制作脂肪组织冷冻切片方法的改良

潘超王灿铭

（浙江省肿瘤医院病理科浙江杭州310022）

中图分类号】R3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）30-0370-01

冷冻切片是借助低温冷冻将手术切除标本的组织块快速冷冻达到一定硬度进行切片的一种方法。术中冷冻切片质量的好坏是诊断正确与否的重要因素，在冷冻制片的过程中，很多因素影响切片质量，这就要求病理技术人员对制片的各个环节和不同组织的特性有充分的了解和掌握。脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成，聚集成团的脂肪细胞由薄层的疏松结缔组织分隔成小叶，可分为黄（白）色脂肪组织和棕色脂肪组织[1]。因脂肪组织的特殊性，冷冻制片较其他组织困难，这一难题也一直困扰着许多病理技术人员。笔者在实际工作中，摸索出一种脂肪组织的冷冻切片方法，现介绍如下：

1.材料与方法

1.1材料选取本院手术送检的富含脂肪标本（脂肪瘤，富含脂肪的乳腺标本等）。

1.2设备英国产ThermoFSE型冷冻切片机，ThermoMX35一次性刀片，OCT包埋剂。

1.3试剂甲醇固定液、Gill改良苏木素染色液、醇溶性伊红、梯度酒精和二甲苯等。

1.4方法①冷冻切片机开启速冻功能，冻头温度调整至—450C，切片厚度调整至30μm；②取材后的标本经OCT包埋，置于速冻台上，并用冻锤轻压，经冻锤轻压后的脂肪组织表面平整；③将组织块置于冷冻头上进行粗修，冷冻脂肪组织至黄白色（如图1）进行切片，此时切出的脂肪切片较为平整（图2），从常温下取清洁的载玻片粘贴该组织片；④入甲醇固定液1min，Gill改良苏木素染色液2min，水洗返蓝后伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

图2

2.结果

脂肪组织结构完整清晰，无皱褶，厚薄均匀，着色鲜艳，对比度好（图3）。

3.讨论

术中冷冻切片快速诊断是病理科重要工作之一，高质量的冷冻切片是病理医师快速、准确诊断的基础。脂肪组织主要由脂肪细胞构成，只有少许的结缔组织，因而不像其他组织能迅速冷冻到一定的硬度进行切片。一般组织在—200C左右能切出较好的片子，而脂肪组织只能堆积成泥状，根本不能满足镜检要求[2]。病理医师在取材时一般尽量剔除多余的脂肪，而遇到脂肪瘤、保乳手术的切缘等是病理技术人员的一大挑战。在常规石蜡制片中，关于脂肪组织制片多有报道[1，3-7]，而关于脂肪组织的冷冻切片报道很少，这可能跟脂肪组织冷冻切片制作困难有关；有学者采用厚切片加挤压的方法来解决此问题[8]，但是组织结构不完整，细胞重叠较多，镜下结构并不清晰。本实验将采用冻锤轻压脂肪组织，加快冷冻速度，后在冻头上冷冻至—45℃，使脂肪组织达到较为理想的冷冻切片硬度；同时调整切片厚度至30μm，也在一定程度上增加了组织的支撑度，切片较为平整，完整。通过此方法制作的脂肪组织冷冻切片，颜色鲜艳，组织结构完整清晰，厚薄均匀，无细胞重叠现象，对比度好，利于术中快速、准确的诊断。

总之，制作高质量的冷冻切片，需要病理技术人员对制片的各个环节和不同组织的特性有充分的认识和掌握，在日常的工作中不断的摸索、学习和总结，为病理医师的准确诊断提供可靠的科学依据。

参考文献

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