简介：在30L搅拌式反应器中用多孔微载体培养分泌尿激酶原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞(rCHO),研究了血清浓度及溶氧对细胞生长和表达的影响.结果表明,在2×105/ml低密度接种条件下,使用低(无)血清培养基会延长细胞生长延滞期并降低比生长速率,而细胞密度大于106/ml时,血清浓度对细胞生长和产物表达的影响没有显著差别.溶氧(DO)维持在20%～45%时,对细胞表达产物和葡萄糖代谢无明显影响,但溶氧降至7%～9%时,细胞表达水平明显降低,葡萄糖代谢转化为乳酸的比例上升.

简介：目的：对南部战区某部军事飞行员血清尿酸与脂蛋白水平进行检测及相关性分析。方法：比较军事飞行员与地勤人员的血清尿酸（UA）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、载脂蛋白Al（ApoAl）、载脂蛋白B（ApoB）水平，用多元线性回归分析UA与TC、TG、HDLC、LDLC、ApoAl、ApoB等的相关性。结果：飞行员组UA与HDLC水平负相关（t=-4．527，P〈0．05），与ApoAl水平正相关（t=4．805，JP〈0．05）；相比地勤人员组，飞行员组LDLC、ApoB显著减低，ApoAl显著增高，差异有统计学意义（P〈0．05）；飞行员组中，高UA组的TC、TG、ApoB比正常UA组显著增高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：军事飞行员尿酸水平与致动脉粥样硬化的危险因子密切相关，各项指标之间趋炎和抗炎的转化待进一步研究。

简介：目的:研究磷脂化修饰对重组人超氧化物歧化酶(SOD)进入人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)、人心肌细胞(HCM)能力的影响。方法:分别运用流式细胞术和蛋白印迹分析磷脂化修饰的超氧化物歧化酶(PC-SOD)和SOD与HCAEC、HCM的结合能力,并用激光共聚焦显微术分析修饰前后的SOD在细胞中的定位。结果与结论:磷脂化修饰可显著增强PC-SOD与细胞的亲和力,并可显著增强PC-SOD进入人冠状动脉内皮细胞和人心肌细胞的能力。

简介：目的：采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法：使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果：获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论：应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。

简介：根据GenBank报道的基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)氨基酸序列和毕赤酵母偏爱密码子设计,通过化学方法合成得到适合在毕赤酵母中表达的目的TIMP-2基因序列,并将其克隆到质粒pPIC9中,构建了pPIC9-T2表达载体,PCR鉴定及测序结果表明得到了正确的TIMP-2基因序列.

简介：目的：用生物信息学方法对沙丘芦苇胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖脱水酶（PcTGD）的序列进行分析与结构预测，为后续研究提供参考。方法：以GOR法预测了PcTGD的二级结构，以ProtScale分析它的疏水性，最终通过现有的序列同源性比较，用MODELLER预测了PcTGD的三维结构。结果：PcTGD具有高度保守的活性中心Tyr＊＊＊Lys和N末端的Gly＊Gly＊＊Gly的高度保守结构。结论：PcTGD属于一个短链脱氢酶／还原酶家族。

简介：目的：检测抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）转基因山羊外源基因的拷贝数及ATⅢ蛋白的表达量,分析拷贝数与蛋白表达量的相关性。方法：用Primer5.0软件设计外源基因ATⅢ及山羊管家基因GAPDH的引物,以倍比稀释的标准品进行实时荧光定量PCR,制作标准曲线,通过标准曲线计算外源基因拷贝数;通过酶显色底物法检测ATⅢ蛋白的含量。结果：依据ATⅢ和GAPDH基因标准曲线方程计算得到的山羊个体间外源基因的拷贝数相差很大,最少的为5,最多为25,且不同转基因山羊间ATⅢ表达水平的差别达10倍以上。结论：外源基因表达水平在受到拷贝数的影响外,也受到整合位点等其他因素的重要影响。

简介：根据Ｇｅｎｂａｎｋ中大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）基因的核苷酸序列，设计并合成了一对引物，以大肠杆菌基因组ＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，并将扩增产物定向连接到克隆、测序及真核表达载体ＰＣＤＮＡ３中，进行酶切鉴定、测序及序列分析。结果表明ＰＣＲ扩增出７４１ｂｐ大小的片段，通过酶切和序列分析证明含完整的ＰＮＰ基因序列且基因插入方向正确，此序列与文献报道的ＰＮＰ基因的同源性为９９．７％。说明克隆的ＰＮＰ基因与文献报道的基本一致，ｐｃＤＮＡ３－ＰＮＰ的构建成功为今后用其进行基因转染来研究ＰＮＰ／Ｍｅｐ－ｄＲ自杀基因系统在肿瘤基因治疗中的应用打下了基础。

简介：目的：研究严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（SARS-CoV）N蛋白对甘油三酯和总胆固醇含量的影响。方法：检测分析144例SARS患者甘油三脂和总胆固醇含量在发病后的变化;将小鼠随机分组,分别注射生理盐水和SARS-CoVN蛋白,连续给药9d后检测小鼠血清中甘油三酯和总胆固醇含量的变化。结果：SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量随发病时间有升高变化（P〈0.05）,在发病40d前后甘油三酯和总胆固醇含量超标的病例数占本时间段内的病例数的比例显著高于其他时间段,而且超标的含量也明显升高。SARS-CoVN蛋白使小鼠体重明显高于对照组（P〈0.05）,甘油三酯含量在39和51d明显高于对照组（P〈0.05）,总胆固醇含量在21和39d也明显高于对照组（P〈0.05）。结论：SARS-CoVN蛋白可以升高小鼠的甘油三酯和总胆固醇的含量,其升高最为明显的时间段与SARS患者的甘油三酯和总胆固醇含量升高的时间段基本一致。由此推测,SARS-CoVN蛋白可能是促使SARS患者发病后甘油三酯和总胆固醇含量升高的重要原因。

简介：目的：对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化，找出最佳的外源蛋白表达条件。方法：在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养，优化最佳产酶条件。结果：以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100～200mL/L、甲醇浓度1g/L、pH6.0～7.0、诱导时间96h时酶的表达量最高；摇瓶模拟高密度培养表明影响酵母生长的最主要因素葡萄糖和硫酸铵的最佳浓度分别为20～45和11.5g/L；利用培养基F1进行高密度培养优于其他培养基，工程菌生长符合指数生长曲线，细胞生长延迟期为1.36h，比生长速率μ为0.4846h-1。结论：以葡萄糖为碳源，采用葡萄糖-甲醇混合诱导和100%甲醇单一诱导相结合，在菌体鲜重约为280g/L时连续诱导96h，菌体生长良好，不会出现自溶，且酶的表达量最高，为摇瓶培养的3倍多，酶活最高可达540U/mL。

简介：目的：与定量比值法比较，探讨全自动直接定量法检测红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）活性的可行性。方法：同时采用定量比值法（即硝基四氮唑蓝定量法）和全自动直接定量法，检测219例肝素抗凝静脉血标本的红细胞G-6-PD活性。结果：定量比值法检测G-6-PD缺乏的阳性率为9．13％，全自动直接定量法检测的G-6-PD缺乏阳性率为9．58％，两种方法检测结果无显著性差异（P〉0．05）。结论：定量比值法简单易行，适用于卫生条件有限的基层医疗单位；全自动直接定量法快速准确，是一种可批量检测的理想筛选方法。

简介：目的：研究血管平滑肌细胞内转化生长因子β（TGF-β）信号怎样调节赖氨酰氧化酶（LOX）的表达。方法：分离小鼠原代血管平滑肌细胞,用携带不同Smad4干扰序列的慢病毒感染原代细胞,建立Smad4敲低稳定细胞系;分别用TGF-β刺激原代细胞或对照和Smad4敲低细胞,利用免疫印迹及Real-timePCR技术检测Smad4敲低后LOX的表达改变。结果：获得了Smad4敲低的细胞;TGF-β能诱导LOX表达,且在Smad4敲低的细胞内,LOX升高更明显。结论：TGF-β通过Smad4非依赖的方式促进LOX的表达。

简介：目的：构建人血清白蛋白（hSA）与小鼠乳清酸蛋白（mWAP）调控序列的杂合基因座。方法与结果：在pBR322载体上连入预先无痕连接的3对同源臂,利用基于Red同源重组系统的缺口修复（gap-repair）技术,分别对8kb的mWAP基因座3′调控区、16kb的hSA基因组编码序列及13kb的mWAP基因座5′调控区进行连续3次基因抓捕,最终将全长37kb的乳蛋白杂合基因座构入pBR322载体;通过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,确定mWAP基因座中的编码序列被精确地置换为hSA的基因组编码序列。结论：构建了整合有mWAP-hSA杂合基因座的pBR322载体,为研究杂合基因座在乳腺中的表达效果及置换型基因座表达的可行性提供了数据。

简介：目的：构建一个牛dSl酪蛋白调控序列指导人溶菌酶（hLYZ）基因组序列的杂合基因座。方法：采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术。将6个无痕连接的同源臂插入以pBR322为载体的骨架中，构成能进行3次连续基因抓捕的载体，利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术，分别抓捕牛aSl酪蛋白3’端调控序列（9kb）、hLYZ基因座序列（5kb）、牛axSl酪蛋白5’端调控序列（20kb），使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上，形成牛oLSl酪蛋白一hLYZ杂合基因座。结果：实验经过PCR扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定，验证了hLYZ的基因组序列对牛仪S1酪蛋白编码基因组序列的精确置换。结论：这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法。

简介：目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5mmol/LIPTG诱导10h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10^5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。