五味子藤茎的鉴别和含量测定研究

李足意1张献1孟永海2夏永刚2王知斌2

2黑龙江中医药大学北药基础与应用研究省部共建教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150040

【摘要】目的：五味子藤茎的鉴别和含量测定研究。方法：利用眼观、口尝、鼻闻的方法鉴别其外观性状，采用粉末制片法和薄层鉴别法研究其显微和薄层特征、通过高效液相色谱法测定五味子醇甲的含量。结果：五味子藤茎呈不规则卷曲状，大小不一，皮厚1.5-3.0mm。外表皮棕褐色至黄褐色，有的外栓皮呈剥离鳞屑状，外表面深黄色至黄色，切面黄色，易折断。气香，味稍苦。粉末棕黄色，在显微镜下能看到明显的木栓细胞，黄褐色，垂周壁呈连珠状增厚；嵌晶纤维呈梭形或长梭形，镶嵌有小的结晶；油细胞呈不规则圆形或椭圆形；可见少数淀粉粒。薄层鉴别显示五味子藤茎中能检出五味子甲素，五味子乙素，五味子丙素，五味子醇甲，五味子醇乙。五味子藤茎中五味子醇甲的含量为0.8689％，高于《中国药典》2015版五味子含量测定项下的0.4％。结论：本实验研究的可操作性强，可以为五味子藤茎开发利用和质量标准制定提供科学依据。

【关键词】五味子藤茎；鉴别；含量测定；外观性状

[Abstract]objective：tostudytheidentificationandcontentdeterminationofstemoffructusschisandrachinensis.Methods：usingtheeyeview，taste，nosetosmellmethodtoidentifyitsappearance，powderproductionmethodandthinlayeridentificationmethodisusedtostudyitscharacteristics，microstructureandthinlayerbyhighperformanceliquidchromatography（HPLC）methodfordeterminingthecontentoffructusschisandraealcoholarmour.Results：thestemoffructusschisandrachinensiswasirregularandcurly，withdifferentsizesandskinthicknessof1.5-3.0mm.Theouterepidermisisbrowntoyellowish-brown.Someoftheepidermisisexfoliatedandscaly.Theoutersurfaceisdarkyellowtoyellow.Theairisfragrantandslightlybitter.Thepowderisbrownishyellow.Undermicroscope，obviouscorkcellscanbeseen.Theembeddedcrystalfibersarespindleshapedorlongspindleshaped，andareinlaidwithsmallcrystals.Oilcellsareirregularroundorovalinshape.Afewstarchgrainsarevisible.TLCidentificationshowedthatschisandrachinensisa，schisandrachinensisb，schisandrachinensisc，schisandrachinensisaandschisandrachinensisbcouldbedetectedinthestemofschisandrachinensisvine.Thecontentoffructusschisandrachinensisinthestemoffructusschisandrachinensiswas0.8689%，whichwashigherthan0.4%inthedeterminationoffructusschisandrachinensisinthe2015editionofChinapharmacopoeia.Conclusion：thisstudyhasstrongoperabilityandcanprovidescientificbasisforthedevelopmentandutilizationofschisandrachinensisstemandtheformulationofqualitystandard.

[Keywords]fructusschisandrachinensisstem；Identification；Contentdetermination；appearance

五味子是东北地产药材之一，在东三省已经大面积种植。五味子藤茎在自然状态下生长量很大，为提高五味子产量和品质，每年都需剪枝和去除一定量的主枝条，一般剪下枝条的重量相当于原藤的1/4-1/3，以保证植株的正常生长和结果。这些大量被剪掉的茎枝弃之不用，造成了严重的资源浪费。本课题组前期对五味子藤茎进行了深入的化学成分和药理活性研究，发现了五味子藤茎重要的药理活性和一系列新颖的活性成分[1-4]。现代药理研究表明五味子藤茎具有降脂[5]、杀虫[6]、保肝[7-8]、抗氧化[9]等活性。由此可见，五味子藤茎有比较广阔的应用前景，本实验对五味子藤茎的鉴别和含量测定进行了研究，为进一步相关研究奠定基础。

1.仪器与试药

1.1仪器

光学显微镜（尼康）；天孚牌电子计数天平；HPLCWaters公司2695-2996型；SK-5200H型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；S648型恒温水浴箱（国营创新医疗器械厂）；AG135型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

1.2试药

硅胶GF-254（青岛海洋化工厂）；色谱级甲醇（美国Dikama公司）；对照品：五味子甲素，五味子乙素，五味子丙素，五味子醇甲，五味子醇乙，五味子酯甲，五味子酯乙（成都曼思特生物科技有限公司），纯度≥98%；所用试剂均为分析纯（天津试剂一厂）。

2.材料

实验原料于2015年8月采自黑龙江省饶河县、方正林业局和东宁县。经黑龙江中医药大学药学院中药资源教研室王振月教授鉴定为五味子科（Schisandra）五味子属（chinensis）植物五味子（Schisandrachinensis（Turcz.）Baill.）。样品保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室。

3.方法与结果

3.1五味子藤茎的外观性状

本品呈不规则卷曲状，大小不一，皮厚1.5-3.0mm。外表皮棕褐色至黄褐色，有的外栓皮呈剥离鳞屑状，外表面深黄色至黄色，切面黄色，易折断。气香，味稍苦。

3.2五味子藤茎的鉴别

3.2.1显微鉴别

取北五味子藤茎粉碎过60目筛，水合氯醛加热透化后稀甘油装片观察和水装片观察。结果显示粉末棕黄色，在显微镜下能看到明显的木栓细胞，黄褐色，垂周壁呈连珠状增厚；嵌晶纤维呈梭形或长梭形，镶嵌有小的结晶；油细胞呈不规则圆形或椭圆形；可见少数淀粉粒（见Fig1）。

3.2.2薄层鉴别

取本品（三种产地）粉末1g，加氯仿20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。再取五味子甲素，五味子乙素，五味子丙素，五味子醇甲，五味子醇乙对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述八种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（16：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见Fig.2）。

4.讨论

4.1本论文对五味子藤皮的粉末进行了研究，其中木栓细胞呈黄褐色，垂周壁呈连珠状增厚；嵌晶纤维呈梭形或长梭形，镶嵌有小的结晶；油细胞呈不规则圆形或椭圆形；可见少数淀粉粒。以上四个特征可以作为五味子藤皮药材粉末鉴别的依据。经薄层色谱法和色谱峰指认表明五味子藤皮甲醇提取物中含有五味子果实中常见的六种木脂素：五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲。照高效液相色谱法测得五味子醇甲的含量为：0.8689％，高于《中国药典》（2015版）五味子规定的0.40％，为五味子藤茎质量标准的制度提供依据。

4.2由于果实和藤茎化学成分的差异性，测定果实中五味子醇甲含量的色谱条件不一定适用于藤茎。本论文通过研究优化了高效液相色谱法测定五味子藤茎中五味子醇甲含量的色谱条件，分离度好，无干扰。[1]YANGBY，GUOJT，LIZY，etal.NewthymoquinolglycosidesandneuroprotectivedibenzocyclooctanelignansfromtherattanstemsofSchisandrachinensis[J].ChemBiopers，2016，13（9）：1118-1140.

[2]Bing-YouYang，Zhang-LinChen，YanLiu，etal.NewlignanfromtherattanstemsofSchisandrachinensis[J].NaturalProductresearch，2018，14（2）：1331-1338.

[3]杨炳友，陈张林，刘艳，等.五味子藤茎化学组分的拆分与分析[J].中成药，2017，39（11）：2334-2340.

[4]杨炳友，郑桂雪，郭江涛，等.五味子藤茎的化学成分研究[J].中医药信息?2016，33（04），7-10.

[5]李艳姿，王梓，马志娜，等.五味子藤茎提取物对高脂饮食诱导肥胖小鼠的影响[J].中国药学杂志?2018，53（07），518-525.

[6]刘俊霞，窦凤鸣，王英平，等.五味子藤茎中木脂素类化合物的杀虫活性成分研究[J].天然产物研究与开发?2017，29（07），1210-1217.

[7]胡彦武，刘凯，闫梦彤，等.五味子藤茎提取物抗大鼠肝纤维化作用及机制探讨[J].中国实验方剂学杂志?2016，22（17），122-125.

[8]丁传波，刘群，董岭，等.五味子藤茎中木脂素和多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用[J].华西药学杂志2014，2（10），648-650.

[9]李斌李，李元，孟宪军，等.北五昧子藤茎三萜抗氧化活性研究[J].2012（03），121-123.

项目来源：国家自然科学基金（81473325）

作者简介：李足意，男，湖南浏阳人，主管中药师，中药资源与开发、中药质量控制。

杨炳友（通讯作者），男，教授，博士生导师，从事中药及复方药效物质基础研究。