微波消解法在蛋白质含量测定中的应用

全德甫孙华杰白江涛林俊香

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0018-02

【摘要】目的探讨微波消解法在食品中蛋白质含量测定中的应用的可行性。方法用微波消解法代替凯氏定氮法中的消化方式，消化好的试样以定氮法测定。结果改进法与经典方法比较，测定结果基本一致，经t检验无显著性差异（t＝0.4262,P＞0.05）,方法精密度：RSD<3%（n=6）,平均回收率=98.2%。结论该法操作简便，分析速度快，空气污染小，试剂用量少，可用于食品中蛋白质的测定。

【关键词】微波消解法食品蛋白质含量测定

凯氏定氮法是测定食品中蛋白质含量的法定方法[1]，测定结果稳定、准确，但样品的消化费事费时，试剂消耗量大，且消化时排放的SO2直接危害分析人员身体健康。微波消解法具有操作简便，消化速度快，试剂用量少，空气污染小等优势。实验证明，用微波消解法代替凯氏定氮法中的消化方式，测定结果与法定方法无显著性差异，适用于大批量蛋白质含量的测定。

1材料及方法

1.1仪器及试剂

1.1.1仪器

XT-9900型智能微波消解仪（上海新拓微波溶样测试技术有限公司出品）；AUW220D电子天平；定氮蒸馏装置。

1.1.2试剂

六次甲基四胺（标准品）；C(HCl)=0.0100mol/L的盐酸标准滴定溶液；其余同国家标准[1]。

1.2实验方法

1.2.1样品消解

称取0.1～0.5g混匀固体样品或1～5mL液体样品于溶样杯中，加5～8mL硫酸，稍摇匀后加1～2mL过氧化氢，按表1进行样品消解，消解后样液应为清澈的溶液，放冷后，定容至25～100mL，混匀备用。取与处理样品相同的硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。

表1样品消解程序

同时使用凯氏法[1]进行蛋白质消解，进行比较实验；取乳及乳制品、保健品等5份样品，分别称取6份进行蛋白质消解，进行精密度试验；另用标准品六次甲基四胺作准确度试验。

1.2.2定氮测定

按国家标准[1]中（GB/T5009.5-2003）食品中蛋白质的测定方法（4.3）微量定氮法进行操作。

2结果

2.1不同消解方法蛋白质测定结果的比较：

对保健品、乳及乳制品等15份样品，用凯氏烧瓶和微波消解仪消化样品，分别测定蛋白质含量，结果见表2。

表2两种消解方法蛋白质测定结果比较

两种方法消化样品，蛋白质含量测得结果经统计学处理表明无显著差异。

2.2方法精密度试验结果见表3。

表3方法精密度试验结果（n=6）

2.3方法准确度试验

取3份样品，分别加入一定量的六次甲基四胺，按上述方法测定，该基准物的理论含氮量为39.6%[2]，结果见表4。

表4回收率试验结果

3讨论

3.1蛋白质测定中消化方法改为微波消解法，由于样品与试剂的反应是在密闭的容器内进行的，所以对环境的污染和对分析人员的毒害大大减小；用H2SO4-H2O2混合液为消化试剂，试剂用量少，消化速度快且消化彻底；仪器在设定好所需的压力值、微波加热时间和微波功率的条件下，即可自动完成全部操作，操作方便，减轻了分析人员的劳动强度，提高了工作效率。

3.2可视样品蛋白质含量高低，适当增减取样量，如遇在常温下需要长时间起反应的样品，或样品的称量增加，可将准备好的样品放置过夜，或在电热板上低温稍加热进行预处理，并不断摇动溶样杯，待反应缓和后再进行微波消解。过氧化氢可缓慢趁热加入，并不断摇动溶样杯，效果会更好，且大大缩短消化时间。

3.3干的样品放入溶样杯后，需先用少量去离子水湿润，溶样杯内溶液体积保持在5～15mL，液面太低压力上升缓慢，太高容易造成压力过冲，超压泄气。消解程序中的第一档，功率可调至60%～80%，第二、三档再调至100%，防止压力上冲，造成危险。

实验结果表明，改进法与经典方法比较，测定结果基本一致，经t检验无显著性差异（t＝0.4262,P＞0.05）,方法精密度：RSD<3%（n=6）,平均回收率=98.2%，且简便易行，适用于大批量蛋白质含量的测定。

参考文献

[1]GB/T5009.5-2003食品中蛋白质的测定.

[2]单季先,陈悦.食品中蛋白质含量测定方法的探讨.中国卫生检验杂志,2005,15(4),453.