采用核酸检测与血清学检测进行血液筛查时两种检测策略的功效分析

臧亮王东刘颖邓雪莲

【摘要】目的采用血清学检测与核酸检测两种方法进行血液筛查检测时，有两种策略可以进行选择，一种是血清学实验无反应性的再进行核酸检测，另一种是两种方法同时进行，对这两种策略进行比较，已得到更加符合实验室实际工作情况的检测策略。方法对2011年6月1日～2012年5月31日共60418份标本进行血清学检测的同时，31318份标本采用诺华的单检系统进行平行检测，29100份标本采用罗氏的6混样系统进行平行检测。分析采用不同的检测策略对实验室检测功效的影响。结果罗氏检测的29100份标本，共检测了273架，分拆了56个POOL，单检标本数为336个，分拆的次数占总检测架数的20.5%。诺华检测的31318份标本，分别在318个工作列表进行检测，呈反应性标本共122个，其中在一个工作表中出现2个以上呈反应性标本的次数为13次，每个工作表出现呈反应性标本的概率为34.3%。结论罗氏的混样系统采用平行检测时增加的成本较高，诺华的单检系统增加的成本较少，实验室在进行核酸检测时如果同时考虑成本和效率的问题，就需要制定符合实际工作需要的策略。

随着核酸检测技术在血液筛查检测中越来越多的被广泛应用，其检出窗口期感染和隐匿性感染的的能力得到了更为广泛的数据支持[1-3]。然而由于核酸检测的成本较高，加上国内的血站检测大都采用两遍血清学检测加一遍核酸检测的方案，因此成本又进一步加大，所以大多数的血站都采用血清学无反应性的标本再进行核酸检测的策略，以节约成本。而同时进行血清学和核酸检测可以缩短检测的周期，提高血液的利用率，对于缓解紧张的血液资源有很好的效果。我中心一直采用平行检测的策略，现将我中心近一年的混样检测和单检并行的检测数据报告如下。

1材料和方法

1.1标本来源2011年6月1日～2012年5月31日共60418份无偿献血者标本。血清学检测采用5mlEDTA-K2抗凝的真空采血管，核酸检测采用5mlEDTA-K2抗凝的带分离胶的真空采血管。检测要求在48小时内全部完成，无法完成检测的存于-20℃保存。

1.2试剂与仪器酶联免疫试剂:HBsAg(厦门新创、雅培MUREX、索灵MUREX)，抗-HCV(厦门新创、雅培、索灵)，抗-HIV(厦门新创)，HIV抗原/抗体(法国伯乐)，梅毒特异性抗体(厦门新创、万泰)。核酸检测试剂:1)罗氏诊断试剂:HBV、HCV、HIV(1型+2型)核酸联合检测试剂(PCR-荧光法);2)诺华诊断试剂:HBV、HCV、HIV(1型)核酸检测试剂(TMA-化学发光法)，HBV、HCV鉴别探针试剂，HIV(1型)鉴别探针试剂。ATplus2全自动加样系统、RSP全自动加样系统、FAME24/20(瑞士哈米尔顿)，STAR标本混样设备(瑞士哈米尔顿)，Cobass201核酸检测系统、ProcleixTigris核酸检测系统。

1.3试验流程无论是诺华的单检系统还是罗氏的6混样检测系统都与血清学检测平行进行。

1.4血清学检测采用两遍检测的策略，HBsAg、抗-HCV、HIV抗原/抗体采用一遍进口试剂加一遍国产试剂，梅毒特异性抗体采用两遍国产试剂进行检测。初次检测呈反应性的标本进行复试，仍呈反应性的判定为不合格，无反应性的判定为合格。

1.5核酸检测罗氏采用6混样的检测系统，pool呈反应性的进行分拆检测，无反应性的判定为合格，呈反应性的判定为不合格；诺华的单检系统，初次呈反应性的标本无论再捡的结果如何均判定为不合格，如果再检呈反应性则进行鉴别试验。

2结果

2.1总体结果共检测标本60418份，31318份标本采用诺华的单检系统进行平行检测，29100份标本进行罗氏的6混样系统进行平行检测。罗氏检测的29100份标本，共检测了273架，分拆了56个POOL，单检标本数为336个，分拆的次数占总检测架数的20.5%。诺华检测的31318份标本，分别在318个工作列表进行检测，呈反应性标本共122个，其中在一个工作表中出现2个以上呈反应性标本的次数为13次，每个工作表出现呈反应性标本的概率为34.3%。（表-1）

表-160418份标本总体检测结果

*包括了13次2个以上呈反应性标本的工作表

2.2罗氏检测结果罗氏检测的273架标本中，共分拆了56个呈反应性的pool。其中血清学无反应性而核酸呈反应性的pool有11个，占4.0%，占总分拆数的19.6%；血清学和核酸均为呈反应性的pool有45个，占16.5%，占总分拆数的80.4%；血清学呈反应性而核酸无反应性的14个，这部分标本不需要分拆。（表-2）

表-2罗氏检测结果

*这部分标本无需分拆

2.3诺华检测结果诺华检测了318个工作表，呈反应性的标本共122个。其中血清学无反应性而核酸呈反应性的65个，占总工作表的20.4%，占呈反应性的标本总数的53.3%；血清学和核酸均呈反应性的57个，占总工作表的17.9%，占呈反应性的标本总数的46.7%；血清学呈反应性而核酸无反应性的25个，这部分标本不需要再捡和鉴别。（表-3）

表-3诺华检测结果

*这部分标本不需要再捡和鉴别；**除去13个出现两个以上呈反应性标本的工作表数，占总工作表的百分比为34.3%。

3讨论

通过以上的数据我们可以看出，对于混样检测的罗氏系统而言如果平行检测则进行分拆的概率要增加16.5%，而按我中心的检测标本数来计算，一年中使用罗氏系统共进行了170天的检测，平均每天1.6架，而检测的总体分拆率为20.4%，也就意味着每三天就要有一次分拆，每5架标本就要进行一次分拆，如果按每架108份标本计算，检测成本将增加19.9%，如果去掉血清学无反应性再进行核酸检测而需要分拆的4.0%（占总分拆数的19.6%），则成本增加16%（19.9%-19.9%*19.6%）。

对于单检的诺华系统而言，我们需要考虑每年因血清学不合格而报废的血液占总体的百分比，我中心约为1.6～1.8%（2010年1月～2012年6月），如果我们采用平行检测的策略，在此方面就将增加成本约2%，我中心对于诺华系统如果出现反应性仍需在进行一遍复检，因此成本将会增加4%左右。

从以上分析可以发现混样系统在进行平行检测时将大幅的增加成本，而单检系统成本增加较少。如果我们考虑到检测的时效性问题，要求我们报告检测结果的时间较短，那么平行检测将会使检测时间缩短一天。另外平行检测将会使我们积累一些数据，以发现实验室的一些问题，在进行献血者回召方面有着重要的作用。但平行检测由于检测结果的阳性率较高，可能会对实验室产生污染[4-5]，因此就需要更加严格的控制我们的实验室环境。

无论我们选择哪种检测策略不仅要考虑成本，还要考虑我们的实验室的安全，积累数据以不断提高我们的检测水平，以及检测试剂的特异性和灵敏度问题等[6-10]。因此我们就需要衡量各种因素已找到更适合自己的实验室检测策略。

参考文献

[1]MargaritisAR，BrownSM，SeedCR，etal.ComparisonoftwoautomatednucleicacidtestingsystemsforsimultaneousdetectionofhumanimmunodeficiencyvirusandhepatitisCvirusRNAandhepatitisBvirusDNA.Transfusion.2007，47(10):1783-1793.

[2]SgourouM.KarakantzaE.TheodoriC.Procleixultriotranscriptionmediatedamplificationvs.serologicalbloodscreeninginsouthwesternGreece.TransfusionMedicine，2008，18(2):104-111.

[3]任芙蓉.核酸检测技术在国内外血液筛查中的应用.北京医学，2008，30(8):5612-5614.

[4]粱志东.PCR实验室污染的排除实用医技杂志2006,13（7）：1141-1142.

[5]罗慧琴,王志刚,李玲,刘付芹.聚合酶链反应实验室污染原因分析及排除方法.华北国防医药，2010,22（2）：127-128.

［6］KolkDP，DockterJ，LinnenJ，etal.Significantclosureofthehumanimmunodeficiencyvirustype1andhepatitisCviruspreseroconversiondetectionwindowswithatranscription-mediated-amplification-drivenassay.JClinMicrobiol，2002，40(5):1761-1766.

[7]尚桂芳，庄乃保，李活,等.核酸检测在血站血液筛查中的初步应用及特点.中国输血杂志，2009，22(2):130-131.

[8]叶贤林，李活，许晓绚,等.核酸扩增技术在献血者血液HBVDNA、HCVRNA及HIV-1RNA筛查中的应用研究.中国输血杂志，2010，23(1):6-10.

[9]任芙蓉，王憬惺，赵海燕,等.我国5城市合格献血者血液HIV及HCV残余风险研究.中国输血杂志，2007，20(6):469-475.

[10]师玲玲，刘赴平，王德文,等.核酸检测技术在献血者血液筛查中的初步应用.中国输血杂志，2010，23(1):11-13.