罗汉果甜苷对D-半乳糖衰老模型小鼠作用的实验研究

陈壮1肖刚2

(1广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530011）

（2右江民族医学院广西百色533000)

【摘要】目的：通过罗汉果甜苷（Mog）对D-半乳糖衰老模型小鼠作用的实验研究，探讨其延缓衰老作用可能的作用机理。方法：60只小鼠随机平均分成6组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组、Mog高、中、低三个剂量组，除正常对照组外，其余小鼠采用D-半乳糖（0.05g/kg）造模。各给药组连续给药6周后测定小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和脑组织中SOD、MDA的含量。结果：与正常组比较，模型组小鼠SOD的含量降低，MDA的含量升高，差异具有显著性（P﹤0.01）；与模型组比较，Mog各剂量组小鼠脑组织和血清中SOD含量升高，MDA含量降低，差异均具有显著性（P﹤0.01或P﹤0.05）。结论：罗汉果甜苷对D-半乳糖衰老模型小鼠有延缓其衰老的作用。

【关键词】罗汉果甜苷D-半乳糖抗衰老SODMDA

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）10-0028-02

目前，我国已经进入老年化社会，老年人已达到1亿3千万人，专家预测到2015年，我国60岁以上的人口将达到2.8亿。人口衰老与老年疾病发生有直接相关性，大多数老年人同时患有一种以上的疾病，由于老年病的迁延性和难愈性，使其对医学资源连续消耗，庞大的医疗费用已经成为国家、社会和家庭的沉重负担[1]。如何解决这些老年人包括一部分中老年人受衰老的困扰，是一个摆在我们面前的十分严峻的课题。一直以来，寻找延缓衰老的方法和药物，具有极其重要的意义。

罗汉果是广西特产中药，性凉、味甘、无毒，归肺、大肠经，有润肺止咳、凉血滑肠之功效，常用于治疗肺火燥咳、咽痛失音、肠燥便秘等。现代药学研究发现其有止咳祛痰、保肝、降血糖、增强免疫、抗癌等多种药理作用[2]。但罗汉果抗衰老的作用还未见有报道，本实验开展对罗汉果甜苷抗衰老的研究可望提高罗汉果的综合利用价值。

1材料与方法

1.1试剂超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20080708；丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20080708。

1.2药物罗汉果甜苷（Mog），桂林兴达制药有限责任公司，批号：081022。

1.3动物SPF级昆明种小白鼠，18～22g，雌雄兼用，清洁级动物，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2009-0002。小鼠分性别饲养于空调室内，室温（22±2）℃，湿度（70±5）%，喂标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。

1.4仪器万分之一克电子天平：德国赛多利斯生产；微量加样器：德国；液体快速混合器：江西医疗器械厂；超声细胞粉碎机：宁波新芝科器研究所；高速低温离心机：德国BiofugeStoucctos；CHEM-300型半自动生化分析仪，德国Bio-Asia公司生产。

1.5动物实验方法

1.5.1实验分组、造模、给药

昆明种小鼠随机分成6组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组、罗汉果甜苷高、中、低三个剂量组，每组10只。正常对照组每天皮下注射等体积生理盐水（1ml/kg），模型对照组、阳性对照组、罗汉果甜苷高、中、低剂量组每天皮下注射D-半乳糖（0.05g/kg）。连续6周后，模型组小鼠行动迟缓、毛发无光或脱落、反应迟钝，呈现明显衰老体征。造模同时对正常对照组、模型对照组灌胃等量生理盐水；阳性对照组每天灌胃维生素E0.05g/kg；罗汉果甜苷高、中、低剂量每天灌胃罗汉果甜苷剂量依次为1.5g/kg、0.75g/kg、0.38g/kg[3]。

1.5.2血清样本采集：实验结束摘眼球取血。取血前禁食不禁水12h，全血静置2-3h，见有血清析出后离心（4000r/min）分离血清，按试剂盒说明检测血清SOD、MDA。

脑组织采集：脑组织匀浆的制备各组小鼠处死，取出脑组织，吸干，称0.2g左右的脑组织，冰浴下按脑组织（g）：生理盐水（ml）为1：9比例稀释，超声细胞粉碎机匀浆（3500r/min、工作10s间歇20s），所得匀浆液低温离心（4000r/min）取脑组织匀浆上清按，试剂盒测定SOD、MDA。

1.6统计学方法动物分组设计采用随机、均衡方法设计分组；采用SPSS13.0统计软件分析数据。计量资料以“均数±标准差（x-±S）”表示，两组间均数差异用t检验。

2结果

2.1罗汉果甜苷对衰老小鼠脑组织中SOD和MDA的影响

测定各组D-半乳糖衰老模型小鼠脑组织SOD、MDA，结果显示，正常组SOD、MDA水平与造模组比较，P﹤0.01说明造模成功；罗汉果甜苷各剂量与模型组比较，脑组织MDA水平均明显低于模型组（P﹤0.01），罗汉果甜苷高、中剂量对脑组织SOD有明显升高作用，与模型组比较，差异具有显著性（P﹤0.05）。结果见表1。

表一：D-半乳糖衰老模型小鼠脑组织SOD和MDA生化指标比较（x-±S）n=10)

注：与模型组比较﹡P<0.05﹡﹡P<0.01

2.2各组小鼠血清中SOD和MDA的变化

测定各组D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD和MDA，正常组SOD、MDA水平与模型比较，P﹤0.01说明造模成功；罗汉果甜苷高、中剂量组与模型组比较，SOD水平明显高于模型组（P﹤0.01）MDA水平明显低于模型组（P﹤0.01）。结果见表2。

表二：D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD和MDA生化指标比较（x-±S）,N=10)

注:与模型组比较﹡﹡P<0.01

3讨论

D-半乳糖衰老模型是近10年来中药研究中普遍采用的衰老模型，能表现出与16～24月龄衰老鼠相似的学习记忆能力下降，自由基产生增加，免疫功能退化等自然衰老过程中的变化；且其造模时间短，成模容易，重复性好[4]。D-半乳糖是目前广泛采用的一种研究体内抗氧化衰老作用的方法。长期连续大剂量皮下注射D-半乳糖会导致小鼠细胞代谢紊乱，免疫应答能力下降，抗氧化酶的活性降低，诱发氧化应激，引起脂质过氧化作用的链式反应。氧化应激是机体在遭受各种有害刺激时，体内高活性分子如超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢等活性氧自由基(reactiveoxygenspecies，ROS)产生过多，打破了体内氧化与抗氧化体系之间的平衡关系，而导致组织损伤，引起衰老和多种疾病[5]。SOD作为体内重要的抗氧化酶，它能使超氧化阴离子自由基变为过氧化氢和氧离子，从而减少脂质过氧化反应，使机体组织和细胞免受损害[6]。MDA是体内自由基引发的脂质过氧化产物之一，其含量可间接用以判断机体脂质过氧化损伤以及衰老的程度[7]；它在脑组织和血清中的含量间接的反应了自由基的反应时组织的破坏程度[8]。MDA既是评价衰老的重要指标之一，又可反映组织氧化的程度。脑组织SOD、MDA可以反映脑组织自由基产生和老化的程度，从而反映脑组织的功能状态。SOD的合成是诱导性的，少量自由基可以诱导SOD的合成，而大量的自由基则可以消耗掉机体的SOD。随年龄增长，自由基生成增多，SOD合成和活性逐渐下降，造成自由基损害的连锁反应，提高衰老机体的SOD水平对于抗衰延寿有着重要价值[9]。

本实验中发现罗汉果甜苷可提高衰老小鼠脑组织和血清中的SOD的活性，降低了血清中和脑组织中MDA的含量，提示其有延缓衰老的作用，其抗衰老机制有待进一步研究。

参考文献

[1]周坤福,管隽.中医药对衰老主要相关基因影响的探讨[J].河南中医,2006,26(12):80-82.

[2]肖刚,王勤.罗汉果研究进展[J].上海中医药杂志,2006,40(11):71-73.

[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993,937-939.

[4]刘汴生.衰老过程的病理生理[J].实用老年医学,2002,16(2):59-60.

[5]刘春红,金钟斗,韩宝瑞.平贝母多糖对D-半乳糖诱导衰老模型小鼠的抗氧化作用[J].食品科学,2011,32(23):285-288.

[6]庞俊伟,翟春涛.逍遥散对衰老模型小鼠血清中SOD、MDA含量影响的实验研究[J].山西中医学院学报,2011,12(1):16-18.

[7]吴立蓉,吴趋凡,黄兆胜.益寿丸对D-半乳糖致衰老模型小鼠自由基代谢的影响[J].现代中药研究与实践,2012,26(1):31-33.

[8]叶和杨,周俐,曾靖,等.金边瑞香对小鼠SOD活性及MDA含量的影响[J].赣南医学院学报,2003,23(3):246-248.

[9]莫艳秀,于美娟,莫永亮.林蛙油对D-半乳糖致衰老模型小鼠的保护作用[J].中国老年学杂志,2011,31:1603-1604.