血小板分布宽度对电阻抗法计数血小板的影响

李俊良 1 黄艳蓉 2

摘要：目的：对比分析血小板分布宽度（PDW）对血细胞分析仪电阻抗法计算血小板（PLT）的影响及影响程度。方法：在我院LIS系统中查找统计血液分析仪中符合红细胞平均体积（MCV）在80-94fl，红细胞分布宽度（RDW）在11.5%-14.5%的EDTA-K抗凝血液住院标本共计309份。用血小板显微镜手工计数方法作为金标准。同时用电阻抗法检测血小板数量，按照血液分析仪上的结果将查找的标本分为：8.8fl0.05）。而当PDW≥17%时，血细胞分析仪电阻抗法与显微镜手工计数血小板有显著性差异（P<0.05）。

关键词：血小板体积分布宽度；电阻抗法；血液分析仪；

前言

目前临床广泛使用的血液分析仪能快速进行血细胞计数、分类、以及提供相关参数，但是血液分析仪对特殊标本难以分析，所以需要我们及时发现并解决问题^[1]。其中血小板因易粘附、聚集、激活和体积形态不一，加上血细胞分析仪原理的限制等众多影响因素决定了血小板准确计数尤其困难^[2]。电阻抗法是临床血液分析的常用方法，它对正常标本能够准确计数PLT，但是对于一些异常血液标本则不能准确计数PLT。究其原因，电阻抗法因为单纯依靠所检测的细胞的大小来区别红细胞，白细胞和血小板，所以血小板体积对血小板的影响就变得十分重要，为了研究这种关系的影响，选择了不受小红细胞（红细胞白细胞碎片）影响的血液标本进行分组对比分析，进行了如下研究。

1实验方法

1.1 仪器校准与质控

校准：迈瑞5100每半年校准一次，其中于1月4日调换宝石孔时进行了校准。将EDTA-2K抗凝的正常人全血样本8mL，等分成4份，用标准血液细胞分析仪精确地测量WBC、RBC、HGB、MCV和PLT的平均值、标准差和变异系数。统计结果作为该次正常全血样本的定值。用1管校准品，连续检测11次，为了防止污染第一次结果不用，将结果记录，计算WBC、RBC、HGB、MCV和PLT的平均值、标准差和变异系数。用上述检测校准物的均值与定值比较，以判断是否需要校准仪器。

1.2 试剂准备

(1)血小板稀释液（草酸铵）：溶解1.0g草酸铵及0.012g EDTA·Na2，溶解后加入蒸馏水到100ml，拌匀。

(2)瑞氏染液配制（瑞氏染料1g，甲醇500ml）：在配制前预先把瑞氏染料放在37摄度的恒温箱24h，配制时取少量瑞氏染料于乳钵中仔细研磨，加一些甲醇继续研磨，使得染料在容器内显得有光泽且没有沉淀或者颗粒出现，研磨一段时间后加入大量甲醇，放置一段时间，把容器内上部分液体倒入干净清洁的用完的甲醇瓶子内。重复多次直到染料或甲醇用完，封存好染液放在干燥光线暗的地方，放置三个月启用。

1.3 制作血涂片与染色观察

（1）制备血涂片：取血液样本一滴，在载玻片一端2-3cm或1/3处，取另一张边缘光滑的推片，放在血滴前缓慢的后移。接触血滴后停留直至血滴沿着推片散开到载玻片边缘1-3mm时，将推片与载玻片保持适宜的角度，向前以适宜的速度平稳匀速推动推片，至载玻片底部＞1cm处，载玻片上留下头体尾分明的厚薄适宜的血膜。

（2）瑞氏染色：用蜡笔在血膜的一侧写上对应标记，待血涂片自然干燥，滴5-6滴（视血膜厚薄而定）瑞氏染液铺满血涂片，大约0.5min（视温度和滴加的染液可适当延长或缩短时间）后。滴加多于瑞氏染液体积的磷酸缓冲液，用吸耳球吹使染液与缓冲液混合均匀，约染5分钟（可视情况延长、缩短时间）。轻轻晃动玻片，用纯水从玻片的一边滴加充满整张玻片后迅速倒掉染液，冲洗干净血涂片后置于显微镜下。观察血涂片上血小板的形态与体积，对比红细胞的数量估计血小板的数量级。

2 结果

当MPV增大（MPV>12.8fl）PDW<17%或PDW≥17%时，运用电阻抗法（PLT-1），手工计数法进行PLT计数，结果见表2。

表2 MPV增大标本按PDW分组后组内两种方法PLT结果 ×１０^９／Ｌ， x ± ｓ

组别 例数 PLT-1 手工计数法

PDW<17% 67 262.30±87.14 218.52±71.46 PDW≥17% 38 269.12±108.63※ 251.32±102.64※

与PLT-1结果比较，※P<0.05。

3 讨论

血小板手工计数时，应注意保证血小板稀释液的清洁，配成后过滤，为了防止微粒和细菌的污染，试管和移液管也保证清洁、干净。血液加入稀释液内充分混匀，滴入牛鲍计数板计数池后保证静置10-15min。实验室温度和湿度适宜。计数时光线适中，注意区别有折光性的血小板和杂质、灰层。附着在细胞周围的血小板也应该计入，避免漏数。

但是对于大批量的无法识别的血小板出现时，仪器也无能为力，这时手工法必然优于仪器电阻抗法。两种方法各有利弊，所以选择合适的方法尤为重要，仪器电阻抗法成本低、计数快，可以作为常规计数和筛查。手工法可以在仪器电阻抗法无法准确计数的时候作为复查方法。如同红系参数大多正常，单独红细胞体积分布宽度异常时，可以考虑混合贫血的可能，所以任何一个已经在临床被承认的实验参数结果有应该得到重视。

结 论

在MCV在80fl-94fl且RDW小于等于14.5%时，PDW＜17%时血小板仪器电阻抗法计数不受血小板平均体积的影响。PDW≥17%时需考虑对血液分析仪血小板计数结果进行复查。

参考文献

[1] 李静静,邢辉,胡丽华.红细胞分布宽度对电阻抗法血小板计数的影响[J].临床血液学杂志(输血与检验),2016,29(05):788-790.

[2] 张伟红，陈斌，蔡梦珊，等.Sysmex XE-5000血液分析仪血小板准确计数的相关分析[J].检验医学，2014,29（7）：741-744