炒决明子炮制工艺探索性研究

周顺生,陈玄纯

摘要：根据《中国药典》2020版一部炒决明子项下要求，炒决明子含大黄酚(C15H10O4)不得少于0.12%，含橙黄决明素(C17H14O7)不得少于0.080%。另中国食品药品检定研究院于2022-03-25公布的国家药品抽检探索性研究情况中，要求炒决明子中红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C分别不得少于0.32%、0.10%。以及炒决明子苷元类成分（红链霉素和决明子内酯）及其对应苷类成分（决明子苷B2、决明子苷、红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C）的峰面积比值，应在0.12~1.5范围内。为达到上述各项要求，对炒决明子的炮制工艺进行了探索性研究。利用正交实验优选出了最佳工艺方案，确定温度为135℃，炒炙时间20分钟、投料量为45kg为最佳工艺条件。

关键词：炒决明子、炮制工艺、峰面积比值

一、概述：

中国食品药品检定研究院于2022-03-25公布的国家药品抽检探索性研究情况（第九期），对发现的问题进行了介绍。各地市承检机构在国家药品抽检的探索性研究工作中基于法定标准检验，开展探索性研究，建立或参照国家药品标准以外的检验项目和检测方法，深入挖掘药品质量风险。探索性研究结果虽不用于判定药品是否合格，而是针对发现的问题，便于药品生产企业对相关药品质量风险问题采取控制措施，增强药品质量风险控制能力。

在本期公布的内容中，包含了两个研究成果，一是《决明子饮片和炒决明子饮片中红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C的含量测定方法》。在这个研究中，要求炒决明子中红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C分别不得少于0.32%、0.10%。二是《决明子饮片和炒决明子饮片的特征图谱方法》.此研究中要求炒决明子苷元类成分（红链霉素和决明子内酯）及其对应苷类成分（决明子苷B2、决明子苷、红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C）的峰面积比值，应在0.12~1.5范围内。

另外《中国药典》2020版一部炒决明子项下要求，炒决明子含大黄酚(C15H10O4)不得少于0.12%，含橙黄决明素(C17H14O7)不得少于0.080%。

决明子为豆科植物钝叶决明Cassia obtusifolia L.或决明（小决明）Cassia tora L.的干燥成熟种子。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明子为常用中药，种子入药，具有清热明目，润肠通便。用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结的功效。生决明子性寒滑利，脾胃虚寒、气虚便溏者不宜服用，但炒制后减弱了其寒性与致泻作用，并且又提高萘并吡喃酮类苷元含量，不但脾胃虚寒、气虚便溏者能用，并且保肝护肝、降血脂的效果也得到了提升。因此，炒决明子不但要使致泻类成分（蒽醌类）符合《中国药典》含量要求,保证清热明目，润肠通便效果。又要使炒决明子有保肝护肝降血脂效果（萘并吡喃酮类苷元要够量）。故在炒炙过程中需要将温度与时间控制好，才能使炒决明子充分发挥最佳的临床疗效。

二、材料与方法：

2.1实验条件：

2.1.1设备：CY-30电磁炒药机。 生产厂家：北京霍氏机械制造有限公司

2.1.2决明子：原料批号22020630 产地：广西

2.1.3仪器和试剂

仪器：岛津LC-40超高效液相色谱仪、LC-20AT高效液相色谱仪、电子分析天平220-4；

色谱柱： Shim-pack Velox C18,2.7um 2.1*100mm 、安捷伦C18柱；

对照品：上海鸿永生物科技有限公司的红链霉素-龙胆二糖苷、决明子苷B2决明子苷；中国食品药品检验研究院的大黄酚和橙黄决明素；

试剂：分析纯无水乙醇、分析纯乙酸乙酯、分析纯甲醇、稀盐酸、分析纯三氯甲烷、色谱纯乙腈、色谱纯磷酸；

2.2方法

炒决明子的炮制工艺为按清炒法炮制。其工艺流程为：原药材 净选 淘洗 干燥 炒制 筛分 中间品。

炒决明子的各成分高温条件下升华或分解成苷元与糖，因此设计从三方面摸索最佳的工艺条件，包括炒炙温度、炒炙时间、每锅投料量设置正交试验方案，以大黄酚及橙黄决明素含量、红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C含量、萘比吡喃酮类苷元与苷峰面积的比值作为评判标准，研究不同条件下炒决明子的含量和特征图谱中苷元与对应的苷峰面积比值。采用正交试验优选最佳工艺条件，对炒决明子炒制工艺进行优化。正交试验方案如下：

因素水平L9(34)

水平	因素
	A温度(℃)	B时间(min)	C投料量（kg）
试验一	1（125）	1（18）	1（40）
试验二	2（130）	2（20）	2（45）
试验三	3（135）	3（22）	3（50）
试验四	1（125）	2（20）	3（50）
试验五	2（130）	3（22）	1（40）
试验六	3（135）	1（18）	2（45）
试验七	1（125）	3（22）	2（45）
试验八	2（130）	1（18）	3（50）
试验九	3（135）	2（20）	1（40）

炒制操作流程：将炒药机加热温度设定在250℃，第一锅炒炙时待

炒药机显示温度为250℃，转速调至24r/min，投入干燥好的决明子（每锅40-50kg），炒至炒药机显示温度到125-135℃（18-22min/锅）左右，微有爆烈声，并逸出香气时，微鼓起，表面绿褐色或暗棕色，偶见焦斑，取出放凉。后续每锅炒炙时，待前锅出料完毕即加料，炒至方法与程度同前。

依上表正交试验方案，炒十锅，从第二锅算起，每锅取样检测（第一锅不取样）.

2.2.1炒决明子含量及特征图谱的检验方法

2.2.1.1炒决明子大黄酚和橙黄决明素含量检测方法

照高效液相色谱法(《中国药典》通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：C18色谱柱

流动相：乙腈为A流动相， 0.1%磷酸溶液为B流动相

检测波长：284nm 进样量：10ul

理论板数按橙黄决明素峰计算应不低于3000

梯度洗脱程序；

　　────────────────────────────────

　　时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%)

　　────────────────────────────────

　　0～15 40 60

　　15～30 40→90 60→10

　　30～40 90 10

　　────────────────────────────────

　　对照品溶液配置： 取大黄酚对照品、橙黄决明素对照品适量，精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液制成每1ml含大黄酚30μg、橙黄决明素20μg的混合溶液。

　　供试品溶液制备： 取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加稀盐酸30ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液使溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

标准：本品按干燥品计算，含大黄酚(C15H10O4)不得少于0.12%，含橙黄决明素(C17H14O7)不得少于0.080%。

2.2.1.2、炒决明子饮片的红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C的含量测定方法

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：ACQUITY UPLC CSH C18色谱柱，柱长为10cm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm）；

检测波长：280nm； 柱温：30℃； 流速：0.3ml/min； 进样量：3ul

理论板数按红链霉素-龙胆二糖苷峰计算应不低于10000。

流动相：乙腈为A流动相，0.1%磷酸溶液为B流动相，按下表中的规定进行梯度洗脱；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0～5	5→16	95→84
5～25	16	84
25～30	16→20	84→80
30～11	20→22	80→78
31～35	22→40	78→60
35～50	40→50	60→50
50～53	50→95	50→5

对照品溶液制备：取红链霉素龙胆二糖苷，决明子苷C对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含红链霉素龙胆二糖苷100μg，决明子苷C100μg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入加甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

标准：本品按干燥品计，含红链霉素龙胆二糖苷(C27H32O15)不得少于0.32%，含决明子苷C(C27H32O15)不得少于0.10%。

2.2.1.3、炒决明子饮片的特征图谱方法

色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：C18柱； 检测波长：280nm； 柱温为30℃； 流速为0.3ml/min；

进样量：参照物溶液和供试品溶液各3μl

理论板数按红链霉素-龙胆二糖苷峰计算应不低于10000。

流动相：乙腈为A流动相，0.1%磷酸溶液为B流动相，按下表中的规定进行梯度洗脱；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0～5	5→16	95→84
5～25	16	84
25～30	16→20	84→80
30～11	20→22	80→78
31～35	22→40	78→60
35～50	40→50	60→50
50～53	50→95	50→5

参照物溶液的制备 ：取红链霉素-龙胆二糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 按 74-3.决明子饮片和炒决明子饮片中红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C的含量测定的供试品溶液，即得。

测定法 供试品色谱中应呈现7个特征峰，与参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所有峰的相对保留时间在规定值的±5%之内（若相对保留时间偏离超过限度，应以决明子对照药材的相应图谱确证为准）。规定值为：0.77（峰1）、0.87（峰2）、1.00（峰3）、1.27（峰4）、1.62（峰5）、2.13（峰6）、2.21（峰7）。

比值 计算选定的苷元类成分（红链霉素和决明子内酯）及其对应苷类成分（决明子苷B2、决明子苷、红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C）的峰面积比值，应在0.12～1.5范围内。

ACQUITY UPLC CSH C18色谱柱，柱长为10cm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm

炒决明饮片对照特征图谱

9个特征峰 峰3（S）:红链霉素-龙胆二糖苷；峰1：决明子苷B2；

峰2：决明子苷；峰4：决明子苷C；峰6：红链霉素；峰7：决明内酯

不同炮制工艺条件炒决明子含量及特征图谱萘并吡喃酮类成分苷元与苷的峰面积比值数据(见下表)：

试验编号			因素			大黄酚含量（应≥0.12%）	橙黄决明素含量（应≥0.08%）	红链霉素-龙胆二糖苷含量（应≧0.34%）	决明子苷C含量（应≧0.10%）	苷元与苷峰面积比值(应为0.12-1.5)
			A温度(℃)	B时间(min)	C投料量（kg）
试验一			1（125）	1（18）	1（40）	0.20	0.16	0.82	0.28	0.067
试验二			2（130）	2（20）	2（45）	0.16	0.16	0.75	0.19	0.16
试验三			3（135）	3（22）	3（50）	0.23	0.16	0.70	0.13	0.26
试验四			1（125）	2（20）	3（50）	0.25	0.17	0.91	0.30	0.050
试验五			2（130）	3（22）	1（40）	0.26	0.17	0.84	0.23	0.11
试验六			3（135）	1（18）	2（45）	0.21	0.16	0.66	0.12	0.25
试验七			1（125）	3（22）	2（45）	0.24	0.17	0.86	0.27	0.064
试验八			2（130）	1（18）	3（50）	0.18	0.16	0.87	0.25	0.099
试验九			3（135）	2（20）	1（40）	0.24	0.18	0.75	0.17	0.18
大黄酚含量		K1	0.690	0.590	0.700
		K2	0.600	0.650	0.610
		K3	0.680	0.730	0.863
		K1	0.230	0.197	0.233
		K2	0.200	0.217	0.203
		K3	0.227	0.243	0.288
		R	0.030	0.046	0.085
主次顺序			CBA
最优组合			A1B3C3
橙黄决明素含量		K1	0.500	0.480	0.510
		K2	0.49	0.510	0.490
		K3	0.500	0.500	0.490
		K1	0.167	0.160	0.170
		K2	0.163	0.170	0.163
		K3	0.167	0.167	0.163
		R	0.004	0.010	0.007
主次顺序			BCA
最优组合			A1B2C1
红链霉素-龙胆二糖苷含量	K1		2.59	2.35	2.41
	K2		2.46	2.41	2.27
	K3		2.11	2.40	2.48
	K1		0.863	0.783	0.803
	K2		0.820	0.803	0.757
	K3		0.703	0.800	0.827
	R		0.160	0.020	0.07
主次顺序			ACB
最优组合			A2B1C2
决明子苷C含量	K1		0.850	0.650	0.680
	K2		0.670	0.876	0.580
	K3		0.420	0.630	0.68
	K1		0.283	0.217	0.227
	K2		0.223	0.292	0.193
	K3		0.140	0.210	0.227
	R		0.143	0.082	0.034
主次顺序			ABC
最优组合			A2B2B2C2
苷元与苷峰面积比值	K1		0.181	0.416	0.357
	K2		0.369	0.390	0.474
	K3		0.690	0.374	0.409
	K1		0.060	0.139	0.119
	K2		0.123	0.130	0.158
	K3		0.230	0.125	0.136
	R		0.170	0.014	0.039
主次顺序			ACB
最优组合			A3B1C2

三、分析与讨论

3.1影响各指标因素主次顺序及各因素水平最优组合：

大黄酚含量 橙黄决明素含量 红链霉素-龙胆二糖苷含量 决明子苷C含量 苷元与苷峰面积比值

主次顺序 CBA BCA ACB ABC ACB

最优组合 A1B3C3 A1B2C1 A2B1C2 A2B2C2 A3B1C2

在五个指标中，因素A排在第一的有三个 ，即温度对红链霉素-龙胆二糖苷、决明子苷C、苷元与苷峰面积比值影响较大，对大黄酚含量、橙黄决明素含量影响较次。所以不考虑大黄酚与橙黄决明素。其中A2占了两个，即对红链霉素-龙胆二糖苷、决明子苷C有主要影响，按道理应该选A2，但是在试验五与试验八中苷元与苷峰面积比值不达标，故只选A3.

B因素排在第一的有一个，第二的占两个，排在第三的有两个，以排在第二的两个指标之间选择，因为排在第三，因素影响不大。即对大黄酚含量及决明子苷C含量影响较大，但大黄酚为B3,决明子为B2,再看对橙黄决明素影响最大的也是B2，以少数服从多数原则，选B2。

C因素排在第三位的有三个，故在橙黄决明素含量、决明子苷C含量、苷元与苷峰面积比值之间选择，C2占两个，故选C2。

综合筛选，最后得出最优方案：A3B2C2,即温度为135℃，炒炙时间20分钟、投料量为45kg为最佳工艺条件。

3.2讨论：

决明子含有蒽醌类致泻类成分

，及萘并吡喃酮类苷及苷元类成分。故在高温炒炙过程中，各类成分发生变化，结合型蒽醌类转化为游离型蒽醌，降低了决明子的寒凉特性，致泻效果降低。萘并吡喃酮类苷随着炒炙时间的延长逐渐转化为苷元，保肝护肝降血脂效果增强。因此炒炙温度与时间对炒决明子的质量影响很大，进而影响临床疗效。决明子炮制工艺控制温度为135℃，炒炙时间20分钟、投料量为45kg，既能保证炒决明子清热明目，润肠通便的功效，又兼有保肝护肝降血脂效果。此探索性研究对进一步研究决明子炮制工艺奠定了一定的实践与理论基础，具有前瞻性。

参考文献

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[2]中国食品药品检定研究院 74-2.决明子饮片和炒决明子饮片的特征图谱方法【国家药品抽检探索性研究情况(第九期)】

[3]中国食品药品检定研究院 74-3.决明子饮片和炒决明子饮片中红链霉素龙胆二糖苷和决明子苷C的含量测定【国家药品抽检探索性研究情况(第九期)】

[4]方艳夕，韩路，谭志静1，朱金坤，俞浩 炒决明子的炮制工艺研究【 齐齐哈尔大学学报 第28卷第1期 2012年1月】

[5]李春晓 王月明 韦东来、贺尚文、李秋月、董虹 决明子的主要化学成分和药理作用研究进展 【 药物评价研究 第33卷第4期2010年8月-315-】

[6]刘斌，巩鸿霞，肖学凤，叶贵福决明子化学成分及药理作用研究进展 【Drug Evaluation ResearchVol.33 No.4August 2010】

[7]孔祥锋,臧恒昌 决明子化学成分及药理活性研究进展 【药学研究·Journal of Pharmaceutical Research 2013 Vol.32 ,No.11】

[8]梁朔,米宝丽,张振秋,刘玉强,鲍佳妮 炒决明子最佳炮制工艺研究【辽宁中医杂志2012年第39卷第12期】

周顺生（1971.8），男汉族湖南平江人，学士，执业药师，从事中药饮片炮制工艺研究

陈玄纯（1994.8），女汉族湖南益阳人，学士，执业药师，从事中药饮片检验工作