简介：目的：克隆COPS3基因cDNA,构建其原核融合蛋白表达载体并表达和鉴定。方法：从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得COPS3基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将COPS3基因插入pET28a融合蛋白表达载体中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析。免疫印迹法鉴定COPS3蛋白的表达。结果：cDNA测序证明,获得了COPS3基因cDNA,其序列与Genebank中报道序列完全一致。酶切分析表明,成功构建了含COPS3基因的pET28a融合蛋白表达载体。SDS-PAGE以及免疫印迹法鉴定分析表明,COPS3蛋白获得高效表达,分子质量为51Ku,表达量约占菌体总蛋白的30%。结论：成功克隆和表达了COPS3cDNA。

简介：Objective:Toclonemultidrugresistance(MDR)relatedgenesinlungadenocarcinomacelllines.Methods:ThedifferentiallyexpressedcDNAfragmentsbetweenA549andA549DDPcellswereanalyzedbymRNAdifferentialdisplayPCR(DDRT-PCR).ThefragmentsthusobtainedwerefurtheranalyzedbyDNAsequencingandNorthernblotting.Results:ThreedifferentiallyexpressedcDNAfragmentswereobtainedandconfirmedbyNorthernblot.Sequenceanalysisrevealedthattwoofthemwerenovelandonewas100%identicalwithICEgene.Conclusion:AnalyzingdifferentiallyexpressedfragmentbetweenA549andA549DDPcellsmaybehelpfulforfindingnewMDRrelatedgenes.ThedrugresistanceofA549DDPcellsmayberelatedtotheinhibitionordown-regulationofICEgene.

简介：Objective:Toanalyzethechangesofgeneexpressioninphenylbutyrateinduceddifferentiationofgliomacells.Methods:Theexpressionlevelsof14000genesingliomacellsbeforeandafterinducementwithsodiumphenyl-butyratefor2hor6dayswereevaluatedbycDNAarraytechniqueandprovedbymulti-dotblotting.Results:expressionof98genesingliomacellsshowedchangesaftertheinducement.Somegenesinvolvedintranscriptionandtranslationandsomeoncogenesaredown-regulated,whilesomegeneinvolvedindifferentiationorapoptosisareup-regulated.18unknownexpressionsequencingtag(EST)changedtoo.Conclusion:Ageneexpressionprofileassociatedwithdifferentiationofgliomacellswasestablished.

简介：Asyntheticpolypeptide,pt27,whichisencodedbyacDNAclonewithantloncogeneactivity,p14-6,isfoundtobeabletoreduceremarkablythesoftagarcolonyformationabilityofpartofDTcellsandtoraisetheirresistancetotheouabalntoxtcity.Thisshowsthatthept27peptidecanaffecttheDTcellsInamannersimilartothep14-6doneandprovidesevidencethattherevertingactionofthep14-6toDTcellsmaybeexertedbytheexpressionofitscDNA.

简介：Objective:ToanalyzethedifferentiallyexpressedcDNAsequencesrelatedtochlorophyllin(CHL)mediatedinhibitionofmalignanttransformationofhumanbronchia1epithelialcellline(16HBE).Methods:16HBEcellstreatedwithchlorophyllinandanti-BPDEwereconductedastester,16HBEcellstreatedonlywithanti-BPDEwereconductedasdriver,andcDNArepresentationaldifferenceanalysis(cDNARDA)wasusedtocomparethedifferentialgeneexpressionbetweenthetwokindsofcells.ThecDNAfragmentswereligatedtopGEM-TvectorandtransformedintoJM109bacteria.TheplasmidDNAwassequencedandcomparedwithdatabaseinGenBankbyBLASTN.Results:Amongthe5clonedcDNAsequences,threewerenovelandwereregisteredindbESTdatabase,twoshowedsequencehomologytoalpha-enolaseandanewlyfoundgeneribosomalproteinS18/S6-like.Conclusion:These5cDNAsequencesmightplayimportantrolesinantitransformingeffectofchlorophyllin.

简介：目的研究和克隆新的肝癌相关基因，探索肝癌发生的分子基础。方法采用同源筛选、RT-PCR等克隆肝癌相关基因JST，分析其在肝癌及癌旁组织中的表达，并进行序列比对，阐明其与肝癌临床病理特征间相关性。结果克隆了一个肝癌相关基因，cDNA全长为247bp。其在肝癌及癌旁组织中序列存在一定差异。50例肝癌中12％(6／50)为上调表达，88％(44／50)为下调表达(P<0．01)。其表达程度与性别、AFP、HBsAg无关(P>0．05)，但与肿瘤大小(P<0．05)、分化程度(P<0．05)、临床分期(P<0．05)、包膜侵犯(P<0．01)、血管癌栓(P<0．01)、癌旁卫星灶(P<0．01)、Ki-67蛋白表达(P<0．05)、P53蛋白表达(P<0．05)、细胞凋亡(P<0．05)等密切相关。结论JST可能为一个肝癌抑制基因，通过下调作用影响肝癌发生发展，与肝癌的一些病理特性密切相关。

简介：CD40是分子量为45—50KD的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族成员，表达于多种抗原递呈细胞、内皮细胞、上皮细胞、造血前体细胞、成纤维细胞以及某些肿瘤细胞。通过单克隆抗体激发CD40分子不仅可以直接作用于CD40^＋分子的肿瘤细胞，其介导的信号还可在多个环节影响肿瘤发生、发展，如调控细胞增殖／凋亡，增强其它治疗手段的敏感性，并能通过调节适应性和固有免疫应答而起到抗肿瘤作用，广泛应用于肿瘤治疗。

简介：细胞免疫在机体对恶性肿瘤的免疫应答中发挥重要作用。人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA4）通过抑制T细胞的激活，参与T细胞免疫耐受的诱导和维持。因此通过单克隆抗体阻断CTLA4的作用，可刺激免疫细胞大量增殖，从而增强机体对肿瘤的免疫反应。本文主要综述了近年来CTLAg单克隆抗体药物（Ipilimumab、Tremelimumab）的研究及其在临床的应用进展。

简介：原发性肝癌是目前常见的消化系统恶性肿瘤之一,其中90%为肝细胞癌（HCC）。多数HCC患者确诊时已属中晚期,而手术、放化疗、介入治疗等临床常用治疗手段对中晚期HCC的疗效不甚理想。放射免疫治疗（RIT）是近几年发展起来的治疗HCC的新方法,以具有靶向结合能力的单克隆抗体（McAb）为载体,通过耦联放射性核素来特异性杀伤目标肿瘤细胞。其中^131I标记的McAb因其物理特性优良且具有高度靶向特异性,在HCC综合治疗中具有良好的应用前景。本文对近年来^131I标记的McAb介导的肝癌RIT取得的新进展作一综述。

简介：目的通过基因重组改善P53蛋白的功能，并研究它对肿瘤细胞的作用。方法构建人野生型P53(wtP53)融合蛋白的原核细胞表达载体PGEX-3X—PTD—P53，诱导表达和亲和层析纯化后，采用MTT法和流式细胞仪检测它对肿瘤细胞的增殖抑制作用和促细胞凋亡。结果成功构建P53融合蛋白的原核细胞表达载体PGEX-3X—PTD—P53，通过诱导表达和纯化获得重组人wtP53融合蛋白。MTT法和细胞流式分析证明该蛋白对几种癌细胞有明显的增殖抑制作用和促细胞凋亡。结论这种原核细胞表达的重组人wtP53融合蛋白保留了wtP53蛋白的生物学性状。

简介：目的利用逆病毒表达载体快速构建梯度过表达人MTA1稳转单克隆细胞系。方法利用噬菌斑原位杂交筛选人肺噬菌体文库，以阳性克隆为模板，RT-PCR获得人MTA1完整CDS序列。以逆病毒表达载体pMX为基础，经过多次酶切连接，构建逆病毒表达载体pMX—MTA1-flag—IRES—EGFP。将构建好的逆病毒载体系统，转染293-gag／pol细胞，包装出含该表达载体的逆病毒颗粒。以含病毒上清多次感染HCT116细胞，获得稳定转染MTA1的HCT116多克隆细胞系。将该多克隆细胞系按合适比例稀释后接种至10cm大皿，获得大量单克隆细胞系，以GFP为筛选标志，筛选不同荧光强度的单细胞克隆进行扩增并分析MTA1与GFP表达水平的线性关系。结果测序结果显示成功克隆出人MTA1表达序列。免疫荧光、WesternBlot结果证实成功构建出梯度过表达MTA1的稳转细胞系。相关性验证结果显示构建的非融合载体MTA1与GFP的表达呈明显的线性相关，相关系数r=0．932，P〈0．01。结论利用逆病毒表达系统，快速成功构建并筛选出MTA1与GFP非融合梯度过表达稳转单克隆细胞系，为MTA1基因功能研究提供了良好模型。该逆转录病毒平台可用于快速建立其他基因的稳转单克隆细胞系。