复方丹参片稳定性研究

危菊芬赵忠庆杨文云刘云斌邓颖捷

【摘要】目的对复方丹参片进行稳定性研究，确定影响其稳定性的主要因素。方法以影响因素试验，加速试验和室温留样的复方丹参片为研究对象，观察其外观性状并测定其崩解时限，采用HPLC来测定复方丹参片中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量。结果复方丹参片在温度23-40℃、相对湿度20%-70%范围内密封避光保存稳定性好，在光照4000Lx、温度40度以上、湿度70%以上，随着储存期加长稳定性变差，质量下降。结论复方丹参片在光照，高温和高湿条件下不稳定，应避免在这些条件下贮存、流通；在室温低湿避光密封下稳定性较好，可长期贮存。HPLC作为其质量控制方法准确、可靠。

【关键词】复方丹参片含量测定稳定性

1.仪器与试药

1.1仪器Agilent-1100（VWD检测器）；SK7210LHC型号超声仪；METTLERAE240型分析天平；BSA224S-CW型电子天平；HG202-2A电热恒温干燥箱；ZBS-6Q型智能崩解仪。

1.2色谱柱丹参酮ⅡA：AngilentC18(5μm，250mm×4.6mm)；丹酚酸B：HypersilODS色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)。

1.3样品：复方丹参片（云南白药集团售品，市售包装）。乙腈、甲醇、甲酸（默克公司）分析纯，超纯水。参酮ⅡA和丹酚酸B对照品(中国食品药品检定研究院）。

2.实验方法

2.1对照品溶液的制备

2.1.1取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.1.2取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含60μg的溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备

2.2.1丹参酮ⅡA取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

2.2.2丹酚酸B取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取0.15g，精密称定，置50mL量瓶中，加水适量，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.3测定方法

2.3.1含量测定方法分别精密吸取丹参酮ⅡA和丹酚酸B的对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。图谱如下：

2.3.2复方丹参片的外观性状

按时取样，分别观察其外观性状及吸湿现象。该复方丹参片为薄膜衣片，除去包衣后显棕

色至棕褐色；气芳香，味微苦。

2.3.3复方丹参片的崩解时限

取本品，按崩解时限检查法2015年版《中国药典》四部（通则0921）检查，温度为38℃。

3.系统参数验证

3.1系统适用性试验

3.1.1丹参酮ⅡA用AngilentC18；以甲醇-水（73:27）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于2000。

3.1.2丹酚酸B用HypersilODS色谱柱；以乙腈-甲醇-甲酸-水（10:30:1:59）为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算不低于4000。

3.2线性关系考察

精密吸取丹参酮ⅡA(0.99mg/ml)、丹酚酸B对照品储备液(1.624mg/mL)1,2,4,6,8,10mL分别置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取上述溶液各10µL注入液相色谱仪，测定峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得丹参酮ⅡA回归方程Y=61.43X+276.19,r=0.9944;丹酚酸B回归方程Y=78.57X+923.81,r=0.9973。结果表明丹参酮ⅡA在0.099-0.728mg/mL范围内与峰面积与含量有良好的线性关系，丹酚酸B在0.1624-1.624mg/mL范围内与峰面积与含量有良好的线性关系。

3.3系统精密度

取同一批供试液，重复进样6次，测定峰面积，结果为:丹参酮的RSD为0.23％(n=6)；丹酚酸B的RSD为0.38％（n=6）。此实验结果表明该方法的系统精密度良好。

3.4稳定性试验

取同一批供试液，分别于0,2,4,6,8,10,12,24,30,36,40,48h时进样，测定峰面积，结果丹参酮的RSD为0.8％（n=6），丹酚酸的RSD为0.98％（n=6）。其结果表明该供试品溶液在48h内稳定。

3.5重复性

精密称取同一批号样品6份，按2.1-2.3项下处理测定分析，并计算丹参酮ⅡA、丹酚酸B含量，结果丹参酮ⅡA的平均含量为0.75mg/g，RSD=1.23％(n=6)。丹酚酸的平均含量为10.81mg/g，RSD=1.96％(n=6)，表明重复性较好。

3.6回收率

精密称取已知含量的样品6份，精密加入丹参酮ⅡA、丹酚酸B对照品适量，按2.1下方法提取，测峰面积并计算含量。结果显示，丹参酮ⅡA平均回收率为97.93％，RSD=0.59％(n=6)。丹酚酸B平均回收率为98.8％，RSD=0.66%(n=6)。结果表明：该测定方法灵敏、专属，符合含量测定要求，可用于该样品中丹参酮ⅡA、丹酚酸B的含量测定。

4.稳定性考察

4.1影响因素试验

4.1.1强光照射

取样品3批在4000Lx光照度下放置10d，分别于0,1,3,5,10d取样，分别按照上述的实验方法考察其外观性状、崩解时限及含量的变化情况见图3。

实验结果，复方丹参片在4000Lx光照度下随着时间增长外观稍有变化，崩解时限18.5-19.6min影响不大，但其中主要成分丹参酮ⅡA从0.60到0.23mg/g、丹酚酸B丹酚酸从11.48到6.65mg/g，5d以后下降较明显，表明本品在强光照射下不稳定，应避光保存。

4.1.2高温

取样品3批在密闭容器中分别于25℃(n=3),40℃(n=3),60℃(n=3)恒温箱中放置10d，分别于0,1,3,5,10d取样，分别按照上述实验方法考察其外观性状、崩解度及含量，结果0-10d，25℃：外观为棕褐色薄膜衣，无明显变化，崩解时限20.5-20.8min，丹参酮ⅡA的含量0.71-0.77mg/g，丹酚酸B的含量11.48-10.52mg/g；40℃：0-3d外观无明显变化，4-10d，薄膜衣稍有变硬,从0-10d崩解时限21.5-22.0min、丹参酮ⅡA的含量0.69-0.29mg/g、丹酚酸B的含量12.03-6.93mg/g；60℃：0-10d,薄膜衣稍有变硬、颜色逐渐变深，崩解时限22.1-23.0min，丹参酮ⅡA的含量0.45-0.0.23mg/g，丹酚酸B的含量7.45-4.93mg/g。

其试验结果表明，本品在25℃下是稳定的，各项考察指标无明显变化：在40℃,60℃，丹参酮ⅡA和丹酚酸的含量呈下降趋势，外观形状也出现变化，因此本品应避免高温保存。

4.1.3高湿

取样品三批（n=3）置恒湿密闭容器中分别于相对湿度75％、温度40℃和相对湿度92.5％、温度25℃条件下放置10d，分别于0,1,3,5,10d取样，分别按照上述实验方法考察其外观性状、崩解时限及含量，结果40℃75％：0-2d,薄膜衣无明显变化，3-10d片体变软、部分薄膜衣逐渐破裂，0-10d崩解时限19.8-12.5min、丹参酮ⅡA的含量0.85-0.74mg/g、丹酚酸B的含量10.13-5.75mg/g。25℃92.5%：0-2d薄膜衣无明显变化，3-10d片体变软、部分薄膜衣破裂,0-10d崩解时限19.4-12.2min、丹参酮ⅡA的含量0.56-0.25mg/g、丹酚酸B的含量10.25-4.75mg/g。

其结果表明，样品在这两湿度下丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量发生明显变化，高湿度变化更显著，并且样品外观变化明显，有吸湿现象，因此本品应密闭保存，避免高湿环境储存和流通。

4.2加速试验

取样品3批，在温度40℃±2℃，相对湿度65％±5％的条件下放置4个月，分别于0,1,2,3,4月末取样，分别按照上述方法考察其外观性状、崩解时限及含量情况。结果，外观性状无明显变化，崩解时限18.5-19.6min，丹参酮ⅡA的含量分别为0.6、0.62、0.65、0.69、0.71mg/g，丹酚酸B的含量分别为10.48、9.97、9.94、9.88、10.15mg/g。

其结果表明，本品在加速实验中，性质稳定，各项指标无显著变化。

4.3室温留样考察

取样品3批，在温度25℃±2℃，相对湿度30％±10％的条件下放置4个月。分别于0,1,2,3,4月末月取样，分别按照上述实验方法考察其外观性状、崩解时限及含量情况。

其试验结果表明，该样品在室温留样考察中，性质稳定，各项指标无显著变化。

5讨论

5.1复方丹参片是一种成分比较复杂的中成药，主要治疗冠心病、胸闷、心绞痛。其中丹参为君,三七为臣,冰片为佐使。而丹参酮ⅡA和丹酚酸B为主要药效成分，也是主要的质量控制指标成分，二者的化学性质很活泼，极易被氧化水解后变质，通过影响因素考察实验，数据也验证了在强光(4000Lx)、高温(>40℃)和高湿(>70%)条件下不稳定，故应避免在这些条件下贮存、流通。

5.2复方丹参片在较高的湿度条件下，会吸潮且片面开裂，严重影响片剂的外观、质量，故本品应贮存在外界相对湿度70％以下较好。

5.3在复方丹参片的稳定性实验中，[1]考察了其在盐酸溶液(9—1000)和磷酸盐缓冲液(pH6.8)中的崩解情况，结果表明本品在盐酸溶液(9—1000)快速崩解。

5.4对室温（25℃±2℃、相对湿度30％±10％）留样样品进行含量测定，在4个月之内，外观、含量、崩解等无明显变化；对加速（温度40℃±2℃，相对湿度65％±5％）样品进行含量测定，在4个月之内，外观、含量、崩解等无明显变化；结果表明本品在温度23-40℃、相对湿度20%-70%，密封避光保存稳定性好，适合室温避光密封下长期贮存。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中国药典(2015版二部、四部)[S].北京：国家药典委员会编，中国医药科技出版社，2015.6。

[2]刘文英，于治国.药物分析[M].北京:人民卫生出版社,2009,5(6):94-98.

[3]苏子仁，陈建南，刘良，等.复方丹参片中丹参酮ⅡA的变异因素和稳定化研究[J].中国中药杂志,2004,4(25):247-249.

[4]王丽萍.高效液相色谱法测定复方丹参片中丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量[J].医药导报,2007,10(26):1215-1216.

[5]李克庆.复方丹参片的质量情况分析[J].时针国医药,2004,15(5):275.