沙门菌检验方法

曹丽萍1田纳2

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2009)21-0273-02

沙门菌属广泛分布于自然界，通常寄居于人或动物肠道内是肠杆菌科的重要致病菌属，可使人和动物致病。它由6个亚属组成，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅲ；已发现的沙门菌有2000多个菌型。沙门菌是一大群形态、培养特性、生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。

1材料和试剂

1.1设备和材料天平，均质器或乳钵，温箱（36℃±1℃，42℃），显微镜，灭菌广口瓶（500ml，250ml），灭菌吸管（10ml）灭菌平皿（90mm×15mm），灭菌小试管（内径3mm，长5cm），灭菌毛细管，橡皮乳头，载玻片，酒精灯，灭菌金属匙或玻璃棒，接种棒和镍铬丝，试架和试管篓。

1.2培养基和试剂（1）所用培养基和配制：缓冲蛋白胨水（BP）：氯化镁孔雀绿（MM）增菌液；四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋琼脂（BS）；胆盐硫乳（DHL）琼脂；HE琼脂；WS琼脂；SS琼脂三糖铁（TSI）琼脂；蛋白胨水、靛基质试剂；尿素琼脂（pH7.2）；氰化钾（KCN）培养基；氨基酸脱羧酶试验培养基；糖发酵管；“2.3.25；ONPG培养基；半固体琼脂；丙二酸盐培养基“2.3.20”。（2）沙门菌因子血清：按照26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型进行选用。

2检验步骤

2.1前增菌和增菌冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。称取检样25g加入盛有225ml缓冲蛋白胨水的500ml广口瓶内。固体食品可先以匀质器于8000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，在36℃±1℃培养4h（干蛋品培养18～24h），移取10ml转种于100ml氯化镁孔绿肉汤增菌液内，42℃下培养18～24h。同时另取10ml，转种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，36℃±1℃下培养18～24h。

2.2分离培养取增菌液1环，画线接种于一个亚硫酸饿琼脂平板和一个DHL琼脂平板（或HE、WS、SS）或40～48h（BS），观察各平板上生长的菌落，沙门菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门菌Ⅲ在各平板上的菌落特征。

2.3生化反应（1）从选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种TSI琼脂。在TSI琼脂内，肠杆菌科属种的反应结果。在TSI琼脂内只有斜面产酸又同时硫化氢阴性的菌株可以排除，其他的反应结果均有沙门菌的可能，但同时也均有不是沙门菌的可能。（2）在接种TSI琼脂抽时，再接种蛋白胨水（作靛基质试验用）、尿素琼脂（pH7.2）、KCN培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各1管，在36℃±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h，按判定结果。

3结果判定依据及报告方式

3.1结果判定依据主要依靠生化反应和血清学鉴定两个方面。准确的生化反应常可作出初步鉴定，必要时应配合形态及染色检查，以排除肠球菌和其他肠道菌。血清学鉴定主要依据沙门菌O血清决定群，再用H因子血清第1相和第2相试验结果综合判定其所属血清型。将生化与血清学试验结果综合分析判定可获准确结果。此外，亦可用噬菌体进行鉴定。

3.2报告方式（1）分离培养后，若未发现可疑菌，可报告“未发离出沙门菌”。（2）若生化反应符合沙门菌，用沙门菌属诊断血清作玻片凝集，结果阳性，可初步报告为“分离出××沙门菌”（3）进一步做多种生化反应和用因子血清作抗原式的分析后，可作出最终诊断性的报告为“培养出生地×型沙门菌”。（4）作噬菌体分型鉴定后，可报告为“检出噬菌体××型沙门菌”。