCR检测并对肠道病毒进行分型；选取CV-A10感染病例，对CV-A10 VP1基因扩增并测序、亚型鉴定、构建系统发生树、分析病毒进化特征和变异特点。结果2011—2015年分别收集277、514、479、505和495例研究对象，检出肠道病毒阳性标本1 863份(阳性率为82.07%)。CV-A16、EV-A71、CV-A6和CV-A10为主要病毒，占肠道病毒阳性标本的94.26%，其中CV-A10阳性样本52例(占2.79%)。基于数据库CV-A10 VP1基因序列，发现CV-A10可分为A、B、C、D 4个基因型，核苷酸序列相似性为75.1%～84.2%。获得安阳地区26例样本中的CV-A10 VP1基因序列，存在2种基因亚型。结论CV-A16和EV-A71是引起手足口病的主要病毒，CV-A6、CV-A10病原也应该引起关注和重视，近年来CV-A10的流行水平总体平稳，但存在流行水平上升的风险。

简介：摘要目的探讨巨细胞病毒中枢神经系统感染患儿脑脊液（CSF）中VP1序列分子分型研究的临床价值。方法2010年1月至2013年12月胶州市人民医院和滨州医学院附属医院采用通用引物和VP1段分子分型引物分别对63例无菌性脑膜炎和脑炎患儿急性期和恢复期的CSF标本进行扩增，对VP1分型引物扩增阳性片段进行克隆、测序及分型研究。结果采用通用引物经2次PeR检测急性期患儿的CSF标本共47例（47／63，74．6％）阳性，恢复期仅3例（3／57，5．3％）阳性。采用分型引物经2次PCR检测通用引物扩增阳性的47例急性期的CSF标本共3l例（62．0％）阳性，其中4例脑炎和20例脑膜炎进行了序列测定。测序结果通过BLAST软件进行同源性对比分析，发现同一型别内序列同源性在97％-99％，不同型别之间同源性只有74％～76％，所有CSF进行病毒分离，11例（11／63，17．5％）阳性，阳性率明显低于VPl段分子分型的检测结果，除l例CSF标本病毒分离为ECHO7的患儿，通用引物扩增阳性而VPl分型引物扩增失败外，其余血清型别与VPI段分子分型研究结果完全一致。结论巨细胞病毒是儿童无菌性脑膜炎和脑炎最重要的病原体；采用通用引物所建的RTPCR是快速检测巨细胞中枢神经系统感染的有效方法；分型引物扩增VPl部分序列并测序，与GENBANK中的巨细胞病毒标准毒株进行对比，根据基因序列的同源性进行巨细胞病毒分型，为巨细胞病毒的分型及巨细胞病毒中枢神经系统感染、临床诊断研究提供了新的方法和思路。

简介：

简介：摘要目的明确2018—2020年丽江市手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）的流行情况及2020年EV-A71分离株的基因特征。方法对收集到的2018—2020年丽江市HFMD患者粪便标本进行核酸检测，结果为EV-A71阳性的标本进行病毒分离，扩增其VP1区，获得的序列与参考株构建系统进化树。结果2018—2019年，丽江市HFMD报告病例以≤5岁儿童为主。历年男性病例数均高于女性，但男女性病例阳性检出率差异无统计学意义。构成丽江市HFMD主要病原的是EV-A71、CV-A16和其他EV。其中EV-A71阳性病例2018年1份（0.48%，1/210），2019年未检出，2020年159份（66.53%，159/239）。系统进化分析显示丽江市EV-A71分离株均处于C4a分支，分离株间核苷酸和氨基酸同源性分别是99.44%~100%和99.65%~100%，与攀枝花参考株核苷酸和氨基酸同源性分别是99.10%~100%和98.99%~100%。所有丽江分离株在中国大陆EV-A71常见的氨基酸变异位点均发生了S283T和A293S突变，在B细胞抗原中和表位中的氨基酸序列均未发生改变。结论其他EV、CV-A16和EV-A71作为丽江市2018—2020年的HFMD流行的优势病原交替出现。2020年丽江市流行的EV-A71均为C4a亚型，与攀枝花参考株亲缘关系最近，考虑为攀枝花市输入传播。

简介：摘要目的研究2016年山东省烟台地区手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的病原谱组成特点，分析烟台HFMD病原谱中柯萨奇病毒A组6型(coxsackie virus A group 6 type, CV-A6)流行株的进化及VP1区重要氨基酸位点的变异情况。方法采用real-time RT-PCR方法，对2016年烟台地区采集于HFMD患者的738份样品进行肠道病毒(enterovirus, EV)核酸检测和分子定型，统计各型EV阳性标本数量及比例。根据EV的优势型别，选取8株CV-A6进行VP1区扩增，并进行核苷酸序列测定和分析，然后进行系统进化分析。结果从738份标本中检出EV 460份，主要病原构成为柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A group 16 type, CV-A16)(56.09%，258/460)、肠道病毒A组71型(enterovirus A group 71 type, EV-A71)(13.48%，62/460)、柯萨奇病毒A组10型(coxsackie virus A group 10 type, CV-A10)(10.65%，49/460)、CV-A6(9.57%，44/460)、柯萨奇病毒A组4型(coxsackie virus A group 4 type, CV-A4)(1.96%，9/460)。其中成功分离到8份CV-A6阳性标本毒株，并进行了全长VP1区核苷酸序列分析，8株CV-A6的序列分析结果表明，其核苷酸相似性为96.12%～100%，氨基酸相似性为97.78%～100%。系统进化分析显示8株CV-A6烟台株均属于D基因型中的D3基因亚型。与参考株CVA6-Gdula-AY421764相比，烟台市CVA16分离株VP1第10、14、174、194、279、283、305位氨基酸出现突变。结论CV-A16、EV-A71、CV-A10、CV-A6是引起2016年烟台地区HFMD发病的常见病原体，本次分离到的CV-A6均属于D基因型中的D3基因亚型。

简介：动词后面＂到＂的词性一直以来存在很大的争议,至今没有形成统一的观点,这一情况严重影响到相关问题的处理。为了解决这一问题,文章采用定性与定量相结合的方法,以现代汉语出现频率极高的动词、形容词为基础,从具有代表性的各种观点入手,分析了这种句型的三种构成形式以及＂到＂前面动词的情况,参照判断动词的语法标准,弄清了＂到＂的性质,从中得出结论：动词后面的＂到＂,动词特征比较突出,是动词,并没有介词化。

简介：<正>《现代汉语小词典》(中国社会科学院语言研究所词典编辑室编,商务印书馆1982年版),在“看”字条下列有八个义项,第八个义项是:“用在动词或动词结构后面,表示试一试”。本文讨论的就是这种“看”。通过讨论,以便弄清出现在“看”前面的动词或动词结构(以下记作VP)的特点,“VP看”的语用特点,并对“看”的性质作些讨论。

简介：“左VP右VP”对举格式可分为三个次类，且三个次类间存在一个语法化等级序列。语料分析发现，此格式的语法化过程贯穿两条线索：一是“左”“右”词汇语义的分化与虚化；一一是“表动作反复”格式语义功能的产生与发展。“左”“右”词汇语义的分化使其在“S＋VP”结构中由主语降格为状语，加之前后两个VP在形式和语义上的变化，古代汉语中两个并列的“S＋VP”结构最终在重新分析的作用下形成“表动作反复”的新语言形式；而这一语义功能的稳固又促使该结构获得进一步的发展，最终促成“左一个N，右一个N”这一对举格式。