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简介：摘要目的观察人内源性反转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)在胆管癌组织中的表达，并探讨其表达水平与胆管癌患者临床病理特征及预后的关系。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学染色法分别检测88例胆管癌组织和部分正常组织中HHLA2的表达，以H-score值进行评估，应用Wilcoxon秩和检验比较胆管癌及正常组织中HHLA2表达水平的差异，采用χ2检验分析胆管癌组织中HHLA2表达水平与患者临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier法分析HHLA2表达水平与患者总生存期(OS)的关系，拟合Cox模型评价不同指标的预后价值。结果免疫组织化学法研究结果表明，胆管癌组织中HHLA2的染色强度(169.200±7.903)显著高于正常组织(121.900±12.950，P<0.01)，但HHLA2高表达的胆管癌患者总生存期与HHLA2低表达的患者之间差异无统计学意义[风险比(HR)＝0.622 5，95%置信区间(CI)：0.305 8～1.267 0，P>0.05]；HHLA2的表达水平与病理分级呈正相关(χ2＝4.306，P<0.05)；多因素Cox风险比例模型显示，年龄(HR＝0.154 8，95%CI：0.059 3～0.403 7，P<0.01)可作为胆管癌患者预后评判的独立风险因素。结论HHLA2在胆管癌组织中高表达，提示其在胆管癌发生发展中具有重要作用。

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简介：摘要目的探讨人内源性反转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)在人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549、H1975和SK-MES-1中的表达及其生物学功能。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库采用Log-rank检验分析HHLA2 mRNA在NSCLC组织中的表达水平对患者预后的预测价值。利用RNA干扰(RNAi)技术构建HHLA2表达稳定下调的人NSCLC细胞株，通过细胞增殖实验、划痕实验及Transwell侵袭实验观察HHLA2表达下调对人NSCLC细胞株生物学功能的影响，组间比较采用t检验。结果TCGA数据库结果显示，HHLA2 mRNA表达水平低的肺癌患者的总生存期(OS)显著高于HHLA2 mRNA表达水平高的患者(肺腺癌：Log-rank P＝0.082，肺鳞癌：Log-rank P＝0.021)。富集分析结果显示HHLA2可能与NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力相关。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)结果显示，3种细胞株中LV-shHHLA2组HHLA2 mRNA和蛋白表达水平均显著低于LV-NC组。细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验显示，下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的增殖能力(A549：48 h：0.475±0.014比0.600±0.030，t＝3.813，P<0.05；72 h：0.658±0.044比0.911±0.039，t＝4.336 P<0.05；H1975：48 h：0.414±0.026比0.550±0.026，t＝3.669，P<0.05；72 h：0.645±0.049比0.926±0.026，t＝5.076，P<0.01；SK-MES-1：48 h：0.387±0.043比0.606±0.037，t＝3.870，P<0.05；72 h：0.675±0.044比0.971±0.045，t＝4.717，P<0.01)；划痕实验显示，下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的迁移能力(A549：0.489±0.046比1.000±0.033，t＝8.975，P<0.001；H1975：0.242±0.060比1.000±0.028，t＝11.390，P<0.001；SK-MES-1：0.403±0.071比1.000±0.092，t＝5.150，P<0.001)；Transwell侵袭实验显示，下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的侵袭能力[A549：(150.333±7.881)个比(226.000±6.429)个，t＝7.440 P<0.01；H1975：(92.000±11.790)个比(203.333±7.839)个，t＝7.864，P<0.01；SK-MES-1：(95.333±14.881)个比(201.000±16.643)个，t＝4.733，P<0.01]。结论干扰NSCLC细胞中HHLA2的表达可降低其增殖、迁移和侵袭能力。

简介：摘要目的探讨IκB激酶(IKK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对Myc过表达诱导的小鼠原发性肝癌发生发展的影响。方法利用转基因小鼠将LAP-tTA小鼠与Alb-cre小鼠杂交，再与NEMOf1(NEMO为NF-κB必需调节蛋白)小鼠杂交，以产生LAP-tTA＋/Alb-cre＋/NEMOfl/wt小鼠，最后与tetO-Myc＋小鼠杂交。本实验包括4组：(1)WT小鼠；(2)NEMOΔLPC小鼠(肝细胞中NEMO敲除，无Myc过表达)；(3)MycLAP-tTA小鼠(Myc过表达，无NEMO敲除)；(4)MycLAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠(肝脏Myc过表达和NEMO敲除)。记录小鼠的生存曲线，观察肝脏大体形态。苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理结构，免疫组织化学染色、蛋白质印迹法(Western blot)检测肝脏肿瘤指标及肝祖细胞指标、定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测相关蛋白的mRNA水平。使用t检验比较独立样本组与相应组。结果小鼠带瘤生存曲线显示MycLAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠中位生存期明显短于MycLAP-tTA小鼠(中位生存期M/P50 56 d比83 d，P<0.01)；MycLAP-tTA/NEMOΔLPC小鼠对比MycLAP-tTA小鼠，谷草转氨酶[(739.40±35.61) U/L比(441.50±78.79) U/L，t＝2.464，P<0.05]、碱性磷酸酶[(3 142.0±287.6) U/L比(1 702.0±278.8) U/L，t＝3.129，P<0.01]、γ-谷氨酰基转移酶[(101.70±12.82) U/L比(37.31±9.34) U/L，t＝3.927，P<0.01]和总胆红素[(1.281±0.232) mg/dl比(0.618±0.051) mg/dl，t＝3.889，P<0.01]均显著升高，且差异有统计学意义；Western blot检测显示细胞角蛋白19(CK19)、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)水平在MycLAP-tTA/NEMOΔLPC较MycLAP-tTA组小鼠肝脏亦明显升高；肝祖细胞标志物如角蛋白(CK19，4.336±1.970比0.680±0.234，t＝1.843，P<0.01)、CK7(3.884±0.338比2.370±0.525，t＝2.422，P<0.01)、甲胎蛋白(AFP，3 614.0±2 070.0比1 399.0±319.9，t＝1.057，P<0.01)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)的mRNA水平在MycLAP-tTA/NEMOΔLPC较MycLAP-tTA组小鼠肝脏显著增高(7.900±0.997比3.084±0.711，t＝3.943，P<0.01)。结论肝细胞中特异性敲除NEMO从而抑制经典的IKK/NF-κB信号通路，可促进肝肿瘤的发生发展，并诱导混合型肝细胞癌-胆管细胞癌的发生。白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录激活因子-3(STAT3)通路与细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路可能参与混合型肝癌的发生发展。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-598-3p靶向调控RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白(RMP)基因对人胃癌细胞SGC-7901恶性增殖和侵袭迁移的影响及其作用机制。方法筛选SGC-7901细胞株行后续实验，分别建立稳定过表达或敲减RMP和miR-598-3p的SGC-7901细胞株。采用溴脱氧尿苷(BrdU)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力，平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，双荧光素酶报告基因法分析miR-598-3p的结合靶点，蛋白质印迹法(Western blot)检测相关通路相关蛋白表达水平，两样本间比较使用t检验。结果稳定过表达和敲减RMP或miR-598-3p的SGC-7901细胞株建立成功。敲减RMP能显著降低SGC-7901的增殖能力，BrdU(8.867±1.159比26.030±3.630，t＝7.704，P<0.01)，CCK-8(0.560±0.052比1.020±0.107，t＝6.708，P<0.01)，迁移能力(336.000±21.070比252.700±36.120，t＝3.452，P<0.05)，侵袭能力(36.330±7.371比127.300±10.690，t＝12.140，P<0.01)。过表达RMP能显著提高SGC-7901细胞的增殖能力，BrdU(56.400±6.560比24.800±4.423，t＝6.918，P<0.01)，CCK-8(2.105±0.142比1.028±0.110，t＝10.350，P<0.01)，迁移能力(131.300±20.110比257.000±29.140，t＝6.148，P<0.01)，侵袭能力(347.700±41.140比135.000±17.690，t＝8.226，P<0.01)。生物信息学预测miR-598-3p与RMP的3’端非编码区(3’UTR)位点结合，并通过双荧光素报告系统验证。过表达或敲减miR-598-3p能分别降低和提高SGC-7901细胞株的增殖、迁移及侵袭能力，而RMP的回复表达能挽救miR-598-3p引起的细胞增殖、侵袭及迁移的抑制。miR-598-3p通过靶向RMP抑制p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6k1)/凋亡蛋白(Bad)和核因子-κB(NF-κB)通路发挥功能。结论miR-598-3p靶向RMP基因抑制p70s6k1/Bad和NF-κB通路降低SGC-7901细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。