高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量

倪瑞敏,王秀丽,张梅超

摘要：建立以QuECHERS技术为基础，高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量的检测方法。鸡蛋样品经过乙酸乙酯提取、QuECHERS净化后，电喷雾正离子多反应监测，内标法定量。结果表明，在0.5-100ng/mL范围内，甲硝唑的线性相关系数在0.99以上，方法检出限为0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg；在3个浓度添加水平下，甲硝唑的回收率在80.5%-98.8%，相对标准偏差在0.9%-1.9%。该方法操作简便，结果准确，适用于批量化检测鸡蛋中甲硝唑残留量。

关键词：高效液相色谱；串联质谱法；测定；甲硝唑残留量

甲硝唑是硝基咪唑衍生物，具有强大的杀菌作用，可以杀灭滴虫和厌氧微生物，因为被广泛应用于畜禽养殖中[1]。如果在养殖过程中使用不规范，甲硝唑残留进入人体会产生致癌、致突变作用，危及人体健康[2]。目前，国民食用的禽蛋种类以鸡蛋为主，鸡蛋中甲硝唑残留量的检测主要是高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法[3]。目前的检测标准前处理过程繁琐，回收率偏低，无法满足大批量检验检测任务的需求。本研究旨在建立一种以乙酸乙酯为提取溶剂，QuECHERS净化，高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量的检测方法，为大批量检测鸡蛋中的甲硝唑残留量提供科学支持。

一、材料与方法

1.仪器与设备

Qtrap 6500液相色谱质谱联用仪，美国AB SCIEX公司；氮吹仪，广州三研科技；高速冷冻离心机，凯达科学仪器有限公司

2.试剂和材料

甲硝唑、甲硝唑-D4（100mg/L，坛墨质检科技股份有限公司）；甲醇、乙腈、乙酸乙酯（色谱纯，阿拉丁）；C18、PSA（上海宸乔生物科技有限公司）。

3.实验方法

称取试样5g于50mL聚丙烯离心管中，加入250µL内标溶液，加入10mL乙酸乙酯，涡旋混合1min，6000r/min离心5min，转移上清液，残渣用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并两次提取液。取4mL上清液于50mgC18、100mgPSA、200mg无水硫酸镁的离心管中，涡旋混合1min，8000r/min离心5min。将上清液在40℃氮吹至近干，加1mL甲醇水（3+7,体积比）溶解，过0.22μm有机滤膜，待测定。

4.仪器条件

（1）液相色谱参考条件。色谱柱：C18，2.0 mm ×150 mm（id），5 μm，或相当者；流速：0.3 mL/min；柱温：35℃；进样量：5µL；流动相A 为2mmol/L乙酸铵溶液；流动相 B为甲醇。梯度洗脱程序：0-3min，90% A；3-8min，90%-10% A；8-10min，10%-90% A。

（2）质谱参考条件。电离方式：ESI+；监测模式：MRM；甲硝唑的相关质谱参数见表1。

表1多反应监测的条件

化合物	定性离子对(m/z)	定量离子对(m/z)	DP(v)	CE(v)
甲硝唑	172.0/81.7	172.0/81.7	50	35
	172.0/127.8		50	20
甲硝唑-D4	176.0/128.2	176.0/128.2	55	17

二、结果与讨论

1.方法的线性范围和检出限

在0.5-100ng/mL的检测范围下，甲硝唑的标准曲线回归方程为：y =0.28349 x -0.01394 ，相关系数r为0.99810，线性关系良好。以3倍信噪比为检出限，10倍信噪比为定量限，甲硝唑的检出限为0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg。

2.方法回收率与精密度

在空白鸡蛋样品中添加0.5、1.0、5.0μg/kg 3个水平的标准工作溶液，按照1.3.2的方法进行提取和净化，每个水平平行检测6次，结果显示甲硝唑的加标回收率为80.5%-98.8% ，RSD为0.9%-1.9% ，方法的回收率与精密度均能满足实际检测要求。试验结果见表2。

表2 鸡蛋中甲硝唑添加回收率和相对标准偏差（n=6）

目标物	添加量/ （μg/kg）	回收率/%						RSD/%
		1	2	3	4	5	6
甲 硝 唑	0.5	82.6	80.5	83.6	80.8	84.2	83.5	1.9
	1.0	90.5	92.2	91.6	92.6	90.6	91.2	0.9
	5.0	98.6	95.2	98.8	97.5	94.8	96.0	1.8

三、结论

本研究以QuECHERS技术为基础，建立了高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留的快速检测方法，内标法定量。该方法检出限为0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg，回收率为80.5%-98.8%，相对标准偏差为0.9%-1.9%。各项指标均能满足鸡蛋中甲硝唑残留量的检测要求。

参考文献：

[1]权伍英,栾燕,谷晶,等.鸡蛋中甲硝唑残留的液相色谱-串联质谱检测方法研究[J].中国卫生检验杂志,2007,17(2):231-232.

[2]胡争艳,吴平谷,王天娇,等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉、鸡蛋中氯霉素和甲硝唑残留[J].中国卫生检验杂志,2016,26(21):4.

[3]图雅,崔建平,赵宏.同位素内标-超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中氯霉素及甲硝唑[J].中国食品卫生杂志,2017(4).

【作者简介】倪瑞敏（1991.11-），女，汉族，山东省威海市人，硕士研究生学历，威海市食品药品检验检测研究院检验员，主要研究方向：食品检测。