全自动毛细管电泳技术在筛查地中海贫血中的临床应用

钟伟明郭静梁景欣黄善忠李燕吴汉锋

摘要：目的：探讨在进行地中海贫血（地贫）筛查中全自动毛细管电泳的应用价值。方法：选取2012年1月~2014年1月间接受地贫筛查的个体作为试验研究样本，梳理分析病例资料，挑选出符合试验要求的3000例纳入试验序列，所有受试个体均接受全自动毛细管电泳系统分析筛查，并与基因分析结果比较，对比灵敏度、特异度和准确度三项指标方面的组间差异性。结果：全自动毛细管电泳系统检出异常818例，毛细管电泳检出β地贫表型阳性、HbCS、HbH病、α地贫表型阳性的灵敏度和准确度分别为99.78%、92.79%、99.87%、81.89%和98.27%、97.88%、97.95%、94.96；而两种检测方法的阳性检出率方面，五项观察指标组间差异均显著，CE检测结果明显差于基因分析结果（p<0.05）。结论：在地贫临床筛查中，全自动毛细管电泳具有一定的临床应用价值，在检测的灵敏度、特异度和准确度方面效果明显，且能够有效筛查出HbH、HbCS。

关键词：地中海贫血；全自动毛细管电泳；基因诊断

Abstract：objective：toexploretheapplicationvalueofautomaticcapillaryelectrophoresisinthescreeningofMediterraneananemia（groundpoverty）.Methods：fromJanuary2012toJanuary2014betweenacceptingpoorscreeningoftheinpidualastheexperimentalstudyonthesample，cardinganalysisofcasedata，selectedtomeettherequirementsoftest3000casesincludedinthetestsequence，allsubjectsinpidualsacceptautomaticcapillaryelectrophoresissystemanalysis，screening，andcomparedwiththegeneticanalysis，contrastsensitivityandaccuracyofthreeindicators，specificdegreesdifferencesbetweengroups.Results：theautomaticcapillaryelectrophoresissystemanomalydetectionof818casesofcapillaryelectrophoresisdetectionbetatoleanphenotype，HbCS，HbHdisease，alphatopoorsensitivityandaccuracyofthephenotypicpositiverespectively99.78%，92.79%，99.87%，92.79%and99.87%，97.88%，97.95%，94.96；Intermsofpositivedetectionrateofthetwodetectionmethods，thedifferencesbetweenthefiveobservationindexesweresignificant，andtheCEtestresultsweresignificantlyworsethantheresultsofthegeneanalysis（p<0.05）.Conclusions：inclinicalscreeningtolean，automaticcapillaryelectrophoresishascertainclinicalapplicationvalue，intermsofdetectionsensitivity，specificdegreesandaccuracyeffectisobvious，andcaneffectivescreeningoutHbH，HbCS.

[Keywords]thalassaemia；Automaticcapillaryelectrophoresis；Geneticdiagnosis

临床上对异常血红蛋白的识别常采用电泳分析技术，随着该技术在临床实践中逐步发展和完善，其在临床诊断中的应用范围愈加宽泛，目前对于临床罕见的地中海贫血病症的筛查也将电泳分析技术应用其中，经过临床实践的论证，该项技术也逐渐在地中海贫血的筛查中得到了推广应用[1]。本次研究选取地贫高发地区的3000例个体建立试验模型，将基因诊断结果作为参考金标，分析全自动毛细管电泳系统（capillaryelectrophoresis，CE）在临床诊断地贫病症时的应用价值，以期为后续临床实践提供指导建议。

1材料与方法

1.1对象与标本

受检对象年龄2月～47岁，其中男1194例，女1806例，全部为2012年1月～2014年7月在本院住院或门诊就诊患者共3000例，进行毛细管血红蛋白电泳、地中海贫血基因诊断。

1.2仪器和试剂

（1）血红蛋白分析系统：法国Sebia公司提供2907全自动毛细管血红蛋白电泳仪及配套试剂、校准品、质控品、缓冲液、清洗液、溶血素；（2）地贫基因分析：试剂由深圳亚能生物技术有限公司提供地贫基因诊断试剂盒[2]。

1.3方法

1.3.1血红蛋白分析

按2907全自动毛细管血红蛋白电泳仪的要求定标、质控后，将EDTA-K2抗凝静脉血混匀后直接上机，完成检测。

1.3.2地贫基因检测

采用单管多重PCR（gap-PCR）法检测3种缺失型α地贫基因。采用反向点杂交（RDB）RDB/PCR法检测3种非缺失型α地贫基因及17种突变类型β-地贫基因。

1.3.3评估内容

以基因诊断作为参考方法，评估血红蛋白分析在特定阈值下与地中海贫血诊断的符合性，分析血红蛋白含量变化与突变类型的相关性，并对比检测方法的在检测中的灵敏度、特异度、准确度。

1.4判断标准[3]

HbA2水平在2.5%～3.5%范围之内，同时未显示出有异常血红蛋白带，则视为正常，即受检个体为非地贫患者。HbA2水平若未超过2.5%，则可临床确诊为α地贫血表型阳性；若HbA2水平高于3.5%或者HbF水平高于2.0%，同时检测出了异常血红蛋白，则可临床确诊为β地贫血表型阳性。若受检个体均表现出HbH、HbCS，则确诊为HbH病；若仅单独呈现出HbCS区带，则确诊为HbCS。

2结果

2.1基因检测及CE检测结果

基因检测结果显示，有848例为β地贫表型阳性，HbH病77例，a地贫表型阳性1043例；基因检测结果正常为843例。而CE检测结果为β地贫表型阳性分别818例，a地贫表型阳性883例，无异常病例为833例。五项观察指标组间差异均显著，CE检测结果明显差于基因分析结果（p<0.05）。见表1。

3讨论

临床上根据人体氨基酸链的受累状态，对地贫的种类进行划分，将因α链受累而致病的称为α地贫，将因β链受累而致病的称为β地贫。该种病症在临床上属于罕见病症，其发病情况具有显著的区域性，我国的南方地区是该病的高发区，例如广西，有资料显示，当地人的基因携带率高达20%，给我国公共卫生事业带来了严峻挑战，严重影响了区域人口素质[4]。电泳筛查方法的基本原理在于通过识别Hb所携带电荷的不同，区分出异常的Hb并进行分离，随着该项技术在临床实践中的不断应用，目前其在地贫的筛查中也发挥着越来越重要的作用[5]。

本次试验结果表明，全自动毛细管电泳系统检出异常818例，毛细管电泳检出β地贫表型阳性、HbCS、HbH病、α地贫表型阳性的灵敏度和准确度分别为99.78%、92.79%、99.87%、81.89%和98.27%、97.88%、97.95%、94.96；而两种检测方法的阳性检出率方面，五项观察指标组间差异均显著，CE检测结果明显差于基因分析结果（p<0.05）。研究结果指示，全自动毛细管电泳系统在地贫的筛查中尽管较基因检测技术具有明显的缺陷，但其在临床筛查中具有一定的应用价值，这与相关领域的专家得出的结论较为一致。CE检测方法在临床应用中也有着明显的优势，在样本的选取上，仅需要微量受检样品即可准确分辨出异常情况，其定量更准确，操作便捷。

综上可知，在地贫临床筛查中，全自动毛细管电泳具有一定的临床应用价值，在检测的灵敏度、特异度和准确度方面效果明显，且能够有效筛查出HbH、HbCS，具有较好的临床应用前景。

参考文献：

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基金：广西贵港市科学研究与技术开发项目（贵科攻1402017）