简介：

简介：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白基因位于1p36．2上，其inRNA翻译后的蛋白质有2549个氨基酸残基，其分子结构复杂，分子质量为289kDa.mTOR是一种丝／苏氨酸蛋白激酶，通过调节细胞周期、蛋白质合成、细胞能量代谢等多种通路发挥重要的生理功能，在细胞增殖、生长、分化过程中起着中心调控点的作用。此外，mTOR在肿瘤的形成、发展、转移过程中也起着重要作用。在一些肿瘤中可见mTOR通路的持续活动的现象。到目前为止，mTOR抑制药作为靶向性抗肿瘤药物被有效地应用于肾癌及肝癌等治疗。因此，mTOR信号通路的深入研究对肿瘤的靶向治疗具有重要意义。

简介：

简介：摘要目的研究核转录因子E2相关因子2（Nrf2）及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路对高糖状态下人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响，并探讨糖代谢相关酶在Nrf2及PI3K/Akt影响K1细胞增殖中的作用。方法根据不同处理因素将K1细胞分为5组：正糖组（正糖5.5 mmol/L培养48 h）、高糖组（正糖5.5 mmol/L培养24 h后，换25 mmol/L高糖继续培养24 h）、Nrf2siRNA组（正糖条件下siRNA转染细胞24 h后，换高糖继续培养24 h）、NcsiRNA组（正糖条件下阴性转染细胞24 h后，换高糖继续培养24 h）、LY294002组（正糖条件下培养24 h后，加50 μmol/L LY294002预孵育0.5 h再换用高糖培养24 h）。K1细胞按照上述分组处理后分别用以下方法检测相关指标：MTT法检测细胞增殖，细胞免疫荧光法检测Nrf2蛋白的分布，Western blot检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）、丙酮酸激酶M2（PKM2）蛋白的表达水平。两组数据比较采用独立样本t检验，多组数据比较采用单因素方差分析。结果与正糖组比较，高糖组K1细胞增殖率、PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2、G6PD、PKM2表达显著升高[分别为（87.31±3.67）%比（126.64±5.41）%、0.272±0.039比0.425±0.019、0.168±0.035比0.446±0.021、0.308±0.026比0.597±0.014、0.421±0.024比0.626±0.026、0.198±0.023比0.314±0.023，t=6.109~16.951，均P<0.05]，Nrf2在细胞核分布的比例显著升高[（21.6±4.5）%比（91.2±3.5）%，χ2=98.497，P<0.01]；与高糖组比较，Nrf2siRNA组K1细胞增殖率明显下降，G6PD、PKM2的蛋白表达明显下调，差异有统计学意义（t=8.936、7.056、8.843，均P<0.01），LY294002组也呈现相似的趋势（t=7.228、6.351、7.910；均P<0.01）；与高糖组比较，LY294002组K1细胞PI3K、Akt蛋白水平无明显改变，而p-PI3K、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2蛋白水平及Nrf2核浆蛋白比值均被显著抑制（t=5.748~23.572，均P<0.01）。结论高糖可激活PI3K/Akt信号通路，上调Nrf2表达与核转位，上调磷酸戊糖和糖酵解途径相关酶PKM2、G6PD的表达，促进K1细胞增殖。

简介：摘要目的筛选叉头框转录因子F2(FOXF2)作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的候选靶基因并分析其生物学功能。方法设置干扰FOXF2基因的最佳慢病毒转染获得的HT29细胞为沉默组，空载慢病毒转染获得的HT29细胞为对照组。对照组和沉默组各取三个样本行转录组测序分析；富集到Wnt/β-catenin信号通路，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证该通路的候选靶基因。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验。结果3组干扰慢病毒沉默HT29细胞中FOXF2的表达效果显著高于空载慢病毒[FOXF2基因信使RNA(mRNA)表达分别为0.29±0.02、0.28±0.05、0.26±0.01比1.00±0.13，FOXF2基因蛋白表达分别为0.20±0.02、0.16±0.01、0.12±0.01比1.00±0.01]，差异有统计学意义(F＝75.948、3 549.333，均P<0.01)，第3组慢病毒沉默FOXF2效果最佳。HT29细胞沉默FOXF2后有389个差异表达基因(DEGs)；基因本体论(GO)功能富集分析显示，DEGs显著富集在免疫效应过程、细胞外区域、腺苷酸转移酶活性等功能集团；京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示，DEGs主要涉及EB病毒感染、NOD样受体信号通路及Wnt信号通路等；Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BAMBI)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体5(LGR5)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体6(LGR6)和MSTRG.14182(新基因)主要涉及正向调控Wnt信号通路、细胞增殖和迁移等生物学过程。沉默组中BAMBI、LGR5、LGR6 mRNA和蛋白表达显著高于对照组[mRNA表达分别为1.86±0.21比1.00±0.20、1.95±0.11比1.00±0.09、2.06±0.10比1.00±0.03，蛋白表达分别为1.88±0.02比1.00±0.06、2.08±0.12比1.00±0.04、1.80±0.03比1.00±0.08]，差异有统计学意义(t＝－5.066、－11.646、－17.584、－24.100、－14.820、－16.710，均P<0.01)。结论沉默FOXF2基因的HT29细胞存在较多的差异表达基因，Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因可能参与正向调控Wnt信号通路、细胞增殖及迁移等生物学过程。

简介：目的构建GATA-3特异性短发夹状RNA（shRNA）逆转录病毒表达载体。方法设计、合成两对GATA-3编码基因的反向重复序列，中间插入9个碱基的短发夹，经退火形成互补双链，再克隆至逆转录病毒载体RNAi-RelypSIREN-RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶BamHI,EcoRI切开，电泳可显示相应条带，经测序其序列与设计的一致。结论成功构建GATA-3特异性shRNA逆转录病毒载体RetmQ／GATA-3／shRNA，为进一步进行肿瘤细胞GATA-3基因沉默的研究奠定了基础。

简介：

简介：目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,也称AKT)信号通路相关蛋白在食管癌组织中的表达情况,并分析其与食管癌淋巴结转移和淋巴管生成的关系。方法选取120例食管癌患者,收集经组织病理学检查证实的食管癌组织和癌旁正常黏膜组织。采用免疫组织化学法检测PI3K和AKT蛋白在食管癌组织及其相应癌旁正常黏膜组织中的表达情况;采用D2-40蛋白标记淋巴管,并采用免疫组织化学法检测微淋巴管密度(LMVD),分析PI3K、AKT蛋白的表达与食管癌患者临床特征及微淋巴管密度(LMVD)的关系。结果食管癌组织中PI3K和AKT蛋白的阳性表达率分别为85.0%和86.7%,均明显高于癌旁食管正常黏膜组织的4.2%和5.8%,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同性别、组织分化程度食管癌患者食管癌组织中PI3K、AKT蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的食管癌患者食管癌组织中PI3K、AKT蛋白的阳性表达率均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期的食管癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。PI3K蛋白阳性表达食管癌组织中LMVD的数量为(13.92±3.02),明显高于PI3K蛋白阴性表达食管癌组织的(6.54±1.05),差异有统计学意义(P﹤0.01);AKT蛋白阳性表达食管癌组织中LMVD的数量为(13.84±3.08),明显高于AKT蛋白阴性表达食管癌组织的(6.14±0.89),差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论PI3K/AKT信号通路相关蛋白在食管癌组织中的表达水平较高,且能够促进微淋巴管的生成和淋巴结转移,其表达情况与患者的临床特征也具有一定的关系。阻断该通路可作为治疗和预防食管癌及淋巴结转移的新的研究方向。

简介：摘要目的研究芬太尼对乳腺癌细胞干细胞特性（简称干性）的影响及分子机制。方法2018年1月至2019年10月采用人乳腺癌细胞系BT549作为体外研究对象，经0.01和0.10 μmol/L芬太尼处理后，通过成球能力实验和克隆形成能力实验检测乳腺癌细胞干性的变化；采用实时定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测干性相关转录因子性别决定区Y框蛋白2（Sox2）、八聚体结合转录因子4（Oct4）和Nanog mRNA表达水平；利用蛋白免疫印迹实验检测Wnt信号通路关键蛋白Wnt3a、磷酸化糖原合酶激酶-3β（p-GSK-3β）、糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达水平。下调Wnt3a后，再行蛋白免疫印迹实验和成球能力实验。结果0.01和0.10 μmol/L芬太尼处理的乳腺癌细胞球体直径、克隆形成率、Sox2 mRNA、Oct4 mRNA、Nanog mRNA、Wnt3a、p-GSK-3β、GSK-3β和β-catenin明显大于空白对照［（131.22 ± 1.06）和（636.37 ± 0.02） μm比（72.68 ± 0.13） μm、（41.33 ± 0.03）%和（60.58 ± 1.08）%比（20.93 ± 0.15）%、2.25 ± 0.20和3.82 ± 0.84比1.00、1.87 ± 1.06和3.35 ± 0.04比1.00、2.85 ± 0.03和4.36 ± 0.50比1.00、1.82 ± 0.03和2.57 ± 0.42比1.00、2.04 ± 0.13和2.81 ± 0.05比1.00、1.62 ± 0.17和2.93 ± 0.06比1.00、2.15 ± 0.02和3.54 ± 0.21比1.00］，0.10 μmol/L芬太尼处理的乳腺癌细胞各指标明显大于0.01 μmol/L芬太尼处理的乳腺癌细胞，差异有统计学意义（P<0.01）。干扰Wnt3a后，p-GSK-3β、GSK-3β、β-catenin、Sox2、Oct4和球体直径的表达明显低于空白对照［0.12 ± 0.05比1.00、0.53 ± 0.06比1.00和0.24 ± 0.21比1.00、0.28 ± 0.10比1.00和0.06 ± 0.01比1.00、（18.14 ± 0.30）μm比（74.32 ± 0.12）μm］，差异有统计学意义（P<0.01）。结论芬太尼通过激活Wnt3a/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞干性。

简介：摘要目的探讨Toll样受体9（TLR9）信号通路激活对肾小管细胞转录组的影响。方法提取并培养小鼠原代肾小管上皮细胞，在细胞融合度达80%时分为两组，分别加入10 μL磷酸盐缓冲液（PBS，PBS对照组）和终浓度为5 μmol/L的TLR9激活剂胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸（CpG-ODN，CpG-ODN处理组）。提取细胞RNA后在Illumina平台进行测序，使用差异基因分析软件DEGseq分析两组细胞中基因的差异表达情况，通过Goatools和KOBAS在线软件分析差异基因所参与的信号通路，应用Homer软件预测转录因子。结果与PBS对照组相比，CpG-ODN处理后有584个显著的差异表达基因，其中102个基因表达上调，482个表达下调。差异表达基因富集最显著的基因本体（GO）为β-干扰素响应、病毒响应或防御等炎症反应相关条目；京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）信号通路富集结果显示，富集系数最显著的信号通路包括2'-5'-寡腺苷酸合成酶活性、核糖核酸酶活性的调节、病毒生命周期的负调控、β-干扰素响应和对原生动物的防御反应等。转录因子预测结果显示，干扰素调节因子3（IRF3）是差异基因启动子序列上富集最显著的转录因子；IRF3是TLR9下游表达差异最显著的转录因子，转录因子21（TCF21）、锌指蛋白135（ZNF135）和阳性调节域4（PRDM4）等转录因子可能是TLR9信号通路的新候选靶标。结论CpG-ODN激活TLR9信号通路，原代肾小管上皮细胞能直接响应CpG-ODN的刺激并发生转录组学变化，为进一步探究TLR9信号通路在脓毒症相关性急性肾损伤中的分子机制研究提供了基础。

简介：摘要目的全面分析肝癌的RNA结合蛋白和转录因子基因表达及免疫浸润对肝癌预后的预测价值。方法在癌症基因组图谱(TCGA)(n＝365)、基因表达综合数据库GSE54236(n＝78)和GSE14520(n＝221)中筛选RNA结合蛋白和转录因子的共同基因集，单因素Cox回归分析进行初筛，通过LASSO-Cox构建生存回归模型，通过标准化得到整合RNA结合蛋白和转录因子的复合指数CIRT，根据其中位数将肝癌患者分为CIRThigh组(n＝182)和CIRTlow组(n＝182)，并分析两组免疫浸润等差异。结果共筛选出37个预后相关的RNA结合蛋白和转录因子基因，通过LASSO-Cox构建基于其中7个最相关基因的预后预测模型。CIRThigh组患者的M1型巨噬细胞(P＝0.032)、M2型巨噬细胞(P＝0.009)、静息肥大细胞(P<0.001)、活化自然杀伤细胞(P＝0.007)和静息记忆CD4＋ T细胞水平较低(P<0.001)，而CIRTlow组的静息树突状细胞(P＝0.048)、M0型巨噬细胞(P<0.001)、中性粒细胞(P＝0.049)、滤泡辅助性T细胞(P＝0.004)和调节性T细胞(P＝0.001)水平较低，差异具有统计学意义。基因富集分析显示，CIRThigh组的TCGA和GSE14520在细胞周期、DNA修复过程中高度富集。在TCGA队列中，CIRTlow组的患者比CIRThigh组的患者总生存更优。对TCGA队列中5年随访数据进行分析，CIRT对于肝癌患者长期生存预后具有良好的预测价值(受试者工作特征曲线下面积0.71)。结论在肝癌中建立了基于RNA结合蛋白和转录因子表达谱以及免疫细胞浸润的新的预后指标，CIRT可以作为一个独立的预后预测指标。

简介：摘要目的探讨Snail对Hela细胞侵袭的作用。方法采用Hilymax法进行细胞转染，RT-qPCR法检测mRNA表达，Westernblot检测蛋白表达，Transwell小室检测细胞侵袭。结果与对照组相比，干扰组SnailmRNA表达下降约72.3%(P<0.01)；Snail蛋白水平下降约54.2%（P<0.05）。在24h，48h，72h，干扰组较对照组细胞侵袭能力下降,其抑制率约为17.6%（P<0.05），31.5%（P<0.01），36.1%（P<0.05）。结论Snail下调可显著抑制Hela细胞的侵袭能力。

简介：摘要目的观察胸腔热灌注(IHP)对兔急性肺损伤(ALI)中Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF-κB)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)炎症信号通路的影响。方法新西兰大白兔31只，按随机数字表法分为4组，假撞击组(A组，7只)、胸部撞击组(B组，8只)、撞击+35 ℃常温灌注组(C组，8只)和撞击+43 ℃度热灌注组(D组，8只)，垂直撞击兔右侧胸部，建立ALI模型行IHP，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织中热休克蛋白70(HSP70)及肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。荧光定量PCR技术检测肺组织中NF-κB、p38MAPK、TLR4。蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织p-ATF2、磷酸化蛋白p38(p-p38)蛋白表达情况，并进行组间比较，组间比较采用t检验。结果IHP12 h后，D组的HSP70(17.40±2.30)高于A组(5.30±2.40)、B组(6.10±2.10)、C组(6.20±2.60)，差异有统计学意义(t＝9.126、10.262、9.963，P<0.05)。D组NF-κB的mRNA(2.74±0.10)高于A组(0.73±0.13)、B组(1.85±0.07)、C组(1.41±0.28)，差异有统计学意义(t＝33.823、20.623、12.652，P<0.05)。D组p38MAPK的mRNA(2.49±0.23)高于A组(0.39±0.12)、B组(1.43±0.16)、C组(1.25±0.08)，差异有统计学意义(t＝21.648、10.701、14.403，P<0.05)。D组TLR4的mRNA(3.41±0.32)高于A组(0.56±0.18)、B组(2.32±0.18)、C组(1.73±0.11)，差异有统计学意义(t＝22.347、8.397、14.043，P<0.05)。D组磷酸化活化转录因子2(p-ATF2)的蛋白灰度值(1.04±0.12)高于A组(0.48±0.11)、C组(0.65±0.08)，差异有统计学意义(t＝9.369、7.649，P<0.05)。D组p-p38的蛋白灰度值(0.79±0.13)高于A组(0.37±0.09)、C组(0.53±0.07)，差异有统计学意义(t＝7.162、4.981，P<0.05)。D组的TNF-α(50.30±7.70)低于B组(94.40±5.80)和C组(79.60±8.40)，差异有统计学意义(t＝-12.939、-7.273，P<0.05)。D组的IL-1(63.40±9.70)低于B组(135.70±6.80)和C组(103.20±8.40)，差异有统计学意义(t＝-17.263、-8.773，P<0.05)。D组的IL-6(34.20±3.70)低于B组(78.40±2.90)和C组(56.70±2.80)，差异有统计学意义(t＝-26.593、-13.715，P<0.05)。结论胸腔热灌注通过TLR4/NF-κB/p38MAPK信号通路的高表达，对炎症反应具有抑制作用。

简介：目的研究Notch1（ICN）基因对人宫颈癌细胞生长的影响，并对其作用机制进行探讨。方法采用脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞，MTT比色法测定瞬时表达Notch1（ICN）对细胞生长的影响，用流式细胞仪分析细胞周期分布的变化，Westernblot法检测P53蛋白的表达改变。结果瞬时表达Notch1（ICN）基因可以抑制HeLa细胞的生长，使细胞周期停滞在G1期，并上调细胞周期调控蛋白P53的表达水平。结论通过影响细胞周期的分布及细胞周期调控蛋白的表达，激活Notch1基因可抑制人宫颈癌细胞的生长。

简介：多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)细胞的增殖及凋亡受骨髓造血微环境的调节.Notch信号是骨髓中细胞与细胞之间通讯的主要信号通路之一,它对多发性骨髓瘤细胞的调节作用目前并不清楚.本研究旨在阐明Notch信号对多发性骨髓瘤细胞凋亡的调节作用.利用RT-PCR分析多发性骨髓瘤细胞Notch信号分子的表达和采用逆转录病毒介导的基因转移方法将Notch-1胞内区(IntracellulardomainofNotch,ICN)转入多发性骨髓瘤细胞株,以建立激活Notch信号的多发性骨髓瘤细胞系;采用台盼蓝拒染和TUNEL方法测定骨髓瘤细胞的死亡.结果表明:RT-PCR检测显示多发性骨髓瘤细胞表达Notch-1及相关分子,逆转录病毒可以介导外源Notch-ICN在骨髓瘤细胞中表达,激活Notch信号可以抑制二甲基鞘氨醇(N,N-dimethylsphingosine,DMS)诱导的多发性骨髓瘤细胞的凋亡.结论:Notch信号对多发性骨髓瘤细胞凋亡有抑制作用,这可能为多发性骨髓瘤的治疗提供新的靶点.

简介：3GPPFDD规格使用了ITU的IMT－2000标准化的W－CDMA的DS（DirectSequence）方式，预计可以应用于最大传输速度达2Mbps的新一代高速移动通讯中，应用于多媒体领域。并于此方式的测量评价，在这里重点就有关移动机信号的特征、调制分析以及使用TPC指令的发信功率控制的测量方面进行说明。

简介：本文叙述了一个用于接收日本气象卫星测距信号的接收设备，介绍卫星工作情况和接收机前端各部分的技术指标，并且详细地描述解调部分的工作原理，1987年1月开始，上海天文台与日本电波研究所进行两地的精密时间比对，其比对结果峰－峰值为100毫微秒，如果计及卫星轨道根数修正，得到有效值的变化小于20毫微秒，平均一天时间内频率稳定率为2×10^－13。

简介：摘要磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路过度激活与恶性肿瘤的发生发展及临床预后密切相关，以该信号通路为靶点的治疗药物可以有效抑制肿瘤的进展。目前美国食品和药物监督管理局批准了3种药物(CAL-101、BAY80-6946、IPI-145)用于治疗复发和难治性惰性非霍奇金淋巴瘤，临床上显示出显著的疗效和可控的安全性。

简介：

简介：摘要目的探讨锌指蛋白转录因子家族成员Krüppel样因子5（KLF5）对肝细胞癌（HCC）诊断与预后评估的价值。方法按自身配对法收集126例HCC术后癌及非癌组织（距离癌组织边缘3.0 cm以上）制作芯片，以免疫组织化学法分析KLF5表达，并分析其表达的临床病理学特征及预后价值。收集222例慢性肝病患者血清并以酶联免疫吸附法（ELISA）定量测定其KLF5水平；以同期40例正常人血清为对照，以评价KLF5异常对良、恶性肝病诊断与鉴别诊断的价值。对数据进行t检验、Z检验或χ2检验。结果HCC组KLF5表达阳性率为95.2%（120/126），显著高于非癌组的38.9%（49/126；χ2 = 14.385，P < 0.001）。KLF5表达与TNM分期（I期35%、II期40%、III期74.4%、IV期78.1%）、肿瘤大小、甲胎蛋白（AFP）水平、伴门静脉栓塞、HBV感染和患者5年生存率明显相关。单/多因素分析均显示KLF5高表达为HCC预后独立预测因素。HCC患者血清KLF5水平显著（P < 0.001）高于肝硬化、慢性肝炎和正常对照组；如以血清KLF5 > 800 ng/ml和AFP > 25 μg/L为界，诊断HCC阳性率分别为90.48%和73.81%，比AFP特异、假阳性率低，有助于良、恶性肝病的鉴别诊断。结论HCC组织及血中KLF5过表达，它与HCC临床分期以及预后密切相关；分析KLF5水平有助于HCC诊断和鉴别诊断。