正交实验法优化蒲公英中总黄酮的工艺提取

杜瑞 袁旭力 刀新宇 孟子昆 姚琛

摘 要：筛选干燥的蒲公英（含叶、茎、根）为原料，方法：采取正交试验研究不同的超声温度、超声时间、超声功率对总黄酮提取率的影响。利用紫外分光光度法测定蒲公英中总黄酮含量，结果：当乙醇体积分数为90%，超声时间32min，超声温度34℃，超声功率40W，为蒲公英中总黄酮提取的最佳工艺条件。蒲公英的总黄酮提取率高达1.57%。

Abstract: Dried dandelion (including leaves, stems and roots) was selected as raw materials. Methods: Orthogonal test was carried out to study the effects of ultrasonic temperature, ultrasonic time and ultrasonic power on the extraction rate of total flavonoids. Uv spectrophotometry was used to determine the content of total flavonoids in dandelion. The results showed that the optimal extraction conditions were as follows: ethanol volume fraction was 90%, ultrasonic time was 32min, ultrasonic temperature was 34℃, and ultrasonic power was 40W. The extraction rate of total flavonoids from dandelion was 1.57%.

关键词：蒲公英 正交试验 总黄酮提取率

蒲公英【1】属菊科多年草本植物，属药食同源，含有多种人体的必需氨基酸，铁（Fe）、钙（Ca）的含量高于正常水果的摄入量。别名又为婆婆丁、黄花地丁等，蒲公英主要分布于北半球，于我国的分布位于东北、华北、西北等地区。现代中草药研究表明，蒲公英具有降低【2】胆固醇、降低血糖、减少炎症等作用。蒲公英中包含的的化学成分主要含有黄酮类、香豆素类、木质素、三萜类、糖类等化学成分。

1 材料与方法

1.1仪器与设备

蒲公英：陕西咸阳；芦丁标准品（上海源叶生物科技有限公司）；亚硝酸钠（杭州龙山化工有限公司）；硝酸铝；氢氧化钠（十堰鑫思特环保科技有限公司）；乙醇（鑫泽化工）；

AK-100SD 900W超声波清洗器；UV-250紫外分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；万分之一分析天平（上海析牛仪器有限公司）。

1.2蒲公英的前处理

将采集的蒲公英洗净、干燥、粉碎，并采用国标5号筛筛选，将所得毛蒲公英粉末放入密封袋中储存待用。

1.3蒲公英中总黄酮的提取方法

精密称取10g蒲公英粉末，放入装有已知乙醇体积分数的锥形瓶内，瓶口采用PVC膜进行密封，放入参数设置好的超声波清洗器内进行提取。

1.4蒲公英中总黄酮的测定

参考文献【3】的方法配置芦丁标准曲线，采用硝酸铝-亚硝酸钠显色方法进行显色，在200~600nm波长范围内进行波谱扫描，结果表明，于508nm下出现最大吸收峰，确定508nm为蒲公英的吸收波长。

2实验结果

2.1芦丁标准曲线的绘制

精密称取2.5mg干燥且恒重的芦丁标准样品【4】，用少许质量分数为50%的乙醇搅拌溶解，后将其吸取并移入至25ml的容量瓶内并加入质量分数为50%的乙醇定容至刻度线，备用，得到浓度为0.1mg/ml的芦丁标准样品。精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml的芦丁标准液依次放入干燥且恒重的25ml的容量瓶内，加入质量分数为5%的亚硝酸钠1ml，再加入质量分数为10%的硝酸铝1ml，最后加入质量分数为4%的氢氧化钠10ml，后用50%的乙醇溶液定容至刻度线。所得标准曲线方程为y=6.344x-0.0054，R2=0.9988，相关度拟合性较好，因此该标准曲线方程可用。

通过使用可见分光光度计，我们在200~600nm的范围内对已配置好的芦丁标准液进行扫描测量，结果显示，在508nm处，芦丁标准液的吸收值最高，这是实验所需的波长。在509nm波长范围内，通过测量不同浓度的芦丁标准液的吸光度值，绘制出芦丁标准曲线，如图一所示。

2.2蒲公英总黄酮提取工艺优化

2.2.1正交实验设计优化及结果

表1正交实验因素水平表

水平	因素
	超声功率（W）	超声温度（℃）	超声时间（min）
1	40	34	28
2	60	36	30
3	80	38	32

表2正交实验结果表

编号	因素				提取率（%）
	超声功率（W）	超声温度（℃）	超声时间（min）
1	1	1	1	1.41
2	1	2	2	1.42
3	1	3	3	1.55
4	2	1	2	1.57
5	2	2	3	1.44
6	2	3	1	1.34
7	3	1	3	1.45
8	3	2	1	1.34
9	3	3	2	1.34
均值1	1.46	1.49	1.37
均值2	1.45	1.4	1.44
均值3	1.38	1.41	1.48
极差	0.08	0.09	0.11
因素主次	超声时间＞超声温度＞超声功率
优化方案	超声功率1＋超声温度1＋超声时间3

3.结论

经正交实验结果可知，最佳工艺为超声时间32min，超声温度34℃，超声功率40W。本实验为开发蒲公英中黄酮类物质提供了试验依据。为下一步进行抗氧性【5】研究提供了理论依据。

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[4]肖奇志.均匀设计法优选蒲公英总黄酮的研究[J].当代医学,2010,16(34):130-131.

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