半枝莲多糖季胺碱抑制食管癌细胞增殖试验研究

郭宏昌

【摘要】目的：探讨半枝莲多糖季胺碱对食管癌EC9706细胞的抑制作用及可能机制。方法：通过MTT法检测SBPS(3个浓度100、200、300txg,／m1)对食管癌细胞的增殖的作用。结论：SBPS对食管癌细胞的增殖有抑制作用。

【关键词】半枝莲多糖季胺碱；EC9706；协同抗肿瘤作用

【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2016）11-0063-02【Keywords】Achyranthesbidentatapolysaccharidesquaternaryaminealkali;EC9706;Anti—tumorcooperationaction

河南是食道癌高发区，食管癌死亡率仅次于胃癌，居恶性肿瘤死亡率的第二位，尽管早期食管癌可以通过手术缓解，但大多数患者发现时已是晚期，化疗药物的使用对正常细胞有毒是亟待解决的问题，中药有很大的探讨价值。

1.目的

研究半枝莲多糖SBPS的体外抗肿瘤作用。半枝莲是唇形科植物半枝莲(ScuteuariabarbataD．Don)的干燥全草，又名狭叶韩信草、并头草。半枝莲多糖SPBS平均分子量为10000kD，糖基的组成为鼠半枝莲在临床治疗癌症中的应用十分广泛，多与白花蛇舌草、半边莲等组成复方配伍用于多种肿瘤的治疗。

2.材料与方法

2.1主要试剂和仪器

食管癌细胞株EC9706由新乡医学院病理教研室提供；

SBPS粉末由新乡医学院机能实验室提供[1-3]；

醚化剂3-氯-2羟丙基三甲胺氯化物，购自武汉试剂公司。

2.2半枝莲多糖季胺碱制备：称取SBPS粉末100g，醚化剂4.7g，水133.4g氢氧化钠2.0g。然后将它们混合放到一个500ml的圆底烧瓶，置于50℃的水浴中，开动搅拌器进行搅拌，反应混合物在该温度下保持反应若干个小时。反应结束时把圆底烧瓶的溶液倒入一个500ml烧杯加入20ml去离子水以减少粘度这时用pHS-3C精密pH计测量反应结束时的pH值用1mol/LHCl中和至pH6.5左右，过滤干燥，即可得样品。分析测量含氮量，取代度及反应效率。

2.3细胞培养

EC9706细胞用含10％胎牛血清、100mg／ml链霉素、100mg／ml青霉素的RPMI1640培养液培养，放在37℃，5％CO培养箱中培养至对数生长期。

2.4细胞生长抑制试验MTT

MTT比色法测定细胞增殖抑制率。收集对数生长期细胞接种于96孔板中，调整细胞密度为1×105个?ml-1，每孔100μl。每个剂量设12个平行孔，分别培养12，24和48h，加入5g?L-1四甲基唑氮蓝20μl，继续培养，4h后，弃培养液，加入DMS0150μl，完全显色后，采用酶标仪测定各孔490nm(OD)值。按下列公式计算细胞生长抑制率(1nhibitionmte，lR)。IR=(对照组OD一实验组OD)／(对照组OD一空白组OD)×100％。

2.5统计学处理

应用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。采用单因素方差分析比较各单独处理因素效应。

3.结果

3.1不同浓度SBPS对EC9706细胞增殖的影响见表l，MTT比色法显示，对照组细胞呈现正常的生长周期，不同浓度的ABPS随着浓度增加与对照组相比较有明显差异。

表l不同浓度对EC9706细胞增殖的影响（x-±s，n=6）

组别抑制率

对照组7.00±3.14

低剂量组（100μg/ml）20.00±0.23

中剂量组（200μg/ml）26.79±0.64

高剂量组（300μg/ml）35.14±0.75

F31.5

P<0.01

3.结论

半枝莲多糖季胺碱对食管癌细胞的增殖有显著抑制作用。

4.讨论

半枝莲抗肿瘤作用已基本得到肯定，对消化、呼吸、生殖等系统的恶性肿瘤具有较好的抑制作用[4-8]，甚至对某些白血病也有一定的治疗效果。目前我国学者正在对半枝莲多糖抗肿瘤的机制进行深入研究，致力于将它向临床推广。

癌细胞带负电荷，半枝莲多糖季胺碱带正电，半枝莲多糖季胺碱化提高它与癌细胞结合力。半枝莲多糖季胺碱衍生物的实验，为探讨增加它对癌细胞的杀伤力提供了一条可行的路径[9-10]。

【参考文献】

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