HPLC法测定致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量

1 石有干 2 文连香

2融水苗族自治县人民医院 545300

[摘要]目的：推敲致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚等成分使用HPLC法测定的效果。方法：抽样调查致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量，并测定计算线性关系、精密试验、稳定性试验以及样品含量等。结果：致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚等的含量经HPLC法测定的结果均相差不大。结论：HPLC法测定致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量的精确度高。

关键词：HPLC法；致康胶囊；大黄；含量

致康胶囊^[1]以黄连、三七、阿胶、白芨、海螵蛸、龙血竭、珍珠、大黄、冰片、甘草、茜草、龙骨煅、白芷以及醋没药等中药为主要成分，具备祛腐生肌、清热止血等的功能，可有利于修复组织与创面愈合，降低患者的疼痛感。HPLC法^[2]的全称是高效液相色谱法，属于分离分析操作中最重要的一项技术，在药品检验中的应用较为广泛，成为检验药品质量的关键技术。有研究^[3]指出：大黄中存在的活性成分主要是大黄酸、大黄素和大黄酚，严重影响药品的质量。

1仪器、药物与检测方法

1.1检测仪器 医院所使用的高效液相色谱仪型号是Aglient-1200，是由北京京科瑞达科技有限公司提供，内含二极管阵列检测器，以用于药物成份的检测。大黄酸、大黄素和大黄酚等的对照品是由中国药品生物制品检定所提供，水使用超纯水，色谱纯使用乙腈，使用的剩余试剂均是分析纯。

1.2药物 本次检测所使用的致康胶囊（国药准字：Z20025043，规格是0.3g*24s），是由西安千禾药业有限责任公司生产提供的。

1.3方法

1.3.1色谱条件 选用安捷伦Eclipse-XDB-C18柱，粒径为5um，规格是150mm×4.6mm，使用冰醋酸、水与乙腈的混合液，按照1:40:60的比例进行混合，柱温保持35℃，检测波长是437nm，进样量是10uL，流速控制在1.0mL·min^-1。在上述条件的基础上检测药品成分，药品分离良好，溶液检测结果为阴性，且没有受到干扰。

1.3.2制备对照液 严格按照规定要求进行大黄酸、大黄素和大黄酚的制备，并将上述药品放置在减压干燥器之中，时间是12h，其中混入甲醇，以获取大黄酸、大黄素和大黄酚，分别是10ug·mL^-1、10ug·mL^-1、20ug·mL^-1。

1.3.3制备试品液 选择致康胶囊，选0.4g的样品重量进行研细，进行精密称重，并将其放置在索氏提取器里，添入适量甲醇，并进行加热，待溶液无色后停止加热。后将甲醇夜保存在量瓶中，并添加甲醇至50mL，混合均匀。取10mL溶液，并进行加热蒸馏，添入30mL的盐酸溶液，浓度是1mol·L^-1，最后添入20mL的氯仿，进行加热回流处理，时间控制在1h左右，后进行冷却，以将氯仿层分离，再将其摇匀，持续3次提取，10mL/次，以制作氯仿液，加热蒸发近干。保存在量瓶后进行稀释，

1.3.4制备阴性对照液 严格按照致康胶囊的处方比例称取除了大黄以外的其他成分重量，并进行样品制备（排除大黄成分），并按照试品液操作进行操作。

1.3.5线性关系考察操作 分别精密吸取1uL、5uL、10uL、15uL与20uL的对照液，放进液相色谱仪之中，并进行峰面积测定，X为进样量，ug，Y为吸收峰面积，计算线性回归。

2结果

2.1线性关系 通过测定与计算可知大黄酸、大黄素和大黄酚的回归方程分别是

Y=1122.3X-1.9514（r=0.9996）、Y=1305.6X-0.2783（r=1.0000）、Y=1457.2X-1.0651（r=0.9998）。大黄酸、大黄素和大黄酚线性关系保持良好状态的范围见表一：

表一 大黄酸、大黄素和大黄酚的范围

成分	范围ug
大黄酸	0.01113—0.2135
大黄素	0.01073—0.2055
大黄酚	0.01967—0.3855

2.2精密试验 对照液进行精密吸取，样品量为10uL，需连续5次，进行峰面积的测定与计算。大黄酸、大黄素和大黄酚的RSD分别是0.72%、1.01%与0.46%。

2.3稳定性试验 试品液精密吸取10uL，并分别选择在0h、2h、4h、6h与8h进行进样，以进行峰面积的测定。大黄酸、大黄素和大黄酚的RSD分别是1.15%、1.16%与0.92%，因此，样品液的时间只要不超过8h状态均属于稳定。

2.4样品量检测 分别针对5批致康胶囊样品进行精密取样，并严格按照规定要求进行制备，并进行检测，检测结果见表二：

表二 大黄酸、大黄素和大黄酚的测定结果 （mg·g^-1）

编号	大黄酸	大黄素	大黄酚
1	0.168	0.437	0.833
2	0.198	0.452	0.962
3	0.184	0.432	0.855
4	0.188	0.445	0.846
5	0.195	0.448	0.842

3讨论

HPLC法在致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚等成分测量中的应用，能够有效保证测量结果的准确性与可靠性。而HPLC法测定中使用乙腈，能够有利于高分子物质的析出^[4]，以避免液相柱被高分子物质而堵塞，从而有效避免干扰因素的存在，为药品的用药安全提供保证。

在实际操作过程中，由于中药成分极为复杂，因而检测难度较高，所使用的常规检测所得出的结果的准确度不高。而HPLC法的应用能够有效解决上述问题。致康胶囊中所含的大黄酸、大黄素和大黄酚等成分的含量均能够得到准确测定，能够有效保证致康胶囊的用药安全性与药物质量^[5]。

综上所述，HPLC法在致康胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚等成分测定中的应用，具备操作简便、检测结果准确等优势，能够有效保证药物的质量，保障患者的用药治疗效果。

参考文献：

[1]沈欣,赵宗平,李德凤,宗桂珍,何伟. 致康胶囊对大鼠应激性胃溃疡的药效学研究[J]. 中国中医基础医学杂志,2014,20(02):183-184+189.

[2]程冲,祝旭龙,韩炜,梁导艳,马刚,张恩,李建辉,侯东祥. 致康胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响[J]. 现代肿瘤医学,2018,26(08):1187-1190.

[3]白俞. UV法及HPLC法测定重庆地区金银花中绿原酸和木犀草苷含量比较研究[D].西南大学,2013.

[4]汤彩云,王涛,屠洁,刘冠卉,黎鹏,赵静. 比色法与HPLC法对比测定桑叶茶中γ-氨基丁酸的含量[J]. 食品科学,2018,39(24):256-260.

[5]张洪秀. 高效液相色谱法在药品检验中的应用效果评价[J]. 化工管理,2016(03):210.