DC-CIK细胞免疫治疗对AFP阳性原发性肝癌患者肝脏功能及血清AFP水平的影响

朱征1徐文2陆芸芸3

（2成都体育学院附属体育医院检验科四川成都610041）

（3成都市公共卫生临床医疗中心检验科四川成都610061）

【摘要】目的：评价树突状细胞（Dendriticcells，DC）-细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokineinducedkiller，CIK）即DC-CIK细胞免疫治疗对AFP阳性原发性肝癌（PHC）患者肝脏功能及血清AFP水平的影响，为临床医生掌握AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗后肝脏功能及血清AFP水平的变化提供参考。方法：（1）选取50例健康体检者和48例AFP阳性PHC患者进行研究。（2）采集健康体检者外周血3ml用于肝脏功能及血清AFP水平的测定。（3）AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗前，采集外周血3ml用于肝脏功能及血清AFP水平的测定；采集外周血80ml用于DC-CIK细胞的诱导培养。（4）AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗后，分别在第1、3、5、7、9天采集外周血3ml用于肝脏功能及血清AFP水平的测定。结果：（1）AFP阳性PHC组在DC-CIK细胞免疫治疗前血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、甲胎蛋白（AFP）水平明显高于正常对照组，血清前白蛋白（PA）、白蛋白（ALB）水平明显低于正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；（2）AFP阳性PHC组在DC-CIK细胞免疫治疗后血清PA最先升高，其次血清ALB升高，与治疗前比较，血清PA、ALB水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论：（1）DC-CIK细胞免疫治疗影响AFP阳性PHC患者肝脏功能及血清AFP水平的测定；（2）DC-CIK细胞免疫治疗后AFP阳性PHC患者肝脏功能得到明显改善，血清AFP水平降低。

【关键词】DC-CIK细胞免疫治疗；原发性肝癌；肝脏功能；甲胎蛋白

【中图分类号】R735.7【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）33-0210-02

DC细胞是体内功能最强的抗原呈递细胞，在主动免疫和过继性免疫中起着桥梁的作用，是机体免疫反应的始动者[1]。CIK是单个核细胞在体外经不同细胞因子刺激产生的一群异质细胞，高表达CD3+和CD56+，具有NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点，还兼有T细胞强大的抗瘤活性[2]。DC和CIK是肿瘤免疫治疗的两部分，DC识别病原，激活获得性免疫系统，而CIK通过发挥自身细胞毒性与分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞[3]。DC细胞与CIK细胞共培养可以获得兼有两者特性的效应细胞即为DC-CIK细胞，DC-CIK细胞两者相互促进，优势互补，共同发挥协同抗肿瘤作用。本研究通过测定DC-CIK细胞免疫治疗前后AFP阳性PHC患者肝脏功能及血清AFP的变化，探讨DC-CIK细胞免疫治疗对AFP阳性PHC患者肝脏功能及血清AFP水平的影响，为AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治后的疗效观察和预后判断提供参考。

1.材料与方法

1.1标本来源

50例正常对照组来自我院健康体检者，其中男25例，女25例，年龄35～66岁，平均43岁，无既往病史，各理化检查指标均正常，各组织器官无相关疾病。收集我院2014年1月—2015年12月收治的AFP阳性PHC患者48例，其中男25例，女23例，年龄37～69岁，平均45岁；所有患者均经实验室检查、B型超声、CT、MRI、肝穿刺活体组织检查及手术后病理检查等确诊，均符合2011年中华人民共和国卫生部制定的《原发性肝癌诊疗规范》标准[4]。所有AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗期间均未接受其他治疗且病情稳定。

1.2仪器与试剂

（1）OLYMPUS倒置显微镜、苏净超净工作台BCM-1300、力康HealForceHF160W二氧化碳培养箱、湘仪L535-1型离心机、OLYMPUSAU640全自动生化分析仪、罗氏Cobase601全自动化学发光免疫分析仪。（2）采用酶速率法测定血清ALT、AST水平，使用溴甲酚绿法测定血清ALB水平，试剂由北京利德曼生化股份有限公司提供；使用免疫透射比浊法测定血清PA水平，试剂由四川迈克生物科技有限公司提供；使用化学发光法检测血清AFP水平，使用原装配套试剂。

1.3DC-CIK细胞的培养与回输

取AFP阳性PHC患者经造血动员后的抗凝外周血80ml，使用Ficoll淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，将细胞按2×106/ml数量悬浮于含5%自体血清的X-VIVO培养基中经37℃，5%CO2培养箱中孵育2h后，分离贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞加入GM-CSF、IL-4诱导DC细胞，悬浮细胞加IL-2、IFN-γ、CD3McAb诱导CIK细胞。第7天左右将DC细胞与CIK细胞按照1:10比例混合培养5天左右产生DC-CIK细胞。取少量DC-CIK细胞做质量检测，合格后将DC-CIK细胞混悬于100ml生理盐水中，用输血器回输给患者，一个疗程回输5天，每天输1次，每个疗程回输细胞总数约为(5～6)×109个。

1.4实验方法

AFP阳性PHC患者分别在进行DC-CIK细胞免疫治疗前、开始治疗后的第1、3、5、7、9天采集静脉血3ml用于肝脏功能及血清AFP水平的测定。所有实验对象均清晨空腹8h以上，使用含促凝剂（红色头）的真空采血管抽取静脉血，所有标本无溶血，无黄疸，无脂血，各项测定指标的参考范围为：ALT:9～50U/L、AST:15～40U/L、PA:160～450mg/L、ALB:40～55g/L、AFP:0～7ng/ml。

1.5统计学处理

计量资料采用均数±标准差(x-±s)表示，采用SPSS10.0软件包进行统计学分析，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1各组间肝脏功能及血清AFP水平测定结果比较(x-±s)见表

由表可见：（1）AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗前，血清ALT、AST、AFP水平明显高于正常对照组，血清PA、ALB水平明显低于正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.01）。（2）AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗后，血清ALT、AST、AFP、PA、ALB水平与治疗前比较发生了显著变化，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

2.2AFP阳性PHC患者在进行DC-CIK细胞免疫治疗后各测定指标的变化，见图1、2。

图2图3

由图1可见：（1）AFP阳性PHC组在DC-CIK细胞免疫治

疗后第1天血清ALT、AST开始升高，第3天达到高峰，第5、7天逐步降低，第9天低于DC-CIK细胞免疫治疗前，与治疗前比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。（2）AFP阳性PHC组在DC-CIK细胞免疫治疗后第1、3天血清AFP逐步升高，第5天达到高峰，第7、9天逐步降低，第9天低于DC-CIK细胞免疫治疗前，与治疗前比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

由图2可见：AFP阳性PHC组在DC-CIK细胞免疫治疗后血清PA在第1、3、5天逐步升高，第5、7、9天变化不大，与治疗前比较，血清PA水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.01）；血清ALB在第1天变化不大，第3、5、7天逐步升高，第7、9天变化不大，与治疗前比较，血清ALB水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

3.讨论

PHC是指患者非由其他器官组织转移产生、原本就在肝细胞或肝内胆管细胞发生的癌肿瘤，是我国常见恶性肿瘤之一[5]。血清AFP是PHC最敏感、特异的标志物，AFP除可用于PHC的诊断外，还可用于疗效评价和预后判断，但大约有20%～30%的PHC患者AFP不升高。血清ALT、AST是国内外公认的反映肝细胞损害最常用的生化指标[7]，血清PA、ALB是反映肝脏合成功能的标志物[8]，它们都能反映AFP阳性PHC患者肝脏功能的变化，为临床对肝胆疾病的诊断、疗效观察和预后判断等提供有价值的信息。

DC-CIK细胞免疫治疗对AFP阳性PHC患者肝脏功能及血清AFP水平的影响与DC-CIK细胞杀伤、破坏肿瘤细胞的作用有关。在DC-CIK细胞免疫治疗前期，由于破碎的肿瘤细胞释放大量ALT、AST、AFP进入血液导致血清ALT、AST、AFP水平较治疗前升高；而在DC-CIK细胞免疫治疗后期，由于肿瘤细胞的减少，受损肝脏功能的逐步恢复，血清ALT、AST、AFP水平逐步下降，最后低于治疗前水平。由于PA半衰期比ALB短，血清PA的变化较ALB变化更为敏感，在DC-CIK细胞免疫治疗开始后，AFP阳性PHC患者肝脏合成功能开始逐步恢复时，血清PA水平首先升高，而后血清ALB水平也升高，最后两者均高于治疗前水平。DC-CIK细胞免疫治疗能够改善AFP阳性PHC患者的肝脏功能，增强肝脏的合成代谢能力，降低血清AFP水平；我们在对AFP阳性PHC患者进行DC-CIK细胞免疫治疗后的疗效观察和预后判断时，除了考虑患者的病情变化，还要考虑DC-CIK细胞免疫治疗对患者肝脏功能及血清AFP水平的影响。

【参考文献】

[1]郭玲(综述)，何静，陈东风(审校).细胞免疫治疗原发性肝癌的现状及展望[J].实用肝脏病杂志，2015，18（6）：687-690.

[2]张义，谢海龙，李龙，等.DC-CIK抗消化道肿瘤的研究进展[J].长江大学学报：自科版医学下旬刊，2014，11（4）：121-124.

[3]何立香(综述)，蒋思卿，彭大为(审校).DC-CIK治疗恶性肿瘤的研究进展[J].医学综述，2013，19（1）：59-62.

[4]中华人民共和国卫生部.原发性肝癌诊疗规范(2011年版)[J].临床肝胆病杂志，2011，27（11）：1141-1159.

[5]李志坤，秦秀举，马凤娥.乙型肝炎肝硬化并发原发性肝癌相关因素研究[J].山西医药杂志，2015，44（9）：1054-1056.