Ack１和SLP－２在胃癌组织中的表达和意义

芦永福郜茜王昀

青海大学附属医院消化内科青海西宁８１０００１基金项目:青海省(应用)基础研究计划项目２０１２－Z－７２７

【中图分类号】R３６５【文献标识码】B【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０７０９－０２

胃癌的发生是一个多因素、多步骤、多阶段的过程,其发病机制尚有许多未明之处.新近研究显示,Ack１的表达、激活与肿瘤的发生侵袭转移等过程相关[１].SLP－２是一种外周膜蛋白,张立勇[２]等发现SLP－２在食管癌等多种癌组织中高表达,可能是一个新的致癌基因.本组病例旨在探讨SLP－２、Ack１在胃癌中的表达及意义.１材料与方法

１．１一般资料选取青海大学附属医院２０１０~２０１５年间经胃镜并手术和病理确诊的胃癌患者９０例,其中男性５５例,女性３５例,平均年龄５０．１４±３．２７岁,收集同期非肿瘤手术标本３０例为正常对照组.入选病例临床资料完整,术前均未接受化疗、放疗和生物治疗.１．２试剂SLP－２、Ack１多克隆兔抗人抗体均购自Sigma公司;mRNA提取试剂Trizol购自Ambion公司;RT２cDNAsysnthesiskit、RT２SYBRqPCRmix和引物的合成由Qiagen提供.免疫组化试剂盒、DAB显色液和PBS购自武汉三鹰和博士德公司.１．３试验方法

１．３．１real－timePCR严格按说明书操作,Ack１、SLP－２和１８s的引物为美国Qiagen公司预制定量PCR专用引物.ABI５７００型实时荧光定量PCR仪监测记录数据.△Ct值＝目的基因Ct值﹣内参基因Ct值,△△Ct＝△Ct癌组织﹣△Ct癌旁组织.１．３．２免疫组织化学染色采用即用型二步法免疫组化染色,按说明书进行染色,以PBS代替一抗作为阴性对照.１．３．３染色结果判定判定标准SLP－２阳性反应为细胞膜、细胞质呈黄色.根据染色强度和阳性细胞数分为四个等级:无色０分、淡黄色１分、棕黄色２分、棕褐色３分.阳性染色的范围定义为:阳性细胞＜１％为０分、１％~２４％为１分、２５％~４９％为２分、５０％~７４％为３分、７５％~１００％为４分.将上述两个独立的评分得分相乘得到该病例的染色系数,在本研究中经统计学界定,将SLP－２的染色系数≥８定义为阳性(高表达),０－７定义为阴性表达.Ack１蛋白阳性反应为细胞质中呈棕黄色着色,无着色为阴性.阳性细胞数≤２５％为１分,２６％~７５％为２分,﹥７６％为３分,将胞质表达(０~１分)定义为阴性,(２~３分)定义为阳性.

１．４统计方法采用SPSS１６．０统计软件分析.计量资料数据以X±s表示,mRNA在胃癌和癌旁组织中相对表达采用非参数检验;三组间比较采用F检验,两组间比较采用t检验.

２结果２．１SLP－２、Ack１mRNA在胃癌和癌旁组织中的表达Ack１、SLP－２mRNA在胃癌组织中的表达高于癌旁,具有统计学差异(t值２．２１,P＜０．０１),二者在正常组织中无表达;相关性分析显示二者在胃癌中的高表达具有明显正相关性(r＝０．４８４,p＜０．０１).２．２Ack１、SLP－２蛋白在胃癌中的表达明显高于癌旁组织(P＜０．０５),两者在正常组织中无表达,其中Ack１蛋白阳性表达颗粒位于肿瘤细胞的胞质中,SLP－２蛋白阳性表达颗粒位于胞质和胞膜中,见图.２．３Ack１、SLP－２蛋白的高表达与肿瘤临床病理因素间的关系Ack１在胃癌中的高表达与肿瘤分化程度和临床分期相关(P＜０．０５),SLP－２的高表达与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移和局部浸润相关(P＜０．０５);二者均与性别、年龄、肿瘤发生部位及是否有肝转移无关.

表２SLP－２和Ack１蛋白在胃癌中高表达与胃癌临床病理因素之间的关系(X±s)

图(×４００)Ack１表达:１胃癌组织中高表达,２癌旁组织中高表达;SLP－２表达:３胃癌组织中高表达,４癌旁组织中高表达３讨论Ack１是促进酪氨酸激酶生长的基因家族中的成员,具有催化底物蛋白酪氨酸残基磷酸化、激活底物酶活性的功能[３].研究显示,Ack１与细胞增殖、黏附、细胞骨架重组及细胞吞饮等生物学行为相关,同时具有癌基因的作用,参与肿瘤的发生、侵袭、转移等过程[４、５].在鳞癌和乳腺癌中均高表达,与肿瘤的淋巴转移关系密切,高表达的患者预后差,与肿瘤转移能力相关[６].同时Ackl在晚期肿瘤中的表达高于早期肿瘤,提示Ackl在恶性肿瘤的侵袭转移过程中起了很大作用[７].本组试验结果显示,Ack１的高表达与肿瘤临床分期和分化程度相关,中晚期肿瘤和恶性程度高者Ack１的表达量相对升高.SLP－２是stomatin家族的新成员,其基因定位于９p１３,１,具有家族共有的一致序列,但不具有N端跨膜区域,SLP－２具有N－十四(烷)酰化位点,提示它具有其他家族成员类似的膜关联功能.SLP－２的亚细胞定位可能是细胞质和细胞膜[８],作为内膜蛋白,可能参与线粒体的某些功能,与人类恶性肿瘤有关.新近研究发现在食管癌[２]、喉癌及乳腺癌[１２]等中表达上调,并可能与肿瘤的过度生长和增值、肿瘤的分化以及转移有关.

本组结果显示,SLP－２在胃腺癌中高表达,与进展期胃癌的淋巴转移、临床分期密切相关,与文献报道一致[２、９],同时发现SLP－２的高表达与肿瘤大小、局部浸润关系密切,进一步提示SLP－２在肿瘤发展和转移过程中起着重要作用.本组研究发现在进展期胃癌中SLP－２和Ack１mRNA表达水平呈明显正相关,提示在胃癌的发生、发展过程中二者的高表达可能存在着一定的正反馈机制,使得肿瘤恶性程度增高,加速了肿瘤的侵袭和转移,导致预后差,这有待于深入研究.检测Ack１、SLP－２有助于判断胃癌发展、转移和预后,为制定个体化治疗提供了一定实验依据.

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