泼尼松脉冲释放片的制备与体内外评价研究

顾娇飞

摘要：泼尼松脉冲释放片是治疗类风湿性关节炎的常见药剂，而为了充分发挥药物的治疗作用，避免人体与药物长时间接触出现耐药性或是敏感性降低等问题，并达到较高的服药顺应性，则需要对该药物的给药时间、剂量等进行合理的选择。基于此，本文针对泼尼松脉冲释放片的制备实验流程加以阐述，采用不溶水包衣材料以干法进行压制，基于HPLC法对其体外释放度进行测试，随后对Beagle犬服药后的血浆泼尼松浓度进行测算，对药动学参数进行计算。证明当前释放片具有4～5h的体外释放时间，且结合实验证明该制剂的释放延迟性较好，可满足药物治疗需求。

关键词：泼尼松；类风湿性关节炎；脉冲释放片；延迟释放

引言：作为一种常见的慢性免疫性疾病，类风湿性关节炎的发病率相对较高，且根据相关研究发现该病症具有一定的发病规律，基于昼夜发病通常在凌晨较为严重。而通过泼尼松脉冲释放片则能够对该病症起到一定的治疗作用，作为典型的糖皮质激素类药物，在使用之后可对关节疼痛、红肿等起到一定的缓解作用。而在使用药剂过程中，应当注重药剂的合理应用实践、应用剂量等。

1 泼尼松脉冲释放片制备

本文对泼尼松脉冲释放片的制备进行研究，以期通过实验研究在服药后经过特定的包衣剂，在时滞性时间之后在体内加以释放，进而促使患者在睡前服用之后，药物经过延迟，能够在体内的延性细胞因子达到最高浓度时加以释放，从而更好地完成对病症的治疗控制作用。经过参考，以干法压制制备给药系统，进而满足泼尼松活性成分的脉冲释放需求。通过这样的方法加以制备，则能够避免药物进入肠道之后出现明显的变化，并对生产制备流程加以简化。

1.1制备准备

1.1.1准备药剂

本次制备药剂过程中选择了仙琚制药股份有限公司的泼尼松原材料；湖北药业提供的硬脂酸镁；湖南药业提供药用级枸橼酸；德国Meggle公司生产200目乳糖；德国JRS公司生产微晶纤维素；并联合湖南药业生产的聚维酮K30、碳酸氢钙以及磷酸三钙。

1.1.2准备仪器

准备上海药检公司提供的YPD-30A型号片剂硬度仪；北京科技公司提供的DP单冲压片机；重庆试验仪提供电热鼓风烘干箱；日本进口LC-20A高效液相色谱仪；天津大田科技提供ZRS-8G智能溶出仪[1]。

1.2制备流程

泼尼松脉冲释放片内芯制备流程，首先需要取5.0g聚维酮，同时取50ml乙醇溶液，并将聚维酮溶解在乙醇中，获得10%（w/v）的聚维酮乙醇溶液，放置一旁，其可作为释放片的黏合剂在后续压制环节加以应用。随后分别使用60目的过筛工具对泼尼松以及各种辅料进行过筛，根据处方药剂的参数标准进行充分混合，随后在其中加入制备好的聚维酮乙醇溶液10ml，充分混合后经过20目的过筛工具进行筛除。烘干箱调整到50℃ ~55℃的温度，随后对其进行烘干处理，完成后整理颗粒，根据处方量，在其中添加适量硬脂酸镁，或是可在其中适量添加外加崩解剂，通过充分均匀混合，按照6.5mm的标准对其进行压制，进而完成释放片内芯的制备工作。

随后可对整体的泼尼松脉冲释放片进行制备，这一环节中则是在制备完成的内芯外部覆盖不溶于水的包衣剂，通过对包衣剂的厚度进行调整，确保其在服用后能够按照既定的时滞时间释放。基于此，首先需要在药品辅料中充分混合山嵛酸甘油酯，该包衣材料具有一定的不溶于水特性。外部软材同时可以应用10%（w/v）聚维酮乙醇水溶液，完成后同样通过20目的过筛工具对其进行筛除，完成后将其送至预热至50℃~55℃的干燥箱中进行烘干。等待干燥度达到90% 以上之后，取出进行整理，并根据处方量参数，将硬脂酸镁加入其中并进行充分混合，从而获得备用的包衣颗粒剂。随后将制备好的颗粒剂在13mm的模板中导入50%，完成后将冲模铺平，并在冲模的中心位置放置药片内芯，随后再次将剩余50%的包衣颗粒剂添加到冲模中，等待刮平、压制则完成对泼尼松脉冲释放片的制备处理。

1.3制备质量评价

制备泼尼松脉冲释放片的流程相对较为简单，完成制备之后，应当对制备质量进行检验。首先观察释放片外观，其应为白色圆形光洁片状药剂，观察其结构，应避免出现凹陷断裂等瑕疵。基于本文中所选择的制剂参数，按照5mg/片的规格加以设置，因此在对其含量以及均匀度的检测中，应当根据我国药典附录中含量均匀度检测的方法，对其均匀度进行检验。抽取10片泼尼松脉冲释放片，并根据药典中测量方法，对其各自含量进行检测。本次检测中，10片药剂具有101.45%的均匀度，且每一片剂之间的偏差控制在2.35以内，进而根据A+1.80s=5.70＜15的要求，其充分适应药典的基本要求，进而证明本次所制备的释放片中均具有标准含量。

1.4释药原理

当患者服下泼尼松脉冲释放片之后，肠道内的液体对包衣片外层的材料逐渐渗透，进而在达到内芯之后，药物中的超级崩解剂在瞬间爆发出强大的崩解力，进而促使包衣整体破裂

[2]。而实现这一过程则需要一定的时间，经由胃液对包衣进行消化腐蚀，从而具有一定的时滞性特点，能够完全释放药物。并且在时滞性的作用下，可在指定时间完成对药剂的释放，可更好地根据患者的发病时间，自主选择用药时间。

1.5体外释放度测定

随后对药剂的重现性进行考察，按照本文中所提出的处方要求以及相关工艺条件等，对泼尼松脉冲释放片进行制备，需要对其体外释放度进行考察。则在本次测定中，按照乙腈一水（30:70）的标准控制流动相，同时选择250mm×4.6mm，5μm的标准选择色谱柱。进而按照244mm对检测波长加以控制，温度为30℃，进样量则控制在50μl左右。

随后展开测定，选取20mg的待测样品展开精密的测定，将其放置到含有5%甲醇溶液含量的100ml量瓶中，随后添加50ml的水对其进行稀释定容。完成稀释混合之后，分别取容量为50ml以及100ml的量瓶各五个。在50ml量瓶中分别添加0.05、0.25、0.50、2.5ml的泼尼松混合溶液；在100ml量瓶中分别添加2、2.5、3、3.5ml的泼尼松混合溶液。再次分别向量瓶添加20ml的清水进行稀释，进而可完成0.1~15μg·ml-1密度的溶液配置整合，这一参数表示为分别对应1%～150%的释放量，随后分别从量瓶中提取50μg，展开进样处理，并对峰面积进行记录。同时根据峰面积完成浓度回归处理，进而生成如图1所示的测定效果。

图1 体外释放度测定图

经过计算统计，证明当前方法具有超过99%以上的平均回收率，且日间RSD超过1.25%以上。按照时滞时间T5%以及最大释放时间T85%进行描述，则根据图1中的相应内容得知，在体外释放时，具有4～5h左右的时滞时间，且6片药剂之间具有良好的平行性特征，符合我国针对类风湿性关节炎病症治疗时所研制的糖皮质激素类药物要求。且在经过时滞后的释放情况而言，在0.5h内能够满足超过85%的释放要求。进而根据这样的处方工艺可完成泼尼松脉冲释放片的制备处理要求。

1.6体内释放测定

进而随本次制备的泼尼松脉冲释放片展开体内释放测定，与体外测定的相应条件存在一定差异。在体内释放测定工作中，选择甲醇-5mmol·L-1乙酸铵作为流动相，同时利用色谱仪调节到100mm×4.6mm，3.5μm的色谱柱标准，准备12.5mm×4.6mm，5μm的预柱作为保护柱，在测定中，选定0.4ml·min-1的速度加以控制，选择20μl的进样量，调节室温状态展开测定。同时在检测过程中选择电喷雾离子源作为质谱，控制在320℃的负离子参数模式，按照4kV的毛细管电压加以控制，同时应用多反应检测进行测定扫描。此时泼尼松以及内标倍他米松的检测碎裂电压以及碰撞能等各项参数如表1所示。

表1 泼尼松测定物质的优化参数

待测物质	离子对	碎裂电压	碰撞能
泼尼松	357.1→327.2	150	5
内标倍他米松	391→361	160	5

基于体内测试则是利用比格实验犬作为实验对象展开测定，则首先将释放片投喂给比格犬，随后取比格犬体内血浆，按照500μl抽取，并在其中添加内标工作液50μl，同时在其中添加1ml的饱和NaCl溶液，经过混合旋转设备经过3min的漩涡旋转之后，充分混合均匀。萃取乙酸乙酯5ml之后，添加到其中并再次进行5min的漩涡混合，将其送入离心机中，开启3.5×103r·min-1的速度，旋转10min之后，提取上清液4ml，将其放置于室温环境下，经由氮气设备缓慢对其进行吹干。干燥后再次加入流动向，并按照相同速度进行离心旋转，经过5min之后，提取上清液20μl后，展开MS/NS分析。

选取10mg的泼尼松待测样品展开精密的测定，将其放置到含有5%甲醇溶液含量的100ml量瓶中，随后向其中加入50%浓度的甲醇溶液面对其进行稀释定容。完成稀释混合之后，分别获得4、2、1、0、0.4、0.2、0.1、0.04、0.02、0.01μg·ml-1的泼尼松对照液。

同时选取对照用的倍他米松溶液10mg，将其放置到100ml的量瓶中展开精密测定，在量瓶中添加甲醇溶液，稀释到100μg·ml-1左右，在200ml的量瓶中添加1mg的溶液量，随后再次应用甲醇对其进行稀释，直到500μg·ml-1参数状态。

取475μl的比格犬空白血浆，在其中添加泼尼松对照液25μl以及内标工作液50μl。根据药典检测中的相应标准，按照标准曲线溶液浓度进行配置，则可以获得0.5、1、2、5、10、20、50、100、200ng·ml-1浓度状态下的工作液，随后展开LC/MS/MS分析[3]。对充分过程中的色谱图进行记录，待测物浓度表示为横坐标，而其与内标物之间的峰值比值则设定为纵坐标，此时展开回归拟合。进而可获得Y=0.0841X+0.5437（r=0.9898，n=9）的标准曲线回归方程，进而证明处于0.5~200ng·ml-1浓度下的泼尼松脉冲释放片其具有更加良好的峰面比值线性关系。该技术方法充分适用于泼尼松脉冲释放剂的属性药剂，就有高达79%以上的泼尼松回收效率，同时具有高达81%以上的内标平均萃取回收率。

2 Beagle体内药动学评价

展开体内药动学评价的目的是对所研制的释放片能否达到指定释放时间以及血药浓度等进行检验，进而对药物使用后在生物体内的吸收、分布、代谢等基本情况进行总结。本文以比格实验犬血浆中泼尼松活性物的浓度参数为基准进行测试实验，分别对照普通泼尼松释放片以及泼尼松脉冲释放片二者的差异，经过精密度统计分析，对二者的生物利用度差异进行评价。

2.1评价试验设计

在完成泼尼松脉冲释放片的体内外测定之后，则可以对其药动学展开评价。在实验过程中，首先按照两组分别选取3只健康的比格犬，并交叉设计给药剂量。首先，第一周期中，分别为两组实验犬给予口服药剂，选择A药剂与自制释放片作为受试制剂，参比制剂则选择为自制泼尼松普通释放片以及B制剂。第二周期则需要经过10d清洗处理，进而展开交叉给药处理。在进行实验之前，应保持超过12h以上的禁食管理。同时在给药前以及给药后，分别应当选择不同的时间对受试制剂组的实验犬进行采血检测，分别为2、4、6、10h后完成4μl的前肢采血。而参比制剂组的实验犬则需要分别在10、40、60、120、150min的时间点对用药前后进行采血检测。完成后使用肝素钠用于防止血液凝固，并处于-80℃的温度状态加以保存。

2.2药动学评价

经过进一步的测试，对测试结果进行总结，从而评价药动学效果，发现在经过AUC0-t计算之后，受试制剂组具有超过103%以上的生物使用情况，同时考虑达到在单侧t的检验过程中具有＜0.01的检测结果，则本次AUC0-t其所对应的（1-2a）%具有超过99%以上的置信区间，等同于125%左右的等效标准；而相应的AUC0-∞所对应的（1-2a）%具有105%的置信区间，同样具有125%左右的等效标准。同时光辉对Tmax展开Wilcoxon的非参数检验，具有0.004的P值，显著小于0.05，进而证明其具有统计学差异[4]。基于这样的结果，以AUC0-t以及AUC0-∞作为本次评价指标，则基于假设概率，证明受试制剂与参比制剂的差异相对较小，且受试制剂具有显著的释放延迟性，体内活动代谢产物相对较高，满足实验要求。

结论：基于干法压制制备泼尼松脉冲释放片，具有4~5h的体外延时释放标准，且在经过0.5h的时滞之后，能够全面释放药物。并且基于药动学评价对体内外的释放加以评价，证明其符合体内药物释放活性要求，可在晚间服用，进而对患者病症起到一定的缓解作用。

参考文献：

[1]郑玉南.五苓散联合醋酸泼尼松、环磷酰胺治疗原发性肾病综合征疗效观察[J].湖北中医杂志,2023,45(12):9-12.

[2]仝宗刚，杨乐，赵亚洲.活瘀祛浊益气方联合泼尼松+他克莫司对特发性膜性肾病患者血清抗PLA2R抗体及氧化应激指标的影响[J].海南医学,2023,34(22):3236-3239.

[3]黄远颖,杨秋敏,沈丽君,等.小剂量泼尼松联合艾曲泊帕在成人慢性原发免疫性血小板减少症治疗中的应用研究[J].中国医药科学,2023,13(22):94-97.

[4]徐焱，陈福英，万峻宏.复方环磷酰胺片+醋酸泼尼松片联合白芍总苷胶囊治疗系统性红斑狼疮对患者外周血CD3~-CD16~+CD56~+NK细胞水平的影响[J].中国当代医药,2023,30(32):52-55+60.