病毒检测 ,我应该相信谁 ?

梁会军

家住上海的李女士患有乙肝很多年，在去年10月份的时候，她在5天的时间里先后去两家医院接受了三次化验，但是每次化验得到的结果都是不同的，第一次检测显示李女士的肝功能指标全部正常，第二次检查结果为病毒维持在高位，第三次检查显示为大三阳，但是有好转的迹象。这不禁令李女士疑惑，到底我该相信哪个病毒检测的结果呢？

1. 病毒检测有哪些方法？

1.1核酸检测。

在临床上，核酸检测在病毒的检测、诊断与治疗等方面发挥着十分重要的作用，主要可以分成定性检测与定量检测。

1.1.1定性检测

第一，原位杂交检测。使用酶或者是发光底物当作标记探针，利用原位杂交可以直接检测出样本里面的病毒核酸，因为此种方法中缺少扩增PCR的环节，因而它的敏感性比PCR检测要低，应用的频率不高。

第二，PCR检测。检测的原理是在高温状态下DNA会发生变性解链，当温度恢复到正常状态下又可以恢复成双链。该技术可以放大和扩增制定的DNA片段，它的应用优势是能够显著增多微量的DNA，特异性比较强，具有较高的灵敏度，使用起来比较简单，而且准确性有保障。

　　第三， RT-PCR检测。此种方法是把病毒的RNA逆转录形成DNA，然后采取PCR，和前面提到的PCR比较来看，多了一个逆转录的环节，此种检测手段主要是用来检测RNA病毒，此外还可以在转录水平或基因表达等领域发挥效用。

　　1.1.2定量检测

第一，bDNA。可以不借助PCR，也不需要对RNA进行提纯和反转录，只需要选择适宜的裂解液来裂解样本，在经过探针杂交和信号放大自后便能够获得定量的结果。灵敏度比较高，而且检测的范围比较大，可以保证定量的准确性。此种检测方法不仅可以用于检测病毒核酸，还可以检测出宿主细胞和病毒产生的基因表达的实际水平，应用的前景比较广阔。

第二，NASBA。它的基础是PCR技术，此种技术的应用优势主要包括较高的灵敏度、良好的特异性、操作便捷简单，而且不容易受到污染，在细菌、病毒、寄生虫以及霉菌的检测中得到了广泛的应用。

第三，TMA。这是一种借助RNA的聚合酶与逆转录酶在42摄氏度的环境下事项DNA 与RNA扩增的系统，它的原理几乎和NASBA一致，在T7RNA聚合酶与MMLV逆转录酶的作用下扩增核酸。检测的方法比较简单，适宜高通量筛的选，可以在病毒检测中有效应用，快速得出检测的结果。

第四，LCR检测。将其与原位杂交检测结合在一起，它的扩增效率和PCR相同，但是此种技术信噪比比较高，而且具有较强的敏感性，不仅可以扩增，而且还可以检测出DNA的突变，应用前景良好。

　　1.2蛋白检测

1.2.1免疫印迹

主要受抗原和抗体的特异性影响，此种检测手段是将固象免疫测定与凝胶电泳当作基础研发的检测技术，不仅具有较高的分辨率，而且检测的特异性与灵敏性都比较高，在检测蛋白质的表达和分布极易蛋白质的特性中发挥着十分重要的作用。

1.2.2免疫荧光

在标记抗原或抗体时，使用不会影响抗原和抗体活性的荧光色素，待荧光色素和对应的抗原或抗体结合以后，可以在显微镜下观察到特异性的荧光反应，此种检测方法的特异性良好，敏感度比较高，而且反应的速度也比较快，但是对检测人员的专业水平具有非常高的要求。

专家指出，导致病毒检测结果不同的原因与检测期间操作失误、试剂的质量不达标或敏感性不足等有关，为了保证病毒检测结果的可靠性，应充分参考以下内容：

2. 提升病毒检测可信度，需注意以下几点

（1）临床上基因诊断的标本有分泌物、骨髓、血清、血浆、痰液和尿液等等。最好是选择一次性的密封采样容器，比方说真空的采血管。如果是一次性的塑料容器，在使用期间不需要采取预先处理。如果采取非密闭性的采样容器时，比方说针对分泌物和尿液的采样，需要留意规避采样工作者皮屑的污染，在采样时，有关人员需要佩戴一次性的手套。如果是可以重复使用的玻璃容器需要采取高压处理，这是因为玻璃容器中可能会残存RNA酶，高温可以起到灭菌的作用。在250摄氏度的温度下烘烤四个小时能够让RNA酶失去活性。

（2）全血标本与骨髓标本在病毒检测期间需采取抗凝处理。一般来说，常用的抗凝剂主要有橼酸钠以及EDTA，但是如果EDTA的浓度过高，会抑制基因的扩增。绝对不可以选择肝素当作抗凝剂，这是由于肝素会抑制Taq酶，在后续的核酸提取环节中很难将肝素去除。采集后的血标本最好是采取抗凝处理，尽量在3个小时内对血浆进行分离，以免RNA出现发生降解，如果不采取抗凝处理，在取样后需要在1个小时之内实现血清的分离。

第三，实验操作。需要按照科学的方法规范化地展开各项实验操作。检测人员在上岗前需接受岗前培训，待通过考核后才能够上岗。培训的内容包括临床检测的理论知识、各种检测的手段、仪器与设备的正确使用、试剂的调配与使用等等，掌握质量控制与抗干扰的方法，懂得仪器检验和维护的措施，确保病毒检测的效率与质量。每一名检验人员需要熟记判定的标准，将误差降到最低。有时为了保证检测结果的准确性，还需要展开多次实验，确保结果的科学性和客观性。