中性粒细胞弹性蛋白酶与肝癌转移的关系研究

唐志强通讯作者王燕清

上海市奉贤区中心医院上海201400

【摘要】目的：探讨中性粒细胞弹性蛋白酶与肝癌转移的关系。方法：30例肝癌患者根据癌症转移的部位分两组，分别是肝癌不转移组和肝转移组。采用ELISA法测定患者组织上清及血清中NE、IL-6和TNF-α水平，并进行NE与IL-6和TNF-α相关性的分析。结果：①肝癌患者血清NE的水平明显高于对照组（p<0.005），肝癌不转移患者NE水平分别与肝癌转移患者的血清中NE的水平进行比较，差异显著（p<0.005），在肝癌组织上清中NE的水平在肝癌不转移及肝癌转移间有明显的差异（p<0.005）IL-6及TNF-α的水平在肝癌不转移及肝癌转移患者间有明显的差异（p<0.005）。②相关性的分析结果显示，NE与IL-6及TNF-α呈明显的正相关（p<0.005）。结论：肝癌患者其癌症组织上清及血清中NE的水平与肝癌侵袭转移有关，提示调节NE的水平有可能成为防止肝癌侵袭转移的新思路。

【关键字】中性粒细胞弹性蛋白酶；肝癌；侵袭转移

【中图分类号】R329.2【文献标识码】B【文章编号】1674-8999（2015）8-0239-02

Studyontherelationshipbetweenneurtophilelastaseandmetastasisofcolorectalcancer

【Abstract】Objective:Toexploretherelationshipbetweenneurtophilelastaseandmetastasisofcolorectalcancer.Methods:60casesofcolorectalcancerpatientswaspidedintothreegroupsincludinggroupwithoutmetastasisofcolorectalcancer,groupwithcolorectalcancertransferringtoliverandgroupwithcolorectalcancertransferringtolungbasedonthepositionwherecolorectalcancertransfer.Thelevelsofneurtophilelastase(NE),IL-6andTNF-αintexturalsupernatantandserumweredetectedusingtheELISAmethod.Also,thecorrelationofNEwithIL-6andTNF-αwasanalyzed.Results:①ThelevelofNEincolorectalcancerwasmarkedlyhigherthanthatincontrol(p<0.005).Also,significantdifferenceswerefoundinthelevelsofNE,IL-6andTNF-αbetweengroupswithandwithoutmetastasisofcolorectalcancer(p<0.005).Howevernosignificantdifferenceswasshowedbetweengroupwithcolorectalcancertransferringtoliverandtolung.②CorrelationanalysisindicatedthatNEdisplayedapositivecorrelationwithIL-6andTNF-α.Conclusion:TheseresultssuggestedthatNEhadrelationshipwithmetastasisofcolorectalcancer,especiallytumormetastasistolungandliver,implyingthatregulatingthelevelofNEmaybeathreadforpreventingthemetastasisofcolorectalcancer.

【Keywords】neurtophilelastase;colorectalcancer;invasionandmetastasis

肝癌是消化道最常见的恶性肿瘤，在我国的发病率呈逐渐上升的趋势。通过肝癌根治性切除术在一定范围内能提高患者的生存率，但由于肝癌极易发生远处转移，使得癌症未得到根治而影响疗效，进而影响患者的生存率。所以，阻断肝癌发生转移的途径对于提高患者的生存率具有重要的意义[1]。中性粒细胞弹性蛋白酶属于锌离子和钙离子依赖性基质降解酶，作用底物广泛，可降解细胞外基质中的所有蛋白，被认为是最具破坏力的酶类之一。据报道，其余许多疾病的发生发展息息相关，如炎症性肠病、溃疡性结肠炎、心肌炎、类风湿、脑损伤、肺损伤、肺气肿等[2-3]。近年来，关于中性粒细胞弹性蛋白酶与疾病的相关性备受关注，而关于其与肝癌远处转移关系的研究，本研究意在采用ELISA法测定人肝癌组织NE、IL-6、TNF-α水平，分析NE与IL-6及TNF-α相关性，探讨NE与肝癌转移的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2012年2月至2014年2月期间在我院普通外科进行手术切除的患者30例，男性12例，女性18例，其中无转移16例，肝癌转移14例，平均年龄为（48+7.7）岁。住院第一天，所用患者即清晨抽取空腹静脉血，用于血清的制备，对照组血清选择同一时期在我院进行健康体检者20例。纳入标准：术前经肝癌镜检及病理活检确认为肝癌。无放疗史、化疗史。腹部未进行手术。患者接受开腹手术进行肝癌根治性切除术。术后将离体样本分为两部分。第一部分标本用于HE染色观察。第二部分标本用于组织上清的制备。

1.2HE染色

所有患者的第一部分肝癌标本取出后均进行HE染色，将经甲醛固定后的结肠标本取出，按照常规HE染色前处理。HE染色后进行镜检。进行分期。

1.3组织上清及血清的制备

取第二部分肝癌组织，在冰上将组织磨碎，4℃5000r/min离心10min后取上清液，放于-20℃，尽量避免反复冻融。将预先抽取的静脉血4000r/min离心10min,离心后，吸取血清放于-20℃。对制备的上清和血清将采用弹性蛋白酶定量检试剂盒(上海胜隆实业有限公司)ELISA法测定中性粒细胞弹性蛋白酶的浓度，并同时采用ELISA法检测IL-6及TNF-α的水平（IL-6及TNF-αELISA酶联免疫试剂盒购于上海优宁维有限公司）。

1.4统计分析

在统计软件SPSS13.0进行数据的处理，各测量指标用?x±s表示，各组数据间的比较采t检验，以P≤0.05为有统计学差异。两两之间相关性采用perman相关检验。

2结果

2.1病理组织学分级结果

根据2012年肝癌临床实践指南TNM标准进行分期，其中I期6例，II期5例，III期11例，IV期8例。

2.2血清NE、IL-6和TNF-α水平的测定

30例肝癌患者中，肝癌无转移组和肝癌转移组中性粒细胞弹性蛋白酶的浓度分别与正常对照组相比，差异显著（t值分别8.368,10.65；P<0.0001）；无转移组与肝转移组比较，差异显著（t=5.792,p<0.0001）。IL-6水平在肝癌组与对照组之间差异显著（t值分别15.77、17.57、19.77；P<0.0001），无转移组与肝癌转移组比较，差异显著（t=3.511,p=0.0012）。TNF-α在肝癌转移组的水平明显高于对照组（p<0.0001）,且无转移组TNF-α与肝癌转移组差异明显（p<0.0001），。相关性的分析结果显示，NE与IL-6（r=0.9428,p=0.0290）及TNF-α（r=0.9532,p=0.023）呈显著正相关。

表1血清NE、IL-6和TNF-α水平的测定（?x±s）

3讨论

中性粒细胞弹性蛋白酶由中性粒细胞释放，其参与机体的免疫防御、炎症反应及其在调控中发挥着重要的作用，并能促进病毒、细菌的侵入及癌细胞的转移。据有关报道，中性粒细胞是引起各种损伤的早期触发因子，其在肠道病变部位的浸润是溃疡性结肠炎急性期的标记，中性粒细胞弹性蛋白酶作为中性粒细胞分泌的主要产物必然与溃疡性结肠炎有关，相关的研究也证实在溃疡性结肠炎和克罗恩病中NE酶mRNA表达水平和免疫组织化学染色普遍升高[4-5]，而溃疡性结肠炎和克罗恩病发展成肝癌的危险性明显增高[6]，进而检测肝癌组织中的NE水平对于预防肝癌的发生、发展具有重要的意义。由于NE与人类很多疾病的发生发展息息相关，如肺损伤、肺气肿、肝疾病，而肝癌常发生远处转移，特别是肝肺的转移。然而，关于NE与肝癌肝、肺的转移的研究甚少。

本研究通过对肝癌不转移、肝癌转移患者的血清及癌变组织上清采用ELISA检测NE的水平。结果显示，肝癌患者血清NE的水平明显高于对照组（p<0.005），肝癌不转移患者NE水平分别与肝癌肝转移和肝癌肺转移患者的血清中NE的水平进行比较，差异显著（p<0.005），但肝癌肝转移和肝癌肺转移患者的血清中NE的水平无明显的差异（p>0.05）。中性粒细胞弹性蛋白引起的炎症反应引发炎症细胞因子的释放，如IL-6和TNF-α[7-8]。IL-6和TNF-α等炎症因子在肝癌组织中大量存在，是肝癌诊断和检测的不可缺少的指标[9-11]。基于此，本研究同时检测了IL-6和TNF-α的水平，结果表明肝癌不转移患者了IL-6和TNF-α水平分别与肝癌肝转移和肝癌肺转移患者的血清中NE的水平进行比较，差异显著（p<0.005），但在肝癌肝转移和肝癌肺转移患者中差异不明显（p>0.05）。相关分析结果显示，血清中NE与IL-6（r=0.9428,p=0.0290）及TNF-α（r=0.9532,p=0.023）呈显著正相关。

综上所述，本研究表明肝癌患者其癌症组织上清及血清中NE的水平与肝癌侵袭转移有关，特此外，调节NE的水平有可能成为防止肝癌侵袭转移的新思路。

参考文献：

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通讯作者：

唐志强，上海市奉贤区中心医院普外科。