5’-磷酸吡哆醛对血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的影响朱柏林

朱柏林

【中图分类号】R446.11+2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）19-0083-02

【摘要】目的研究丙氨酸氨基转移酶（AlanineAminotraasferase,ALT）检测试剂中5’-磷酸吡哆醛（Pyrldoxal-5’-phosphate,PLP）的添加对血清ALT活性测定的影响。方法以山东潍坊康华生物技术有限公司生产的丙氨酸氨基转移酶试剂（按照IFCC推荐方法配制，不含PLP）和在该品牌试剂中加入5’-磷酸吡哆醛溶液,分别用这两种试剂测定相同的新鲜临床标本280例,并对检测结果进行统计学比较。结果使用含PLP的IFCC配方试剂较不含PLP试剂的检测结果明显增高。结论康华公司生产的丙氨酸氨基转移酶试剂添加PLP比较不添加PLPALT活性增加近5%-40%，且两种试剂的ALT检测结果不能通过简单系数实现转换。

【关键词】丙氨酸氨基转移酶5’-磷酸吡哆醛IFCC推荐方法

EffectionofPyridoxal-5’-phosphateonDeterminationofAlanineAminotransferaseactivities

【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectionofPyridoxal-5-phosphate(PLP)ondetectionofAlanineAminotransferase(ALT)activites.MethodsAccordingtoIFCCrecommendatorymethods,reagentswerebothprepared,ALTweredetevtedandcomparedaseries.ResultsThelevelofALTisobviouslyhigheringroupwithPLPreagentthantheothergroup(reagentwithoutPLP).ConclusionForPLParedifferentindifferentpopwlation,theregentofIFCCrecommendatorymethodsincrease5%-40%thantheimportregent,soreagentsALTresultsoftwomethodscannotbeconvertedbyusingsimplecoefficient.

【Keywords】AlanineAminotransferasePyridoxal-5’-phosphateIFCCrecommendatorymethods

丙氨酸氨基转移酶（ALT）是评价肝功能最常用的指标之一，其结果的准确性对疾病的诊断和疗效判断极其重要。但是由于目前测定ALT的试剂成份有含与不含5’-磷酸吡哆醛试剂两类，其中含5’-磷酸吡哆醛试剂有利于ALT的稳定，不含5’-磷酸吡哆醛试剂将可能检测到假性低活性酶水平。因而使用不同的试剂对ALT的测定结果差异有显著性，特别是在严重的肝、肾疾病时，由于病人血清中5’-磷酸吡哆醛减低并且程度不一，含与不含5’-磷酸吡哆醛试剂对测定血清ALT结果有极明显的差异。我们着重研究在测定血清中丙氨酸氨基转移酶时,检测试剂中5’-磷酸吡哆醛的添加与否对检测结果的影响。

1材料与方法

1.1材料

(1)检测仪器:BECKMAN-CX7型全自动生化仪。

(2)检测试剂:取山东潍坊康华生物技术有限公司生产的丙氨酸氨基转移酶试剂（按照国际临床化学和检验医学联合委员会(IFCC)推荐方法配制，注册号：鲁食药监械准字2009第24000330，批号20120118；后面标示为ALT1),在该试剂中加入5’-磷酸吡哆醛溶液；另取同品牌、同批号该试剂(后面标示为ALT2),不加入5’-磷酸吡哆醛溶液。

(3)检测样品:临床新鲜血清标本2808例,数值分布按美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订的EP9-P［1］评价方案进行。其中0-19U/L：561例；19-38U/L：556例；38-76U/L：838例；76-152U/L：578例；152-285U/L：275例。

1.2方法

按试剂说明书设置参数在BECKMAN-CX7型全自动生化仪上；常规检测蒸馏水空白，试剂空白和室内质控，检测结果合格后，分别使用含PLP的IFCC配方试剂与不含PLP试剂检测相同的临床新鲜血清标本2808例。

ALT1：含PLP丙氨酸氨基转移酶试剂的试剂空白为1.236。

ALT2：不含PLP丙氨酸氨基转移酶试剂的试剂空白为1.238。

1.3统计分析

对两组结果进行相对百分比偏差比较同时做配对t检验；用Excel进行线性回归及相关系数计算以ALT1方法为X轴,ALT2结果为Y轴。

2结果

v比较结果如下

利用配对t检验对两种试剂测得ALT结果进行处理，两组结果有显著性差异（P<0.01）。两种方法测定结果相对偏差见下表：

两种方法ALT活性测定结果

范围例数临床标本结果总体均值相对百分偏差%

ALT1ALT2(ALT2Y-ALT1X)/ALT1

0-19U/L56123.117.6-20.2916

19-38U/L55635.430.3-18.5271

38-76U/L83866.657.8-15.3561

76-152U/L578123.7109.5-12.4532

152-285U/L275241.3218.1-11.9876

注：个体标本测定值偏差从5%-40%不等。

2.2回归分析

用Excel进行分析的结果如下图：

3讨论

血清中的ALT必须在酶和辅酶同时存在时才表现出最大活力，5’-磷酸吡哆醛为其辅酶，在反应中起到传递氨基作用，测定ALT时，加入5’-磷酸吡哆醛可提高酶的活性。现已知道含或不含5’-磷酸吡哆醛试剂对ALT测定结果存在着显著差异。本实验证明了这一结论，并且含5’-磷酸吡哆醛试剂测定ALT结果，可增加5%-40%不等，说明PLP在人体内的含量可能与个体差异或疾病有关,同时表明不含PLP的试剂检测结果与IFCC推荐方法间不能通过简单的系数关系进行换算。在肝脏疾病如急性肝炎、肝硬化晚期，肾脏疾病如慢性肾炎、尿毒症，血透析后，由于肝功能异常，肾功能下降，人为透析造成体内5’-磷酸吡哆醛降低并且程度不一，会导致不含5’-磷酸吡哆醛试剂测出的ALT活性，不能真正的反映肝肾细胞破坏的程度，出现假性低水平，从而影响到病情的正确判断。而使用含5’-磷酸吡哆醛的试剂，能体外补足5’-磷酸吡哆醛，激活ALT活性，保证ALT的活性。但在我国大部分医院使用的是不含PLP的ALT试剂，可能是出于结果与以前结果可比性的考虑。建议对上面提到的这些特殊病人在临床应用中使用含5’-磷酸吡哆醛的试剂，才能保证ALT测定结果的准确性。

参考文献

[1]NCCLS(EP9-P).Usercomparisonofquantitativeclinicallaboratoryusingpatientsamples;ProposedGuideline(1986).

[2]IFCCPrimaryReferenceProceduresfortheMeasurementofcatalyticActivityConcentrationsofEnzymeson37℃.ClinChemLabMed,2002,40(7):718-724.

[3]叶应妩,王毓三,主编.全国临床检验操作规程.第二版[M]，东南大学出版社,1997.5.