HE4在卵巢上皮性癌中表达的意义

郭冰沁

[作者简介]郭冰沁（1972年－），男，讲师，硕士。]，俞岚1

(1.蚌埠医学院第一附属医院病理科，蚌埠医学院病理学教研室，安徽省感染与免疫重点实验室，蚌埠233030)

[摘要]目的：探讨HE4的表达与上皮性卵巢癌临床病理生物学行为的关系以及对患者预后的影响。方法：应用免疫组化对80例EOC、10例交界性上皮性肿瘤及10例良性上皮性肿瘤组织进行HE4和MMP-9的检测。结果：HE4表达阳性率在卵巢癌组均高于交界性及良性肿瘤组（P<0.05）。其表达与EOC的组织学分级、腹腔脏器及淋巴结转移以及PTNM临床分期有关（P＜0.05）。结论：HE4表达促进EOC的浸润和转移，检测HE4的表达可能作为预测和评价患者预后的生物学指标。

[关键词]卵巢上皮性癌；人附睾蛋白4；免疫组织化学；

卵巢癌是全球妇科恶性肿瘤中病死率最高的一种。临床上由于缺乏有效的筛选方法，70%的患者就诊时已属晚期，5年生存率仅30%左右，并且常出现复发和转移。因此，寻找特异性的肿瘤标志物一直是卵巢癌研究的热点问题。本研究通过对80例卵巢上皮性癌、10例卵巢交界性上皮性肿瘤以及10例良性上皮性肿瘤组织HE4表达水平进检测，以探讨其表达与卵巢癌侵袭、转移以及预后的关系。

1资料与方法

1.1一般资料选择蚌埠医学院第一附属医院病理科2000年1月-2002年12月存档蜡块EOC组织标本80例（术前未行放、化疗），所有病例均有完整的临床、病理及随访资料，入选病例随访至患者死亡或截止2010年11月，随访时间为7-96个月。根据UICC2002版PTNM病理分期标准进行分期，早期(FIGOⅠ、Ⅱ期)卵巢癌43例，晚期(FIGOⅢ、Ⅳ期)卵巢癌37例；浆液性癌63例，黏液性癌10例，子宫内膜样癌7例；有腹腔脏器及淋巴结转移者38例，有腹水者21例。年龄19-76岁，中位年龄52.0岁，≥60岁33例，<60岁47例；肿瘤长径D≥6.0cm48例，D<6.0cm32例。选择卵巢交界性上皮性肿瘤10例以及良性上皮性肿瘤10例作为对照组。复阅上述患者的病理切片，选取存档标本石蜡块进行切片，厚度4μm。

1.2免疫组织化学染色鼠抗人HE4多克隆抗体，二步法免疫组化检测试剂盒以及DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。将石蜡标本连续切片，烤干，于二甲苯溶液及不同浓度的乙醇中脱蜡至水洗。免疫组化染色操作步骤按试剂盒说明书进行。采用已知阳性片作对照，以PBS液代替一抗作空白对照。

1.3结果判定HE4免疫组化阳性染色为肿瘤细胞胞浆内出现棕黄色颗粒或团块。采取二次计分法：每例标本随机计数5个高倍视野(×400)，计数每个高倍视野中阳性细胞所占百分比并计分。首先将染色强度计分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。再将阳性细胞百分比计分，0分为阴性，1分为阳性细胞为<10%，2分为11%~50%，3分为51%~75%，4分为>75%。用染色强度得分和细胞数得分的乘积作为判断表达结果，若积分≤2为阴性，>2为阳性。免疫组化结果由高年资病理医师读片评定。

1.4统计学分析采用SPSS17.0统计软件进行数据分析。HE4表达阳性组与阴性组生存分析用Kaplan-Meier法，组间比较用log-rank检验，多因素分析采用Cox回归多因素模型，HE4在EOC组织中表达与卵巢交界性及良性上皮性肿瘤组织、在EOC中与各临床病理因素的相关性采用Fisherexact法检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1卵巢EOC、交界性及良性上皮性肿瘤组织中HE4表达EOC中HE4表达阳性率分别为68.8%(55/80)，卵巢交界性及良性上皮性肿瘤阳性率分别为50.0%(5/10)及10.0%(1/10)，三个组间HE4表达阳性率差异分别具有显著性（P<0.05）。

2.2HE4在EOC中的表达与临床病理指标的关系EOC中，HE4表达与患者的年龄、肿瘤的组织学类型以及肿瘤大小差异均无统计学意义(P>0.05)；HE4表达在临床分期Ⅲ-Ⅳ期均高于Ⅰ-Ⅱ期（<0.05），高、中和低分化组HE4蛋白阳性表达率分别为35.3%、70.0%和84.8%，其阳性表达率均随着肿瘤恶性级别的增高而显著增加（P<0.05），有腹腔器官及淋巴结转移者均高于无转移者（P<0.05）。

3讨论

人附睾蛋白4(humanepididymisprotein4,HE4)是WFDC2基因的产物。1991年由Kirchhoff等[1]首先从人的附睾远端上皮细胞中克隆到HE4基因的cDNA，并进行了报道。HE4基因位于染色20q12~13.1上，由两个“乳清酸性蛋白(wheyacidicproteins,WAP)域”和一个“4-二硫化中心”组成，属于WAP基因家族成员，其家族成员还包括SLPI和Elafin。1999年Schummer等[2]通过cDNA微阵列、反转录聚合酶链反应和Northerm印迹杂交等方法分析了不同来源的卵巢癌及癌旁组织中的HE4基因表达水平，发现其mRNA在卵巢癌组织中有较高表达，但在癌旁组织中却未见表达。最近研究发现[3]，HE4在肺癌、胰腺癌、移行细胞癌、胃肠癌、乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤组织中高表达,并且发现在卵巢癌中表达增高的最明显。2005年Drapkin等[4]用免疫组织化学方法进一步描述了HE4在不同组织类型卵巢癌的表达，发现HE4在50%卵巢透明细胞癌、93%的卵巢浆液性癌及100%卵巢子宫内膜样癌表达，而在卵巢黏液性癌及正常卵巢组织中不表达。提示该基因可能是一个卵巢癌相关基因，其启动子有可能应用于卵巢癌的靶向性基因治疗。卢仁泉等[5]应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)法检测116例EOC患者与对照者血清的HE4浓度水平，卵巢癌患者血清HE4水平随着肿瘤分级、分期的升高而升高，淋巴结转移患者HE4水平显著高于未转移者(U值为665.5,P均<0.01)。研究结果表明，HE4可作为卵巢癌诊断的独立生物学指标。目前，国内关于HE4蛋白在卵巢癌组织中表达的研究还较少，相关研究大多还集中于血清学方面。

本实验通过免疫组化检测了卵巢良性、交界性以及恶性上皮性肿瘤中HE4的表达，结果表明HE4的表达阳性率在卵巢癌组织均高于交界性及良性肿瘤组织，差异均有显著性(P<0.05)。进一步的分析发现，HE4阳性表达率均随着EOC的病理分级增高而显著增加（P<0.05），临床分期愈晚表达愈高（P<0.05），有腹腔器官及淋巴结转移者明显高于无转移者（P<0.05）。这些结果与上述国内外文献报道基本一致。

本实验初步探讨了EOC组织中HE4的表达与其侵袭、转移以及预后的关系。实验结果提示，检测HE4的表达对早期筛选卵巢癌高危病例、判断其恶性程度及评估预后有重要意义。同时，HE4基因有望成为控制卵巢癌细胞生长、侵袭以及治疗肿瘤的新靶点。

[参考文献]

[1KirchhoffC,HabbenI,IvellR,etal.Amajorhumanepididymis-specificcDNAencodesaproteinwithsequencehomologytoextracellularproteinaseinhibitors[J].BiolReprod,1991,45:350-357.

[2]SchummerM,NgWV,BumgarnerRE,etal.Comparativehybridizationofanarrayof21,500ovariancDNAsforthediscoveryofgenesoverexpressedinovariancarcinomas.[J].Gene,1999,238(2):375-385.

[3]GalganoMT,HamptonGM,FriersonHFJr.ComprehensiveanalysisofHE4expressioninnormalandmalignanthumantissues[J].ModPathol,2006,19(6):847-853.

[4]DrapkinR,LinY,MokSC,etal.Humanepididymisprotein4(HE4)isasecretedglycolproteinthatisoverexpressedbyserousandendometrioidovariancarcinomas[J].CancerRes,2005,65(6):2162-2169.

[5卢仁泉,郭林,沈烨红.HE4在卵巢癌诊治中的临床应用评价[J].中国癌症杂志.2010(9):680-685.