杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗

彭梦乐

【中图分类号】R730.51【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0142-02

【摘要】目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗的关系。方法选取2011年1月至2011年6月在我院肿瘤科住院治疗的78例肿瘤患者为研究对象。并选择我院常规体检中无血缘关系的随机健康个体78例为正常对照组。进行DNA提取及KIR基因型分析。结果在所研究的78例肿瘤个体和78例正常个体中共检出了目前已知的18个KIR基因。且肿瘤患者的KIR基因频率与正常个体相比较，有统计学意义。结论在癌症患者中，KIR的阻滞有可能成为切实可行的治疗选择以促进NK细胞介导的对肿瘤的细胞毒性反应。

【关键词】杀伤细胞免疫球蛋白样受体肿瘤免疫治疗

自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是先天免疫中一类十分重要的淋巴细胞，其通过细胞毒活性和产生淋巴因子，在机体抗感染、抗肿瘤、调节免疫等方面发挥重要的免疫功能。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killercellimmunoglobulin-likereceptor，KIR)是Ⅻ(细胞的一类重要功能受体，通过传递抑制或激活信号，调节NK细胞活性并产生相应功能。与人白细胞相关抗原(HLA)基因相似，KIR家族的基因也呈多态性，可有多个等位基因，在不同的人种有不同的表达，但又与HLA基因不同，KIR的基因数目在不同Nl(细胞克隆和不同个体有差异，并与某些疾病的发病相关。肿瘤免疫治疗方法种类繁多，已与现代生物高科技技术结合，发展成为继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗模式—肿瘤生物学治疗方法。为了探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗的关联性，对在我院肿瘤科住院治疗的108例肿瘤患者进行研究，分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗的关联性。

1.研究对象与方法

1.1研究对象：选取2011年1月至2011年6月在我院肿瘤科住院治疗的78例肿瘤患者为研究对象。年龄分布21-85岁。其中男性41例，女性37例。所有病例均经临床和病理确诊，其中肺癌32例，胃癌18例，乳腺癌8例，宫颈癌13例，淋巴癌1例，直肠癌6例。正常对照组为我院常规体检中无血缘关系的随机健康个体78例。

1.2方法

1.2.1试剂：TaqDNA聚合酶购自Olerup公司，KIR基因分型试剂盒购自Promega公司。

1.2.2DNA提取：无菌操作下采集患者和正常人外周血各5m1，用少量乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝后，置15ml试管中保存。盐析法抽提DNA，小心取出絮状沉淀之DNA，用70％酒精洗涤3次，放在1.5mlEppendorf管内，置室温下晾干。视DNA量多少加入pH8.0的TE液0.2～0.5mL，分光光度计下测定并记录DNA浓度及OD值后，置于一80℃冰箱保存。[1]

1.2.3KIR基因型分析：用序列特异性引物PCR(PCR-ssp)的方法进行KIR基因分型。PCR反应体系20µl,含dNTP终浓度0.2mmol/L，MgCl22mmlo/L，引物终浓度214.3mmol/L，TaqDNA聚合酶0.5U，10×PCR缓冲液2µl。反应条件为：96℃预变性1min，96℃变性25s，65℃退火45s，72℃延伸30s，5个循环；96℃25s，60℃45s，72℃30s，21个循环；96℃25s，55℃1min，72℃2min，5个循环；72℃延伸10min。PCR产物1.5％琼脂糖凝胶电泳，AlphaImagerTM2200生物图像分析进行结果分析。

2.结果

在所研究的78例肿瘤个体和78例正常个体中共检出了目前已知的18个KIR基因。且肿瘤患者的KIR基因频率与正常个体相比较，有统计学意义。

3.讨论

KIR功能上分为抑制性和活化性两种受体。NK细胞表面制性KIR识别自身MHCI类分子，有效地阻止NK细胞对自身正常组织细胞的攻击。而活化性KIR与MHCI类分子结，能诱发NK细胞的杀伤作用。NK细胞表面表达的活化抑制性KIR的表达比例影响着NK细胞的活化状态。而NK细胞表达的KIR谱主要取决于其KIR的基因型[2]。

免疫组化技术结果认为25%～75%的肿瘤细胞有不同形式的HLA表型改变。当肿瘤细胞表面HLA分子发生变异或表达降低时，NK细胞识别的抑制信号消失，活化信号占优势，从而对肿瘤细胞发挥杀伤作用。

目前KIR不相合的异基因造血干细胞移植在根治急性白血病方面疗效确切，已应用于临床[3]。因为异基因造血干细胞移植后，给受者进行供者淋巴细胞输注（DLI）有助于肿瘤消退，尤其在慢性粒细胞性白血病（CML）的治疗中最为有效，提示了异基因淋巴细胞输注治疗实体瘤的过继免疫治疗的可行性[4]。

由于抑制性KIR在调节NK细胞活化中发挥重要作用，因此用以减弱KIR功能的治疗策略可能强化NK细胞在治疗癌症和病毒感染中的活性。这与仍表达HLA分子的肿瘤患者的治疗尤其密切相关。除了与抑制性KIR的功能相关外，SHP-1和SHP-2磷酸酶是各种组织中一系列的抑制性受体的共同信号转导效应分子，因此如果应用药物抑制这些磷酸酶，可能不会有特异治疗性仅仅增强体内NK细胞的功能。在癌症患者中，KIR的阻滞有可能成为切实可行的治疗选择以促进NK细胞介导的对肿瘤的细胞毒性反应[5]。

综上可以得出结论，对杀伤细胞免疫球蛋白样受体的临床认识可以有效地促进肿瘤免疫治疗的发展。

参考文献

[1]MillerSA，DykesDD，PoieskyHF，eta1.AsimplesaltingngoutprocedureforextractingDNAfromhumannucleatedcells[J].NucleicAcidsRes，1988，16(3)：1215.

[2]ShillingHg，YoungN，GuethleinLA，eta1.GeneticcontrolofhumanNKcellrepertoire[J].JImmunol，2002，169：239-247.

[3]ContiniP,GhioM,PoggiA,etal.SolubleHLA-A,-B,-Cand-GmoleculesinduceapoptosisinTandNKCD8TcellsandinhibitcytotoxicTcellactivitythroughCD8ligation[J].EurJImmunol,2003,33:125-134.

[4]郑蕊蕊.杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤免疫治疗[J].中国肿瘤，2006,5(1):39-42.

[5]王伟强,李书军.自然杀伤细胞与癌症—杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的调控[J],中国肺癌杂志，2010,13(7)：731-744.