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  • 简介:新型的PHD22/2000Hpsi注射泵是一款在所有HarvardApparatus显微处理注射泵中具有最大容积输出的产品。该注射泵能够支持4个位于20~200ml体积的注射通道,或者多达10个位于100ml的注射通道。通过通道之间的结合使用,一个单位泵容积在第二次补液前能够维持1000ml体积的流体输出。对注射栓的压力输出能达到400磅。每单位体积具有±0.5%的精确性及0.1%的重复性。

  • 标签: 注射泵 PHD 压力输出 大容积 微处理 通道
  • 简介:目的:建立一种便捷而经济的将DNA溶液填充至显微注射针的方法,以提高显微注射法转基因的效率。方法:将通常用于转移胚胎的口吸管稍加改进,吸取DNA溶液,从尾部直接注入显微注射针。结果:采用本方法填充显微注射针,可在2-5min完成DNA填充。结论:与传统方法相比,本法经济而高效,可加快显徽注射法制作转基因动物的实验进程。

  • 标签: DNA填充 显微注射 口吸管 微量上样器
  • 简介:特异性重组技术是现代生命科学中研究基因敲除与靶向整合的工具.它的应用实现了外源基因可预测、可重复的高效表达;对于利用模型动物进行基因分析更是具有划时代的意义;在转基因植物中的运用价值同样不可忽视.

  • 标签: 位点特异性重组 重组酶 特异位点
  • 简介:竞争性寡聚脱氧核糖核酸识别转录因子的DNA结合域,抑制了转录因子对基因的转录调控,转录因子E2F作为潜在的治疗靶,可以用于抑制肾小球系膜细胞和血管内皮细胞的增生,在部分异常增生的疾病中显示了一定的应用前景.

  • 标签: E2F 治疗靶点 细胞周期 DNA结合域 异常增生疾病
  • 简介:本实验将含有人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因cDNA的重组真核表达质粒直接注射小鼠骨骼肌,观察了hGM-CSF基因在小鼠体内的分泌表达情况。ELISA结果显示注射重组质粒DNA后,第15天左右小鼠血液hGM-CSF的表达量最高,约有97ng/ml,第20天次之,第25天和第10天的表达量相近,约有49ng/ml。生物学活性检测结果表明,实验组小鼠血液有维持TF-1依赖株细胞的生长作用。表明重组质粒DNA直接注射骨骼肌不仅能表达hGM-CSF,而且表达产物有生物学恬性。

  • 标签: 基因治疗 HGM-CSF DNA注射 骨骼肌
  • 简介:内部核糖体进入位(IRES)是mRNA5端非编码区的一段特殊序列,允许核糖体直接在此序列结合mRNA并起始翻译。对IRES的发现、分类、特征,以及细胞中是否存在该元件进行了简要综述。

  • 标签: 内部核糖体进入位点 双顺反子 非编码区 翻译
  • 简介:DNA损伤反应引起的基因组不稳定性并不足以导致肿瘤发生,还需要一些协同突变促进肿瘤的生长或存活,因此,基因组结构不稳定和周期检验突变失活是肿瘤发生的重要因素。与正常细胞不同,肿瘤细胞中细胞周期检验反应缺陷,当肿瘤细胞遭受基因毒药物损伤时,可通过激活周期检验反应阻滞细胞周期进程,加强损伤修复,导致耐药表型的产生。因此,寻找特异性的检验抑制剂来加强化疗药物或辐射对肿瘤细胞的杀伤效应,已成为肿瘤治疗的一个研究方向。

  • 标签: 细胞周期 检验点 肿瘤
  • 简介:选取了辖区内150名成人作为观察组,选择同一个区域里在性别比例、健康状况以及年龄等与观察组成人具有可比性的150名成人作为对照组。对观察组的成人接种流感疫苗的同时配合使用卡介菌多糖核酸注射液,对对照组的成人仅接种流感疫苗,分别进行观察其对流感的预防效果。观察组成人在接种流感疫苗和卡介菌多糖核酸注射液后3个月、6个月、9个月,与对照组注射流感疫苗的在流感样疾病的发病情况和治疗费用方面来进行分析比较,评价卡介菌多糖核酸注射液配合流感疫苗对成人的保护效果。结果观察组与对照组的成人进行对比分析,3、6、9个月内观察组发生流感样疾病的人数较少,而且由流感样疾病发生而导致的直接医疗费用以及因家人陪伴和误工而造成的间接费用也较少,观察组与对照组之间的差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组成人接种卡介菌多糖核酸注射液配合流感疫苗后,仅少数成人出现发热和局部硬结等症状,且症状轻微,均可以自行缓解。成人接种卡介菌多糖核酸注射液配合流感疫苗后,其流感样疾病发病率有明显下降、治疗费用也显著减少,且疫苗接种副反应少、症状轻微,可自行缓解。因此,卡介菌多糖核酸注射液能够提高机体的免疫力,能够抵御流感病毒。

  • 标签: 卡介菌多糖核酸注射液 流感疫苗 流感样疾病
  • 简介:利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并构建了含突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-D92P.将该质粒在毕赤酵母GS115菌株中表达.与野生型表达产物PEL-GS相比较,突变体表达产物PEL-D92P-GS最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性与野生型相当;突变体在40℃下的表达量为109U/mL,约为野生型的29%.结果分析表明,Pro替代Asp92后,可能是由于Pro一级结构的特点,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合.

  • 标签: 扩展青霉 碱性脂肪酶 最适作用温度 定点突变 重叠延伸PCR法 蛋白质工程
  • 简介:目的:分离羽衣甘蓝S13-b位受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化。方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RT-PCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1mmol/LIPTG诱导,用Ni—NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化。结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化,SDS—PAGE显示相对分子质量约43×10^3的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白。结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础。

  • 标签: 羽衣甘蓝 自交不亲和 S13-b位点受体激酶 原核表达 纯化
  • 简介:目的:人肌球蛋白7A(MYO7A)基因是遗传性耳聋分子筛查的候选基因之一。从已知的MYO7A非同义单核苷酸多态性(nsSNPs)位点数据库中筛选可能与致病表型相关的nsSNPs位,以提高MYO7A基因耳聋分子诊断的有效性和准确率。方法:首先,从NCBI数据中心的dbSNP数据库(dbSNP)和DeafnessVariationDatabase数据库获得MYO7A基因的SNPs数据和基因的相关信息;然后,通过SIFT、PolyPhen-2、PANTHER、PhD-SNP、MutationTaster、SNP&GO和MutPred软件进行nsSNPs表型致病性分析,预测潜在致病位;接着,应用ClustalX2和GeneDoc软件进行同源氨基酸序列比对,分析潜在致病的nsSNPs位保守性;最后,应用SwissModel平台选择性地对某些突变蛋白质的三维结构进行建模,并分析结构域的变化。结果:预测出MYO7A的104个高风险致病的nsSNPs位,包括25个已报道的耳聋相关nsSNPs位;高风险致病的nsSNPs位点中,有42个位于肌球蛋白马达(myosinmotor)结构域,其中12个预测有致病风险的nsSNPs位与MYO7A基因致聋的突变研究报道一致。肌球蛋白马达结构域中包含30个新预测的潜在致病性nsSNPs位,其中仅L366P位点在7个预测软件中具有高度一致性。通过对L366P位突变前后的三维模型构建,发现存在蛋白结构的改变,且同源性比对结果显示了该位的高度保守性。结论:MYO7A的L366P为潜在高风险致病性nsSNP位,推测该基因突变可能与耳聋表型相关。本研究所采用的分析筛选方法对MYO7A基因突变的临床筛查及其他致病基因的nsSNPs筛选具有重要的参考价值。

  • 标签: 人肌球蛋白7A 非同义单核苷酸多态性 遗传性耳聋 基因型 表型