HPLC法测定香果健消片中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量

何丽芳 唐新宗*

【摘要】目的：建立香果健消片木香烃内酯、去氢木香内酯的分析方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；以甲醇－水(65∶35)为流动相；检测波长为225nm；柱温为30℃。测定木香烃内酯、去氢木香内酯的含量。结果：木香烃内酯回归方程为：Y=1614.9X+27.408，R=0.9998，木香烃内酯进样量在0.2～3.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；去氢木香内酯回归方程为：Y=1348.5X+21.653，R =0.9999，去氢木香内酯进样量在0.2～3.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；加样回收率(n=6)分别为99.28%、99.14%。结论：本方法精密度高、准确度高，重复性好，可为作为香果健消片中木香烃内酯、去氢木香内酯检测方法。

【关键词】香果健消片；木香烃内酯；去氢木香内酯；定量分析；高效液相色谱法

Determination of costunolide and dehydrocostus-lactone in Xiangguo Jianxiao Tablets by HPLC

HE Li-fang , TANG Xin-zong*,

YunNan YunHe Pharmaceutical INC. Ge Jiu 661000, China

[ABSTRACT] OBJECTIVE To establish a quality control method for Xiangguo Jianxiao Tablets. METHODS The content of costunolide and dehydrocostuslactone were determined by HPLC method. The chromatographic column was ZORBAX Eclipse XDB-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm); Mobile phase of methanol-water (65:35); Flow rate of 1.0 mL/min; Injection volume of 10 μL; Detection wavelength of 225 nm; Column temperature of 30℃. RESULTS The regression equation of costunolide was Y=1614.9X+27.408, R=0.9998, and the linear relationship between the peak area and the sample volume of costunolide in the range of 0.2-3.0 μg was considerable; the regression equation of dehydrocostuslactone was Y=1348.5X+21.653, R=0.9999, and the linear relationship between the peak area and the sample volume of dehydrocostuslactone in the range of 0.2-3.0 μg was considerable; the recoveries (n=6) were 99.28%% and 99.14%  for costunolide and dehydrocostuslactone, respectively. CONCLUSION This method can be used to determine the content of costunolide and dehydrocostuslactone in Xiangguo Jianxiao Tablets with high specificity, precision and reproducibility.

[KEY WORDS] Xiangguo Jianxiao Tablets; costunolide; dehydrocostuslactone; HPLC method

香果健消片以草果、木香、蜘蛛香、糯米四味天然药材组方配伍而成，具有健胃消食，止泻利便的功效。临床上能快速有效治疗腹痛、腹胀、腹泻、恶心和食欲不振等功能性消化不良症状。木香为该组方制剂中重要药材，木香为菊科云木香属植物木香的干燥根，起到行气止痛、健脾消食的功效[1-2]。据文献报道，木香中有药理活性的单体成分有木香烃内酯、二氢木香烃内酯、去氢木香内酯、α-羟基去氢木香内酯、异土木香内酯、木香碱等

[3-5]。据研究表明木香具有增强胃肠蠕动、促进胃肠排空作用，利胆作用，抗炎、抗溃疡作用。木香烃内酯和去氢木香内酯是木香的主要活性成分，而且两成分药理明确，具有增强胃肠蠕动、利胆和抗炎等作用，这与中医的行气止痛、健脾消食的功能主治基本相吻合[6-9]。故以木香烃内酯和去氢木香内酯为定量检测指标，对香果健消片质量控制具有重要意义。

在香果健消片的现行质量标准《卫生部药品标准（WS3-B1585-93）》中，检测项为性状、鉴别和检查三项，其中鉴别项只用香草醛硫酸溶液进行显色鉴别，无专属性较强的定量分析方法[10]。本文采用HPLC法检测香果健消片中木香烃内酯、去氢木香内酯含量，分析不同批次香果健消片两种成分的含量，为香果健消片质量标准提升以及制定含量检测项的限度提供数据支持。

1仪器和试药

1.1仪器高效液相色谱仪（安捷伦1260型），电子天平（赛多利斯BP211D型）。

1.2试药  香果健消片（批号：200703、200802、211001、220201云南云河药业股份有限公司）；木香烃内酯（批号：11524-201107，纯度：99.9%，中国食药品检定研究院）；去氢木香内酯对照品（批号：111525-201711，纯度：99.9%，中国食药品检定研究院）；甲醇（批号：116481，色谱纯，河北百灵威超精细材料有限公司）；甲醇（批号：2021012002，分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；水为纯化水。

2方法和结果

2.1色谱条件与系统适用性试验  色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（65∶35）；柱温为30℃；检测波长为225nm；流速：1.0ml/min，进样量：10μl；理论塔板数（按木香烃内酯峰计算）：应不低于5000。

2.2 对照品溶液制备  精密称取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品各10.00mg，置100ml容量瓶中，用95%的甲醇溶液定容、摇匀，即得各含0.10mg/ml的混合液。

对照品储备液制备 精密称取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品各10.00mg，置10ml容量瓶中，用95%的甲醇溶液定容、摇匀，即得各含1.0mg/ml的混合液。

2.3 供试溶液制备取香果健消片样品20片，去糖衣后研磨成细粉，称取约2g粉末，精密加入25ml95%甲醇溶液，称定重量，加热回流30min，冷却至室温后用甲醇溶液补重，混合均匀，微孔滤膜过滤，取滤液即得。

2.4 线性关系试验  取0.10mg/ml对照品混合液，按“2.1”项下的色谱条件进样，进样量设置为2、4、6、8、10、12、14、16μl，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积。结果表明，范围在0.2～3.0μg区间内，木香烃内酯、去氢木香内酯的测得峰面积Y与其进样量X（μg）之间呈良好的线性关系，回归方程分别为：Y=1615.9X+26.408，r=0.9998；Y=1348.5X+21.653，r=0.9999。

2.5 精密度试验  取0.10mg/ml对照品混合液，按“2.1”项进样检测6次，分别计算木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD为0.09%和0.08%，表明精密度较高。

2.6 重复性试验  取同一批号香果健消片的样品，按“2.3”和“2.1”项制备供试品溶液6份并测定木香烃内酯、去氢木香内酯含量，6份样品中木香烃内酯、去氢木香内酯含量RSD分别为0.79%，0.67%，该分析方法重复性良好。

2.7 稳定性考察试验  取同一批香果健消片的样品，按“2.1-2.3“项的方法制备供试品溶液，并分别在0、6、12、18、24h依次测定共5次，木香烃内酯、去氢木香内酯含量RSD分别为0.4/5%，0.38%，结果表明在24h内供试品溶液稳定。

2.8 加样回收率试验  取已知含量的香果健消片（批号：200704，含量：木香烃内酯含量为1.1885mg/g，去氢木香内酯含量为2.0815mg/g）6份，每份约2g，分别精密加入1.0mg/ml对照品储备液1ml，按“2.3”项制备供试品溶液，并按“2.1”条件测定木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，结果如表所示1。

表1  木香烃内酯、去氢木香内酯加样回收率试验结果（n=6）

化学成分	取样量/g	实际含量/mg	加入量/mg	测得值/mg	回收率%	平均回收率%	RSD%
木	2.0345	2.4180	1.00	3.4082	99.02
香	2.0349	2.4185	1.00	3.4073	98.88
烃	2.0342	2.4176	1.00	3.4105	99.29	99.28	0.68
内	2.0340	2.4174	1.00	3.4234	100.60
酯	2.0344	2.4179	1.00	3.4041	98.62
	2.0348	2.4184	1.00	3.4113	99.29
去	2.0345	4.2348	1.00	5.2305	99.57
氢	2.0349	4.2356	1.00	5.2225	98.69
木	2.0342	4.2342	1.00	5.2198	98.56	99.14	0.49
香	2.0340	4.2338	1.00	5.2301	99.63
内	2.0344	4.2346	1.00	5.2231	98.85
酯	2.0348	4.2354	1.00	5.2306	99.52

2.9 样品测定

取5批不同年份生产且在有效期内的香果健消片样品，按“2.1-2.3”测定木香烃内酯和去氢木香内酯的含量，结果如表2所示。木香烃内酯、去氢木香内酯含量具有一定差异，其中不同批次香果健消片中木香烃内酯含量差值为0.746mg/g，去氢木香内酯含量差值为为1.20mg/g。

表2  香果健消片样品测定结果

批号	含量（mg/g）
	木香烃内酯	去氢木香内酯
200703	1.197	2.035
200802	1.943	2.869
211001	1.365	1.671
220202	1.523	2.160
220201	1.428	2.012

3 讨论

现行香果健消片的质量标准较为简单，不利于产品质量控制点监测，不利于减少药品批次之间质量差异。中药制剂成分极其复杂，给分析测定带来困难，需结合产品适应症，选择特有成分进行质量控制，运用高灵敏度、高分离度的的方法对其进行检测；本着更好的控制产品质量以保证药品的安全性和有效性，本实验建立了高效液相色谱法测定香果健消片中木香烃内酯、去氢木香内酯含量的分析方法，并运用此方法测定5个不同批次香果健消片中香烃内酯和去氢木香内酯的含量，为建立香果健消片质量标准含量检测项的限度范围提供数据支持，为香果健消片质量标准提升和修订提供参考。

参考文献

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［4］杨辉，谢金伦，孙汉董．云木香化学成分研究Ⅰ［J］．云南植物研究，1997，19(1):85．

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［6］王阳，范潇晓，杨军，等．木香的萜类成分与药理作用研究进展［J］．中国中药杂志，2020，45(24):5917-5927．

［7］侯影，张旭，尹丽波，等．木香生品、麸煨品及活性单体对小鼠胃肠运动的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(24):132．

［8］魏华，彭勇，马国需，等．木香有效成分及药理作用研究进展［J］．中草药，2012，43(3):613．

［9］余晓琴，李萍，董林，等．九香止痛丸的鉴别及木香烃内酯和去氢木香烃内酯的测定［J］．华西药学杂志，2009，24（3）：312-313.

［10］中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第八册: [S]. 1993: 120.

作者简介：何丽芳（1975～），女，汉族，硕士，副研究员，研究方向：中成药二次开发.

通讯作者：唐新宗（1983～），男，汉族，硕士，高级工程师；研究方向：中药质量标准研究以及中成药开发研究.