胶体金标法与酶联免疫法吸附法检测乙型肝炎五项的结果对比

王辉

【摘要】　目的对胶体金标检测(GICA)法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测检测乙肝病毒五项标志物的敏感性、特异性和阳性检出率对比。方法　采用两种方法检测分别对536例临床血清标本进行HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAg、HBsAb五项血清标志物进行检测，并将HBsAg、HBcAb2份质控血清作不同倍数的稀释，用两种方法检测。结果：TRFIA法检测的敏感性、特异性均高于ELISA法检测。结论 GICA法操作简便、快速，检测的特异度较好，但其灵敏度有限；乙肝病毒五项血清学标志物ELISA法检测更适合于临床诊治的应用，临床乙肝早期诊断和疗效的观察等方面，具有一定的临床意义。

【关键词】乙肝病毒、胶体金标法、酶联免疫吸附法、检测检测

　　我国是乙型肝炎流行地区，病毒(HBV)携带者约占总人口的10%左右。中华医学会肝病学分会和中华医学会感染学分会，中国肝炎防治基金会联合发布我国首部《慢性乙型肝炎防治指南》，作为诊治乙肝规范性的行动指南。时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是近年发展起来的无环境污染的高灵敏度免疫标记定量检测技术，定量检测可以了解人体对乙肝的免疫能力；临床上用量的变化估计乙肝的转归和预后，判断乙肝病毒复制的活跃程度和持续时间。我们选择TRFIA法和ELISA法，两种自动化免疫分析系统分别对536例临床血清标本进行HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAg、HBsAb五项血清标志物进行检测，并将HB-sAg、HBcAb2份质控血清作不同倍数的稀释，用两种方法检测，报告如下。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本　来自2018-01~2019-04随机选择我中心体检人员以及门诊患者血清标本536例，其中男344人，女192人，年龄21~58岁，平均年龄36.2岁，清晨空腹采集血样。

　　1.2　试剂与仪器　上海新波生物技术有限公司生产的HB-sAg，抗-HBs，HBeAg，抗-HBe和抗-HBc定量检测试剂盒；北京万泰有限公司生产的ELISA法定性试剂盒；卫生部临检中心提供的乙肝病毒血清学标志物质控品。上海新波生物技术有限公司的时间分辨免荧光分析仪、全自动洗板机、震荡器、电脑及报告软件；深圳雷杜生命科股份有限公司的RT-6000酶标仪、RT-3000洗板机；北京国医疗器械厂的DHW-600水浴箱。

　　1.3　检测方法　对536例乙肝病毒血清学标志物定量的TRFA法和定性的ELISA法检测，均严格按照试剂盒各自说明书和《全国临床检验操作规程》中的要求，两种方法同时分别对不同浓度的标准品和临床标本进行检测。同时用TRFIA法和ELISA法对5ng/mLHBsAg和2ng/mLHBsAbg质控血清分别作1：2、1：4、1：8、1：16稀释后检测。

　　2　结果

　　2.1　检测HBV五项标志　用TRFIA法和ELISA法对268例标本测定，两法的符合率HBsAg为94.2%、HBeAg为83.1%、HBeAb为90.8%、HBcAg为88.4%、HBsAb为72.3%。

　　2.2　HBsAg质控血清检测　ELISA法1：4稀释阳性，1：8阴性；TRFIA法1：16稀释仍阳性。HBcAb质控血清检测：ELISA法1：2稀释阳性，1：4为阴性；TRFIA1：8稀释为阳性，1：16阴性。

表1　536例标本二种方法检测结果

HbsAg HbeAg HbeAb HbcAg HbsAb

+(+/-) % +(+/-) % +(+/-) % +(+/-) % +(+/-) %

TRFIA法 190(190/346) 33.2 194(194/378) 33.9 78(78/494) 13.6 158(158/414) 27.6 278(278/294) 48.6

ELISA法 186(186/350) 32.5 178(178/394) 31.1 72(72/500) 12.6 144(144/428) 25.1 224(224/348) 39.2

　　3　讨论

　　乙型肝炎的五项标志物检测方法有许多，目前广泛用于临床的有ELISA法、金标记免疫分析技术、免疫荧光测定技术、化学发光免疫分析技术、PCR技术等。TRFIA是免疫荧光测定技术的一种方法，是以镧系金属离子(Eu

³⁺等)作为示踪物质，标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，与其螯合剂、增强液在待反应体系发生反应后，用时间分辨荧光分析仪测定最后产物中的荧光强度，根据荧光强度和相对荧光强度比值，推测反应体系中被测物的浓度，达到定量分析的目的。其特点是灵敏度高、特异性强、实验重复性好、分析速度快、标准曲线量程宽，且标记物稳定、无放射性污染、便于长期保存。按照说明书要求，HBsAg≥0.5ng/mL为阳性，在我们检测出的385例阳性样本中，最低浓度为0.53ng/mL，其中有4例低值样本ELISA法测试为阴性，提示Tr-FIA法灵敏度高于ELISA法。

　　传统的ELISA方法对乙肝五项血清标志物定性测定，只能判断其阴阳性，无法得知其真正的浓度，给临床诊断和治疗带来许多不便。虽然国内生产的五项试剂盒(法)检测灵敏度能达到0.5ng/mL，但在临界值处易漏检。卫生部临检中心评价了409家医院和207家血站实验室检测的质量控制，发现未使用室内质控血清实验室的测定总错误率竟然高达73.6%，其中弱阳性标本的测定错误率最高，达68.8%，即便使用了室内质控血清，弱阳性标本的测定错误率仍高达35.2%。ELISA法简单、方便、经济实惠；但干扰因素较多，必须严格控制实验条件，对低滴度标本产生可疑结果时则须采用双份复查、随访检测等手段来确认。TRFIA法是一种高灵敏度、特异性、重复性好的定量酶免疫测定方法，检测时间短，可进行单个测定，操作全封闭、污染少、全自动化、影响因素少，但试剂成本较高。总之，乙型肝炎的五项标志物由定性到定量，随着现代乙肝临床诊治的需要，乙肝血清学标志物定量检测的临床应用价值将显现出来。

　　参考文献：

　　[1]吴健民.临床化学自动化免疫分析[M].北京：科学出版社，2000.

　　[2]张华荣，廖莉，陈正明，等.免疫结合胶体金层析法和ELISA检测HBsAg用于口岸卫生检疫的风险评估[J].旅行医学科学，2004，10(3)：38-41.

　　[3]徐珊珊，王松云.金标法快速检测无偿献血者HBsAg漏检原因分析[J].江西医学检验，2007，25(8)：333-334.

　　[4]罗耀星，张吉凯，李建基，等.广东省2002年病毒性肝炎血清流行病学调查分析[J].中国计划免疫，2005，11(2)：89-92.

　　[5]方苓，邵晓萍，李晖，等.2006年广东省病毒性肝炎监测结果分析[J].海峡预防医学杂志，2007，13(4)：16-18.

　　[6]雷皖秋.金标试纸条联合快速检测HBsAg/TP法在无偿献血中的应用探讨[J].中国输血杂志，2006，19(6)：461-466.

　　[7]万文徽.肿瘤标志物临床应用与研究[M].2版.北京：北京大学医学出版社，2007.