连花清瘟胶囊中不同制备方法测定木犀草苷含量的比较

田小权马跃新

【摘要】目的：连花清瘟胶囊中木犀草苷含量测定时样品的最佳制备方法。方法：采用高效液相色谱法测木犀草苷含量。分析比较50%甲醇超声法、60%乙醇超声法、70%乙醇超声法、纯水加热回流法4种样品制备方法的优缺点。结果：回归方程为Y=11.9582X-50.6804，r=0.9991。在20.1400～402.8000μg/ml浓度范围内线性关系良好。经过对4种制备方法木犀草苷含量测定结果的比较，得出出60%乙醇超声法的制备方法优于其它方法。结论：本方法操作简便易行，可作为测定连花清瘟胶囊中木犀草苷含量供试品溶液的制备方法。

【关键词】连花清瘟胶囊；木犀草苷含量；制备方法

【中图分类号】R28【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）21-0318-02

连花清瘟胶囊由金银花、连翘、苦杏仁、炙麻黄、甘草等13味药组成。清瘟解毒，宣肺泄热。2015版药典目前只收载了连翘苷的含量测定。现今，对连花清瘟胶囊中连翘苷、绿原酸、盐酸麻黄碱含量的测定方法已有报道，但连花清瘟胶囊中木犀草苷含量测定未得到相应的重视。处方中金银花的成分木犀草苷，具有很强的抗呼吸道合胞体病毒活性，也是其抗菌抗病毒有效成分之一，被广泛应用于医药、食品和日用品工业中。本实验采用HPLC法测定连花清瘟胶囊中木犀草苷的含量的方法，通过比较不同制备方法得到的木犀草苷含量的多少，供试品通过四种方法的制备，比较出最佳的制备方法，为进一步完善制剂的质量控制和评价方法提供参考。

1.仪器与试药试剂

1.1仪器

AgilentTechnologies1260Infinity型高效液相色谱仪；AL104电子天平（瑞士METTLERTOLEDO公司）；MS205DΜ电子天平（十万分之一）；AllegraX-30RCentrifμge大容量冷冻离心机（BECKMANCOΜLTER）；超纯水机；KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药试剂

木犀草苷对照品（含量为94.9%，中国食品药品检验研究院，批号：111720-201609）；连花清瘟胶囊（监督抽样检品，批号：A1509003，A1601675,规格：每粒装0.35g）；水为纯化水，乙腈、冰醋酸、甲醇、乙醇为分析纯。

2.试验方法

2.1色谱条件

色谱条件用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（AgilentZORBAXSB-pheny14.6mm×250mm,5μm）,以乙腈为流动相A,以0.5%冰醋酸溶液为流动相B，按表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为350nm，进样量：10μl。

2.2对照品溶液的制备

精密称取木犀草苷对照品约10mg，置25ml量瓶中，50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。

2.3供试品溶液的制备

方法一：取连花清瘟胶囊内容物研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，称重，超声处理（功率200W，频率40KHz）30min，取出，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

方法二：取连花清瘟胶囊内容物研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml密塞，称重，超声处理（功率200W，频率40KHz）30min，取出，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

方法三：取连花清瘟胶囊内容物研细，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇30ml，称重，超声处理（功率200W，频率40KHz）1h，放冷，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过。精密量取续滤液10ml，回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

方法四：取连花清瘟胶囊内容物研细，取约0.5g置于100ml圆底烧瓶中，精密加水50ml，称重，加热回流1h，放冷后再称重，并用水补足重量差，滤去，弃去初滤液，取续滤液用。

2.4阴性供试品实验

向生产厂家索要不含金银花的阴性样品，按供试品溶液的方法进行处理，得阴性供试品溶液。分别吸取阴性供试品溶液按照2.1的测定条件进行检测。结果空白溶液在与木犀草苷对照品相同保留时间内未出现明显色谱峰，说明其他药材对木犀草苷的测定无干扰。

2.5线性关系试验

精密称取木犀草苷对照品0.01007g，置25ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液。再分别精密量取0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述4种浓度的对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按“2.1”色谱条件分析，测定各自峰面积（RSD），以对照品浓度μg/ml为横坐标，峰面积值为纵坐标，求得回归方程：木犀草苷：Y=11.9582X-50.6804，r=0.9991。结果表明，木犀草苷20.1400～402.8000μg/ml范围内线性关系良好。见附图

3.结果与分析

3.1木犀草苷含量测定结果分析

按“2.1”项下色谱条件，测定连花清瘟胶囊中木犀草苷的含量，结果方法一为296.0423μg/g，方法二为321.7193μg/g，方法三为240.1531μg/g，方法四为0μg/g。

四种方法比较，方法一与方法二差异显著，方法一与方法三差异极显著，方法二与方法三差异极显著，方法一、二、三与方法四差异极显著，方法二制备方法得到的木犀草苷含量最高，方法四不能从连花清瘟胶囊里面得到木犀草苷。

对照品、供试品和阴性供试品色谱图见图。

对照品供试品阴性供试品

3.2制备方法分析比较

方法一的制备方法尽管能测出连花清瘟胶囊里木犀草苷的含量，操作简单，耗时短，但方法一的溶剂50%甲醇对人体健康影响有一定的争议，这对实验操作者有一定的危害。甲醇在体内代谢较慢，故有一定蓄积作用。报道长期在200～500mg/m3下操作，可出现神经衰弱症候群和植物神经功能失调，也可有粘膜刺激和视力减退。同时，甲醇价格的影响因素较多，价格波动较大，比较起乙醇稍稍走高，故方法一不作为首选制备方法。方法二不仅操作简便易行，实验操作设备少，耗时短，溶剂相对安全危害小，价格相对稳定便宜，而且更重要的是用此法制备出的样品含木犀草苷量是四种方法中最高的。方法三尽管溶剂危害小，操作简单，但是相比较方法一、二，此法耗时是前两种的两倍，所测含量也比前两种方法低。方法四且不说操作加热回流麻烦，耗费时间长，重点是此法不能测出含量，违背了实验设计的意义，故方法四不做参考。

4.结果与讨论

药品含量检测的顺利进行需要理想的样品制备。制备样品质量直接关系所测物质含量的多少。连花清瘟胶囊处方复杂，由13味药材组成，所含化学成分复杂，为检测出木犀草苷，本文采用的检测条件参照药典金银花中木犀草苷的含量测定条件，均采用的是乙腈和冰醋酸溶液作为流动相。

采用4种制备方法得到的连花清瘟胶囊中木犀草苷含量是：方法二>方法一>方法三>方法四。超声法和醇溶液所制备的供试液中木犀草苷的含量明显高于纯化水加热回流提取，从溶剂角度看，可能是因为醇溶液极性与木犀草苷极性相近（相似相容原理）。方法四之所以没有测出含量，可能是因为连花清瘟胶囊中木犀草苷含量太少，毕竟金银花中的木犀草苷提取率也只能达到0.05%。外加木犀草苷在水溶液中也只是微溶。与50%甲醇和60%乙醇、70%乙醇比较，木犀草苷更易溶于60%乙醇溶液。表明60%乙醇的配比极性与木犀草苷极性更相近。采用60%乙醇超声制备连花清瘟胶囊木犀草苷含量测定的供试品溶液可行，操作简便易行。

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