PCR法与直接涂片镜检法检查结核杆菌的比较

张丽琼

摘要：目的：对结核杆菌采用PCR法和直接涂片镜检法进行检查，分析两种方法在诊断上的效果。方法：选择2022年3月-2023年3月本院收治的结核病患者50例患者作为主要分析对象，对所有的患者分别采用PCR法和直接涂片镜检法进行检查，统计检查结果。结果：采用PCR法对患者进行检查，阳性检出率为37例（74.0%）；采用直接涂片镜检法进行检查，阳性检出率为17例（34.0%），前者检出率明显高于后者，存在显著差异和统计学意义（P＜0.05）。结论：在结合杆菌的检验中，采用PCR法具有良好的诊断和鉴别效果，有较高的应用价值。

关键词：结核杆菌；PCR法、直接涂片镜检法

引言：结核杆菌极是导致结核病发生的重要因素，该病具有较高的传染性，对人类健康有着较大的威胁，在导致死亡发生的传染性疾病中排名靠前。据相关数据统计，全球人口中感染结核分支杆菌的人数约有三分之一，且每年约有1000万新发病例，且具有较多死亡人数；发展中国家发生该病的数量较大，约占95%。我国是结核病发生率较高的国家之一[1]。合理地使用地使用药物对结核病进行控制是重要的方法之一，除此之外还要对尽早地进行实验室诊断，只有这样才能够对该病进行早期干预，并其提高治疗效果。对于结核病的检查中，基本方法为痰涂片直接镜检法，其也是临床实验室应用较为广泛的方法之一。就荧光定量PCR法而言，其是一种新型检查方法，属于核酸定量技术，在临床中的应用也越来越广泛[2]。为了分析两种方法的检验效果，本研究选择部分患者，分别接受两种检查方法，统计相关结果后，对以下报道进行分析。

1 资料与方法

1.1一般资料

本研究选择2022年3月-2023年3月收治的结核病患者50例作为主要分析对象，采用不同的检查方法，所有的患者中男性28例，女性22例，最低年龄18岁，最高年龄81岁，年龄平均值为（45.19±4.23）岁。

1.2方法

1.2.1PCR法

选择中山大学达安基因股份有限公司提供的PCR试剂盒和相关引物，在检验的过程中对采集的标本进行预处理，首先取患者晨起时深咳痰液，之后进行送检。选择4%NaOH（4倍体积）加入到痰液标本中，对标本进行摇晃均匀，进行液化，半小时为宜，然后进行离心处理，将上清去除，沉淀后选择1ml灭菌生理盐水并震荡均匀，对其进行两次洗涤。其次，选择2ml外周抗凝血，对其进行离心处理，使用淋巴细胞分离液将其直接分离，完成白细胞沉淀。另外，选择胸水采用EDTA抗凝，使用离心管装3ml，进行离心处理，并对上清进行去除，选择1ml灭菌生理盐水沉淀后加入。此外，去除上述三个标本的上清后，选择TB-DNA（50μl）提取液加入，并充分混匀，并对其进行恒温处理，采用100摄氏度处理10分钟。之后将温度调整为4摄氏度，并对其进行5分钟的12000rpm离心，选择PCR反应管将其加入其中，采用瞬间离心方法，选择PCR荧光扩增仪，并将反应管加入其中，之后进行10个循环的（93摄氏度两分钟预变性）、（93摄氏度45秒预变性）、（55摄氏度一分钟预变性）。之后再次进行30个循环的（93摄氏度30秒预变性）、（55摄氏度45秒预变性），完成后对相关数值进行读取。

1.2.2涂片法

首先选择痰标本，并选择少量生理盐水与之混合，之后选择塑料管将其纳入，采用高压灭菌方法，对上清进行离心去除，之后对沉淀物采用接种环挑取，将其放置在玻片上，进行涂片制作，保证薄厚均匀。其次进行胸水检查，由于其具有较大的蛋白质含量，所以不对其进行高压处理，将上清直接去除，之后按相同方法取沉淀物进行涂片制作，完成后使用镜下检查方法，观察相关结果。

1.3观察指标

对检查结果进行统计，并统计阳性和阴性例数，计算所占比例，完成检查结果的比较。

1.4 统计学处理

无论是计数资料n（%），还是计量资料（x±s）；均采用SPSS 23.0计算机软件统计和分析，数据记录后采用t和X2分别对计量资料和计数资料进行检验，分析后数据存在差异，且有统计学意义采用（P＜0.05）表示。

2 结果

2.1不同方法应用后比较检查结果

PCR法的阳性检出率明显高于涂片检查法，差异显著有统计学意义（P＜0.05）。

表1不同方法应用后比较检查结果（n/%）

检查方法	阳性	阴性	阳性率
PCR法	37	13	（74.0%）
涂片检查法	17	33	（34.0%）
X2			4.795
P值			＜0.05

2.2样本检查结果分析

对患者的血清和痰均采用上述方法进行检查。同时对具有胸腔积液患者的胸水也进行了相关检查。经检查发现，患者接受PCR检测后，血清样本的阳性率为23例（46.0%），痰标本的检出率为33例（66.0%）；13例胸水患者的阳性检出率为10例（76.92%）。所有患者接受涂片检测后，阳性检出率为17例（34.0%），胸水涂片的检出率5例（38.46%）。

3 讨论

在临床中结合杆菌感染属于常见疾病，该病具有较为复杂的临床表现。临床中对患者进行X线检查，分析临床表现和病史，观察患者体征，虽然能够发现患者的肺部疾病情况，并反映病灶部位的特点，但有部分结合病例对X线不典型，增加了鉴别难度[3]。同时临床诊断结果的正确性，受到读片者的影响，所以增加了临床误诊率。当前痰涂片是WHO推荐的结核病诊断方法，其在许多国家临床实验室中应用广泛。虽然通过痰液可检出结核杆菌，但采用传统检查方法，检出率仍然较低。本研究通过采用涂片法进行检查，发现痰涂片检出10例阳性，所检出的患者其痰液排出菌量较大。通过胸水检查发现5例阳性病例。另外采用PCR方法进行检验，具有74%的阳性检出率，与涂片检查方法相比检出率较高，存在差异和统计学意义（P＜0.05）。主要是后者具有较高的灵敏度。同时说明在诊断和鉴别结核杆菌中，PCR技术具有较高的价值。

综上所述，在结核杆菌的检测中，无论是PCR法，还是涂片法，均具有优点，因此需要根据实际情况合理地选择结核杆菌的检验，也可将两种方法联合应用，在此期间必须保证标本的合格性，从而提高结核病的早期诊断价值。

参考文献：

[1]李观华,方筱,邓蕾,陈雪礼,刘晓峰.荧光定量PCR法联合传统方法在结核杆菌检测中的应用[J].当代医学,2020,26(21):59-61.

[2]季雪兰.荧光定量PCR法与直接涂片抗酸染色法检测结核杆菌结果对比[J].国际感染病学(电子版),2019,8(02):177-178.

[3]苏萌.不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测结果的影响[J].甘肃科技,2018,34(06):79-80.

作者简介：张丽琼，女，1986年10月，甘肃临洮人，汉，研究生学历，检验科检验师，研究方向：PCR