简介：摘要目的探讨长链非编码RNA染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)靶向调控微小RNA(miRNA，miR)-106a-5p对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人肾癌ACHN、Caki-1、Caki-2和786-O细胞和正常肾脏上皮细胞HK-2中XIST的表达水平。将体外培养的Caki-2细胞分为Empty组(转染空白载体)和XIST组(转染XIST过表达载体)，采用RT-qPCR检测各组细胞中XIST和miR-106a-5p的表达水平，噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测各实验组细胞增殖和凋亡。采用双荧光素酶报告基因实验检测XIST和miR-106a-5p的靶向结合关系。将miR-106a-5p激动剂与XIST过表达质粒共转染后观察上调miR-106a-5p表达对XIST过表达的Caki-2细胞增殖和凋亡的影响。多组间比较使用单因素方差分析，组间多重比较采用学生纽曼·基尔斯(Student-Newman-Keuls，SNK)-q，两组间比较采用独立样本t检验。结果与HK2细胞比较，ACHN、Caki-1、Caki-2和786-O细胞中XIST的表达水平明显降低(相对表达量分别为0.516±0.031、0.605±0.021、0.241±0.024、0.355±0.042，t＝11.666、11.321、20.321、12.992，P均<0.05)。与Empty组比较，过表达XIST组细胞中XIST的表达水平升高(相对表达量为175.829±1.021，t＝20.471，P<0.05)、细胞增殖能力降低(为对照组0.759倍，t＝6.388，P<0.05)、细胞凋亡增加(为对照组1.304倍，t＝11.371，P<0.05)，而细胞中miR-106a-5p的表达水平明显降低(相对表达量为0.415±0.035，t＝13.717，P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p可与XIST靶向结合。转染miR-106a-5p激动剂成功上调miR-106a-5p表达后，过表达XIST对Caki-2细胞增殖的抑制作用及促凋亡作用明显逆转。结论过表达XIST可通过靶向调控miR-106a-5p抑制肾癌Caki-2细胞增殖并促进其凋亡。

简介：摘要目的探究微小RNA-140-5p(miR-140-5p)通过靶向调控组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达在胃癌转移中的作用及机制。方法收集2020年4月至2020年10月齐齐哈尔医学院附属第三医院院胃癌患者手术切除癌组织以及癌旁组织(52例)；细胞实验对象为购买人胃正常上皮黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901和HGC-27。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测胃癌患者肿瘤组织中HDAC4的表达。在线网站Targetscan预测HDAC4上游调控miRNA。双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p和HDAC4的靶向关系。胃癌细胞依据不同转染处理分组为si-NC组、si-HDAC4组、mimic-NC组、miR-140-5p mimic组、inhibitor-NC组和miR-140-5p inhibitor组。采用RT-qPCR检测胃癌细胞miR-140-5p的表达，Western blot检测HDAC4蛋白表达。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡，组间比较采用t检验。结果胃癌组织中的HDAC4的mRNA和蛋白表达高于癌旁组织(1.024±0.099比1.512±0.065；0.916±0.160比1.734±0.289，t＝29.71、17.86，均P<0.05)。在胃癌细胞中miR-140-5p与HDAC4存在结合位点，双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p结合在HDAC4的3’端非编码区(3’UTR)(0.986±0.050比0.436±0.039，t＝15.02，P<0.05)。胃癌细胞中miR-140-5p表达显著低于正常细胞(1.021±0.054比0.362±0.029，t＝18.62，P<0.05)。miR-140-5p mimic组细胞迁移(180.000±5.890比54.000±3.230，t＝32.49，P<0.05)和侵袭(94.000±5.430比43.000±3.420，t＝13.77，P<0.05)能力显著低于mimic-NC组，而凋亡能力显著高于mimic-NC组(11.250±1.560比30.240±3.550，t＝8.48，P<0.05)；miR-140-5p inhibitor组细胞迁移(192.000±6.000比284.000±8.430，t＝15.37，P<0.05)和侵袭(89.000±5.110比153.000±6.990，t＝12.80，P<0.05)能力显著高于inhibitor-NC组，而凋亡能力显著低于inhibitor-NC组(13.200±1.620比5.350±1.000，t＝7.14，P<0.05)。miR-140-5p mimic+Jagged1/FC组细胞迁移(60.000±3.430比196.000±7.230，t＝29.44，P<0.05)和侵袭(48.000±3.750比97.000±4.890，t＝13.77，P<0.05)能力显著高于miR-140-5p mimic+DMSO组，而细胞凋亡能力显著低于miR-140-5p mimic+DMSO组(28.950±3.240比12.050±1.430，t＝8.27，P<0.05)。结论胃癌细胞的miR-140-5p上调表达可通过抑制HDAC4/Notch信号轴进而抑制胃癌转移进程。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表达。胶质瘤细胞U251随机分为miR-148a-3p inhibitor组和miR-148a-3p NC组，脂质体Lipofectamine™3000将miR-148a-3p inhibitor和miR-148a-3p NC转入胶质瘤细胞中，Real-time PCR检测miR-148a-3p表达，水溶性四唑蓝(WST)法检测细胞活力，Tanswell实验检测细胞迁移及侵袭能力，Real-time PCR法及蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CUL5蛋白及mRNA表达，并进行荧光素酶报告基因分析。组间比较采用t检验进行分析。结果miR-148a-3p inhibitor组(0.31±0.03)中miR-148a-3p表达量低于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10，t＝5.479，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.375±0.037)细胞活力低于miR-148a-3p NC组(0.525±0.051，t＝4.587，P<0.05)；miR-148a-3p inhibitor组细胞克隆数目[(43.52±4.25)个]少于miR-148a-3p NC组[(148.79±14.88)个](t＝5.147，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(38.47±3.85)个]细胞迁移数目少于miR-148a-3p NC组[(185.59±18.56)个](t＝5.589，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(41.79±4.18)个]细胞侵袭数目少于miR-148a-3p NC组[(195.69±19.58)个](t＝6.482，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor＋ CUL野生型质粒的荧光强度(0.55±0.05)低于miR-148a-3p inhibitor＋CUL5突变型(1.01±0.10)、miR-148a-3p NC＋CUL5野生型(1.02±0.10)/突变型(1.03±0.10)。miR-148a-3p inhibitor组(1.89±0.18)中CUL5 mRNA表达量高于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10，t＝5.579，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.42±0.04)中CUL5蛋白表达量高于miR-148a-3p NC组(1.43±0.14，t＝5.894，P<0.05)。结论下调miR-148a-3p表达进而促进CUL5表达，最终抑制U251胶质瘤细胞增殖与侵袭。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-146-5p靶向钙调磷酸酶调节蛋白1(RCAN1)对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响。方法选取2015年6月至2019年6月河南省人民医院收集的89例非小细胞肺癌和癌旁组织样本作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析非小细胞肺癌组织和癌旁组织miR-146-5p表达水平；在非小细胞肺癌A549胞系中采用慢病毒建立对照miRNA和miR-146-5p敲降细胞株(miR-control组和miR-146-5p KD组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力，采用流式细胞术分析两组细胞凋亡水平；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-146-5p靶基因，并分析靶基因对非小细胞肺癌增殖的影响。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织miR-146-5p表达水平(1.02±0.19)比较，非小细胞肺癌组织中miR-146-5p表达水平(3.16±0.30)显著上调，差异有统计学意义(t＝3.910，P<0.05)。与miR-control组细胞比较，miR-146-5p KD组细胞增殖显著下降，差异有统计学意义(F＝3.013，P<0.05)。与miR-control组细胞凋亡率(4.30±0.98)%比较，miR-146-5p KD组细胞凋亡水平(29.65±5.01)%显著增加，差异有统计学意义(t＝5.011，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶基因证实RCAN1是miR-146-5p的靶基因。在miR-control组中，过表达RCAN1蛋白后细胞增殖能力明显低于空载体的细胞，差异有统计学意义(F＝3.029，P<0.05)，而在miR-146-5p KD组细胞中过表达RCAN1蛋白后细胞增殖能力低于空载体的细胞，差异有统计学意义(F＝3.091，P<0.05)。结论miR-146-5p在非小细胞肺癌中呈高表达，导致抑癌基因RCAN1表达显著下调，促进非小细胞肺癌的进展。

简介：摘要目的探讨肿瘤抑制因子微小RNA(miRNA，miR)-149-5p对肾癌细胞转移潜能的影响及机制。方法GRC-1细胞分成miR-149-5p组(转染miR-149-5p mimics)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-149-5p＋丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1-SRPK1)、miR-149-5p＋vector组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p水平，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力变化，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平。利用在线靶基因预测软件发现SRPK1可能是miR-149-5p的靶基因，双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。应用SPSS 21.0统计软件分析。结果miR-149-5p组的GRC-1细胞中miR-149-5p(2.69±0.27比1.01±0.08)和E-cadherin(0.81±0.09比0.42±0.05)水平显著高于miR-NC组，侵袭数目[(70.81±6.35)个比(110.64±9.67)个] 、迁移数目[(108.46±9.27)个比(162.76±12.71)个]、N-cadherin(0.46±0.05比0.79±0.11)和SRPK1(0.45±0.06比0.92±0.08)蛋白水平显著低于miR-NC组，差异均有统计学意义(FmiR-149-5p＝95.385，F侵袭数目＝20.216，F迁移数目＝22.010，FN-cadherin＝15.100，FE-cadherin＝31.331，FSRPK1＝31.785，P<0.05)。共转染SRPK1野生型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.37±0.04比1.00±0.11)显著低于miR-NC组，差异有统计学意义(t＝16.150，P<0.05)。共转染SRPK1突变型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.99±0.10比1.00±0.09)与miR-NC组比较差异无统计学意义(t＝0.220，P>0.05)。miR-149-5p＋SRPK1组的GRC-1细胞中E-cadherin(0.45±0.04比0.80±0.08)水平显著低于miR-149-5p＋vector组，侵袭数目[(99.51±7.48)个比(71.84±5.37)个]、迁移数目[(145.06±11.14)个比(107.63±10.20)个]、N-cadherin(0.86±0.10比0.47±0.04)和SRPK1(0.89±0.06比0.50±0.07)蛋白水平显著高于miR-149-5p＋vector组，差异均有统计学意义(tSRPK1＝7.327，t侵袭数目＝5.205，t迁移数目＝4.292，tN-cadherin＝6.272，tE-cadherin＝6.778，P<0.05)。结论肿瘤抑制因子miR-149-5p靶向负调控SRPK1表达降低肾癌细胞的迁移和侵袭能力。

简介：无

简介：摘要微小RNA(microRNA)在角膜损伤修复过程中具有重要调控作用，角膜伤口愈合涉及复杂的级联反应，伴随着细胞死亡、增生、迁移、分化以及细胞外基质的重塑。分布在角膜不同层次的microRNA异常表达调节细胞/生长因子及下游通路，多种microRNA同时调控多条信号通路形成复杂而精确的微调基因调控网络参与角膜损伤愈合的各个级联过程，同时，因为其表达的改变导致细胞外基质的沉积以及血管生成，也提示microRNA对角膜病理性修复的重要作用。(国际眼科纵览，2021, 45: 246-250)

简介：微小RNA（microRNA，miRNA）是一类长度约为22个核苷酸的内源性单链非编码小RNA分子．通过碱基配对原则与靶基因完全或不完全互补结合，调控基因表达，调节细胞分化、细胞增殖、血管生成和细胞凋亡等过程。miRNA异常表达，可作为癌基因或抑癌基因介导恶性肿瘤的发生发展、复发和转移等。miRNA的表达具有组织特异性，使其能够在不明组织来源肿瘤中起诊断作用。通过不同的药物输送途径上调或抑制miRNA的表达，靶向调节miRNA成为一种新的治疗手段，开启了肿瘤治疗新模式。

简介：摘要脊髓损伤是一种难治性疾病，给患者和社会带来沉重负担，至今尚缺乏可以精准判断脊髓损伤严重程度及预后的标志物，也没有有效的治疗手段。微小RNA(miRNA，miR)在多种疾病的诊治中显示出一定的潜力，本文拟综述其在脊髓损伤诊治上的研究进展。miRNA与脊髓损伤密切相关，可以通过多种途径调控脊髓损伤的病理生理过程，某些miRNA和脊髓损伤的严重程度有特异的相关性，某些miRNA在脊髓损伤的动物模型中显示出促进脊髓损伤恢复的能力。本文还列举了miR-124、miR-21、miR-223这3种可能对脊髓损伤诊治有帮助的miRNA。

简介：摘要目的探究高迁移率蛋白A2基因(HMGA2)调控微小RNA(miRNA，miR)-497-5p对膀胱癌细胞增殖和侵袭的机制。方法实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫印迹实验(Western blot)测定5种膀胱癌细胞系、膀胱永生化上皮细胞SV-HUC-1和正常膀胱尿路上皮细胞中的HMGA2表达。构建HMGA2过表达和si-HMGA2质粒转染EJ细胞，不做任何处理作为对照，检测各组EJ细胞miR-497-5p和p65、p-p65表达水平。EJ细胞转染不同质粒后，克隆形成实验检测增殖能力，Transwell实验测定侵袭能力。两组间比较采用独立样本t检验。结果5种膀胱癌细胞系的HMGA2表达(10.31±0.86、138.38±19.32、34.55±3.95、10.88±0.56、220.55±15.32)高于SV-HUC-1(2.02±0.32，t＝15.648、12.223、14.218、23.793、24.701，P<0.01)。HMGA2组克隆数和侵袭细胞个数[(254.33±7.64)、(380.67±7.10个)]高于Blank组[(170.67±14.79)、(267±11.37)个，t＝9.768、17.168，P<0.01]；miR-497-5p mimic组克隆数和侵袭细胞个数[(174.00±1.73)、(109±3.46)个]低于miR-NC组[(189.00±7.55)、(219.00±16.64)个，t＝3.354、11.207，P<0.01)]；si-HMGA2+miR-497-5p inhibitor组克隆数和侵袭细胞个数[(203.00±13.08)、(305.00±3.46)个]高于si-HMGA2组[(138.67±19.04)、(170.33±24.99)个，t＝4.825、9.247，P<0.01]。HMGA2转染组p-p65/p65水平的比值(254.33±7.64)高于对照组(254.33±7.64，t＝18.557，P<0.01)。结论HMGA2基因负向调控miR-497-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭。

简介：摘要目的检测膀胱尿路上皮癌中微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)的表达，探讨其靶向犰狳重复X连锁蛋白2(ARMCX2)对细胞增殖的调控作用。方法选择69例2014年6月至2015年5月在海南医学院第二附属医院确诊并行手术治疗膀胱尿路上皮癌的患者，留取肿瘤组织。实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-15b-5p、免疫组织化学法检测ARMCX2和细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达。选择尿路上皮癌T24细胞系，应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b-5p和ARMCX2的靶向关系。建立无关序列组(NC组)、miR-15b-5p mimic组、miR-15b-5p inhibitor组、miR-15b-5p inhibitor和小干扰RNA(siRNA)-ARMCX2共转染组，应用蛋白质印迹法(Western blot)检测ARMCX2和Ki-67的表达，应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性。两组间比较行独立样本的t检验，多组间比较行方差分析(SNK法行两两比较)。结果膀胱尿路上皮癌中miR-15b-5p的表达量范围为1.2～4.5，miR-15b-5p的表达量和ARMCX2的阳性率在不同病变级别(1.51±0.26比2.04±0.43，t＝4.560，P<0.05；78.95%比19.35%，χ2＝24.290，P<0.05)、是否为浸润性生长(1.60±0.40比1.86±0.44，t＝2.360，P<0.05；73.33%比35.90%，χ2＝9.520，P<0.05)的分组中差异有统计学意义。相关分析显示miR-15b-5p和ARMCX2(r＝-0.620，P<0.05)、miR-15b-5p和Ki-67(r＝-0.600，P<0.05)呈负相关，ARMCX2和Ki-67(r＝0.660，P<0.05)呈正相关。生存分析显示miR-15b-5p和ARMCX2与生存时间有关(χ2＝5.010，P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-15b-5p和ARMCX2具有靶向关系。MiR-15b-5p mimic组中ARMCX2(1.15±0.40比1.82±0.28，t＝3.430，P<0.05)和Ki-67(1.34±0.37比0.99±0.21，t＝2.780，P<0.05)的表达高于NC组，细胞活性低于NC组，miR-15b-5p inhibitor组中ARMCX2(2.24±0.35比1.82±0.28，t＝2.630，P<0.05)和Ki-67(1.65±0.26比0.99±0.21，t＝5.760，P<0.05)的表达高于NC组，细胞活性高于NC组，miR-15b-5p inhibitor和siRNA-ARMCX2共转染组ARMCX2(1.66±0.25比1.82±0.28，t＝1.130，P>0.05)、Ki-67(1.24±0.29比0.99±0.21，t＝1.710，P>0.05)的表达差异无统计学意义。结论MiR-15b-5p在膀胱尿路上皮癌中低表达，与肿瘤细胞的增殖及生长相关。MiR-15b-5p靶向ARMCX2抑制尿路上皮癌细胞的增殖。

简介：摘要目的探讨血浆微小RNA-30b-5p（miR-30b-5p）联合血管外肺水指数（EVLWI）对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者预后的评估价值。方法选择2016年1月至2019年6月儋州市人民医院收治的120例ARDS患者作为研究对象。收集患者的性别、年龄、体重指数（BMI）、基础疾病、病因以及心率（HR）、呼吸频率（RR）、氧合指数（OI）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）和急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）等基线值，根据住院期间生存情况分为存活组和死亡组，根据OI分为轻中度组（OI>100 mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）和重度组（OI≤100 mmHg）。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测血浆miR-30b-5p表达，并测定EVLWI。绘制受试者工作特征曲线（ROC），分析血浆miR-30b-5p及EVLWI预测ARDS患者死亡的价值；用Pearson相关法分析住院期间不同预后ARDS患者血浆miR-30b-5p与EVLWI的相关性。结果120例ARDS患者均纳入分析，死亡组42例，存活组78例；轻中度组67例，重度组53例。死亡组患者APACHEⅡ评分高于存活组，但两组性别、年龄、BMI、基础疾病、病因及HR、RR、OI和PaCO2基线值比较差异均无统计学意义。死亡组患者血浆miR-30b-5p表达水平及EVLWI均明显高于存活组〔miR-30b-5p（2-ΔΔCt）：2.28±0.74比0.52±0.06，EVLWI（mL/kg）：15.38±4.60比10.24±2.15，均P<0.01〕。重度组血浆miR-30b-5p表达水平、EVLWI及住院病死率均明显高于轻中度组〔miR-30b-5p（2-ΔΔCt）：2.05±0.65比0.93±0.17，EVLWI（mL/kg）：14.65±4.20比11.36±2.28，住院病死率：58.5%（31/53）比16.4%（11/67），均P<0.01〕。ROC曲线分析显示，血浆miR-30b-5p及EVLWI预测ARDS患者住院期间死亡的最佳截断值分别为1.62和13.28 mL/kg，两项指标联合预测的ROC曲线下面积（AUC）明显高于二者单独预测（0.897比0.827和0.785），且联合预测的敏感度和特异度均较高，分别为90.5%和84.2%。Pearson相关分析显示，ARDS死亡患者血浆miR-30b-5p与EVLWI呈显著正相关（r＝0.768，P<0.01）；而存活者二者无明显相关性（r＝0.118，P>0.05）。结论血浆miR-30b-5p和EVLWI与ARDS患者病情严重程度及预后相关，二者联合对ARDS患者预后具有一定评估价值。

简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-1-3p在胃癌(GC)细胞和组织中的表达，探讨miR-1-3p对GC细胞增殖侵袭能力的影响及可能的分子调控机制。方法收集2014年1月至2015年6月在兰州大学第一医院行手术治疗的82例GC患者组织标本和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-1-3p在GC组织及癌旁组织、人GC细胞系(MKN-45、BGC823、AGS、MGC803、SGC7901)和人胃黏膜上皮细胞(GES-1)中的表达水平。分析miR-1-3p表达水平与GC患者临床病理特征参数及预后的相关性，用克隆形成实验和Transwell侵袭实验分别检测miR-1-3p的表达水平对GC细胞增殖侵袭能力的影响。采用生物信息学和荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p与B细胞淋巴瘤/白血病-2相关永生基因4(BAG4)的靶向调控关系。结果miR-1-3p在GC组织中的相对表达量 (0.815±0.060)低于癌旁组织 (1.604±0.140，t＝5.922，P<0.01)，其表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(均P<0.05)。miR-1-3p低表达组患者的总生存率低于高表达组[风险比(HR)＝0.519，95%可信区间(CI)：0.259~0.953，P<0.05)。过表达miR-1-3p组GC细胞的增殖和侵袭能力显著低于对照组(t＝9.089，P<0.01)，敲低miR-1-3p后得到了与之相反的结果(t＝8.783，P<0.01)。BAG4是miR-1-3p潜在的靶基因。下调miR-1-3p可逆转si-BAG4对GC细胞增殖和侵袭能力的作用。结论miR-1-3p通过靶向BAG4的表达调控GC细胞的增殖侵袭。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-330-3p对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响，并分析可能的机制。方法雄性C57BL/6小鼠80只，鼠龄7～8周，体重23～25 g，无特殊病原体，采用随机数字表法分为8组，再灌注2 h组、6 h组、12 h组、24 h组以及假手术组，miR-330-3p agomir组(术前注射miR-330-3p激动剂)、miR-330-3p antagomir组(术前注射miR-330-3p抑制剂)和阴性对照组(术前注射miRNA阴性对照)，每组10只。除假手术组外均制备肝脏IRI模型，聚合酶链反应、Western印迹、免疫组化检测miR-330-3p、磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cleave caspase-1)及gasdermin D(GSDMD)等的表达。双荧光素酶报告验证miR-330-3p的靶基因。采用miR-330-3p模拟物或抑制序列、miRNA阴性对照、PGAM5干扰RNA(siRNA)和干扰序列的阴性对照转染AML12细胞，然后检测PGAM5、Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)、cleave caspase-1、GSDMD的表达。结果小鼠肝脏缺血再灌注过程中，miR-330-3p相对表达量降低，而PGAM5相对表达量增高。miR-330-3p agomir组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)均低于阴性对照组，而miR-330-3p antagomir组ALT、AST高于阴性对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组比较，miR-330-3p agomir组小鼠肝组织中cleave caspase-1表达降低，而miR-330-3p antagomir组表达增加。双荧光素酶报告证实PGAM5是miR-330-3p靶基因。AML12细胞转染PGAM5 siRNA后PGAM5、NLRP3、cleave caspase-1、GSDMD蛋白相对表达为(0.24±0.09)、(0.12±0.07)、(0.15±0.07)、(1.08±0.08)，均低于干扰序列阴性对照组(1.17±0.14)、(0.36±0.09)、(0.68±0.09)、(1.36±0.08)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-330-3p可减轻小鼠肝脏IRI，其机制可能与miR-330-3p靶向抑制PGAM5介导的细胞焦亡有关。

简介：摘要目的建立小鼠神经源性膀胱动物模型，探讨纤维连接蛋白1(FN1)的变化及微小RNA(miRNA，miR)-1a-3p的作用机制。方法C57BL/6J雌性7周龄小鼠40只(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，分为模型组和对照组，模型组皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白及结核分支杆菌，并48 h腹腔注射百日咳毒素；对照组皮下注射生理盐水。观察小鼠排尿频次、排尿量等变化。处死小鼠并取膀胱组织，模型组和对照组各选取3只膀胱进行高通量测序。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠膀胱组织中FN1和miR-1a-3p的变化。多组计量资料采用One-way ANOVA。结果对测序结果进行分析，随着泌尿系统症状加重，FN1增加(4.569±0.426，t＝－5.142，P<0.01)，而miR-1a-3p减少(1.623±0.312，t＝－3.945，P<0.05)，差异有统计学意义。与对照组比较，模型组膀胱组织中FN1的mRNA[2.501(1.301，4.251)，F＝99.183，P<0.01]和蛋白[2.937(1.174，4.262)，F＝63.834，P<0.01]表达均上调，差异有统计学意义，而miR-1a-3p[2.401(1.250，3.001), F＝35.951，P<0.01]表达下调，差异有统计学意义；双荧光素酶基因报告表明FN1为miR-1a-3p的直接靶基因(0.514±0.027，t＝13.355，P<0.01)，差异有统计学意义。结论神经源性膀胱动物模型出现尿频、尿急、尿潴留等症状，且FN1表达明显上调，而miR-1a-3p表达下调，因此miR-1a-3p可能通过对FN1调控参与神经源性膀胱发生发展。

简介：摘要目的探讨微小RNA-642a-5p(miR-642a-5p)对结肠癌细胞株SW620细胞迁移和侵袭的影响及分子机制。方法将人结肠癌细胞SW620细胞分成4个组：对照组(OE-NC+mimic-NC组：共转染miR-642a-5p mimics阴性对照与空载体)；过表达miR-642a-5p组(OE-NC+mimic-miR-642a-5p组：共转染miR-642a-5p mimics与空载体)；过表达miR-642a-5p与Ⅰ型胶原α1(COL1A1)组(OE-COL1A1+mimic-miR-642a-5p组：共转染miR-642a-5p mimics与COL1A1过表达载体)；过表达COL1A1组(OE-COL1A1+mimic-NC组：共转染miR-642a-5p mimics阴性对照与COL1A1过表达载体)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞内miR-642a-5p及COL1A1的表达；划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力；蛋白质印迹法(Western blot)实验检测细胞内COL1A1蛋白表达。两组间比较采用独立样本t检验。结果RT-PCR结果显示应用miR-642a-5p mimics转染细胞后，miR-642a-5p表达水平显著增加；双荧光素酶报告基因实验结果miR-642a-5p直接靶向作用于COL1A1。应用(COL1A1 overexpression，OE-COL1A1)转染后，细胞COL1A1表达水平明显增加。而OE-NC + mimic-miR-642a-5p组和OE-COL1A1 + mimic-miR-642a-5p组的RNA相对表达量(18.62±2.31)，(2.52±0.44)明显高于OE-NC+mimic-NC组(0.52±0.11)，差异有统计学意义(t＝36.120、6.125，P<0.05)，且OE-COL1A1 + mimic-miR-642a-5p组的COL1A1相对表达量(5.88±1.06)明显高于OE-NC+mimic-miR-642a-5p组(0.22±0.04)，差异有统计学意义(t＝10.201，P<0.05)。与OE-NC + mimic-NC组比较，miR-642a-5p的过表达显著抑制了细胞的迁移和侵袭能力，而过表达COL1A1显著促进SW620细胞的迁移和侵袭能力，并部分逆转miR-642a-5p对细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-642a-5p可通过调节COL1A1的表达水平来抑制结肠癌细胞的迁移与侵袭。

简介：摘要目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者血浆微小RNA（miR）-17-5p的表达及其对肿瘤发生发展的作用。方法纳入2013年4月至2018年4月在河南省肿瘤医院血液科就诊的意义未明单克隆丙种球蛋白血症（MGUS）患者、MM患者及20名健康志愿者，采用逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测血浆循环miR-17-5p和骨髓单个核细胞中miR-17-5p的表达量。其中MM组患者分为初诊未治MM（NDMM）组、完全缓解MM（CRMM）组以及复发难治MM（RRMM）组。分析各组miR-17-5p的表达差异；用相关性分析评估NDMM患者的血浆miR-17-5p与血清M蛋白和骨髓浆细胞比例之间的关系；用受试者工作特征（ROC）曲线评估血浆miR-17-5p作为MM诊断相关的分子标志物的可能性；过表达或敲低miR-17-5p的表达后，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测miR-17-5P对MM细胞系增殖的影响，裸鼠皮下成瘤实验体内检测miR-17-5p对MM细胞增殖的影响。结果纳入MGUS患者10例，其中男6例、女4例。MM患者92例，其中男54例、女38例；MM患者中，NDMM组22例、CRMM组11例、RRMM组59例。NDMM组和RRMM组骨髓单个核细胞中miR-17-5p的表达量高于健康对照组［1.37（0.47，4.87）、2.68（1.02，5.02）比1.00（1.00，1.00），均P<0.05］，且血浆miR-17-5p的表达水平也高于健康对照组［1.85（0.92，3.51）、2.79（1.22，5.04）比1.00（1.00，1.00），均P<0.05］；miR-17-5p在KMS-11、RPMI-8226、H929、MM-1R、U266B1等MM细胞系中的表达量均高于健康对照组的骨髓单个核细胞（3.96±0.68、1.58±0.32、3.51±0.55、5.08±0.76、3.22±0.75比1.00±0，均P<0.05）；血浆miR-17-5p表达与血清M蛋白和骨髓浆细胞比例均呈正相关（r=0.50，P<0.05；r=0.60，P<0.01）；ROC曲线显示血浆miR-17-5p作为诊断MM的相关分子标志物的特异度为0.591，灵敏度为0.900（ROC曲线下面积=0.74，cut-off值为0.491）；CCK-8结果提示miR-17-5p过表达使RPMI-8226和NCI-H929等MM细胞系72 h的增殖较对照组增高（1.37±0.11比1.07±0.09，2.14±0.09比1.82±0.11，均P<0.05），miR-17-5p低表达使NCI-H929和MM-1R等MM细胞系72 h的增殖较对照组降低（1.38±0.09比1.83±0.11，1.45±0.10比1.73±0.09，均P<0.05）。裸鼠皮下成瘤实验提示，miR-17-5p过表达组肿瘤体积大于对照组［（1 865±181）比（1 389±227）mm3，P<0.05］，miR-17-5p低表达组肿瘤体积小于对照组［（1 006±171）比（1 389±227）mm3，P<0.05］。结论miR-17-5p可能作为MM疾病发展状态相关的血浆分子标志物，在MM细胞系中起癌基因作用。

简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-98-5p靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响并探讨其作用机制。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GES-1、BGC-823、SGC-7901、MGC-803细胞(购自中国科学院上海细胞库和ATCC细胞库)中miR-98-5p的mRNA表达水平；构建绿色荧光蛋白(GFP)-NC和GFP-miR-98-5p慢病毒稳定细胞株，采用生物信息学和双荧光素酶报告基因验证miR-98-5p和HMGA2的靶向关系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中HMGA2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达；采用Transwell检测细胞的侵袭能力。组间比较采用t检验，计数资料采用率(%)表示，组间比较采用χ2检验。结果与GES-1细胞(1.94±0.16)比较，BGC-823(0.41±0.03)、SGC-7901(0.53±0.05)、MGC-803(0.50±0.04)细胞中miR-98-5p的mRNA相对表达水平下降，差异有统计学意义(t＝7.437、6.288、6.305，P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示，与GFP-NC细胞比较(1.77±0.12)，转染HMGA2-WT后GFP-miR-98-5p细胞(0.42±0.05)的相对荧光素酶活性下调(t＝6.701，P<0.05)，差异有统计学意义。Western blot结果显示，GFP-NC、GFP-miR-98-5p、GFP-miR-98-5p＋pcDNA和GFP-miR-98-5p＋HMGA2细胞中HMGA2的表达水平分别为2.15±0.17、0.44±0.05、0.46±0.04、2.30±0.19；Vimentin的表达水平分别为1.85±0.13、0.47±0.04、0.45±0.05、1.39±0.09；E-cadherin的表达水平分别为0.36±0.03、1.60±0.11、1.65±0.10、0.72±0.05。与GFP-NC细胞比较，miR-98-5p过表达细胞中HMGA2和Vimentin的表达下降，E-cadherin的表达增加(t＝8.032、7.981、8.692，P<0.05)，差异有统计学意义；Transwell结果显示，与GFP-NC细胞[(88.17±9.16)个]比较，GFP-miR-98-5p细胞[(33.34±5.53)个]的侵袭个数下降(t＝4.231，P<0.05)，差异有统计学意义；与GFP-miR-98-5p细胞[(34.66±5.39)个]比较，GFP-miR-98-5p＋HMGA2细胞[(62.51±7.03)个]的侵袭个数上调(t＝3.858，P<0.05)，差异有统计学意义。结论miR-98-5p在胃癌细胞中低表达，miR-98-5p过表达可通过靶向HMGA2抑制胃癌细胞的EMT，从而抑制肿瘤的侵袭和转移。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-518c-5p调控结直肠癌细胞HT-29细胞凋亡的机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人结直肠癌细胞和人正常结直肠细胞中miR-518c-5p的表达量。通过过表达或敲低miR-518c-5p，检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平。通过TargetScan和荧光素酶报告试验筛选miR-518c-5p的靶标并验证。通过敲低聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)或跨膜蛋白61(TMEM61)，检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平。敲低miR-518c-5p和PTBP1或过表达miR-518c-5p和PTBP1，检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平。采用Student’s t检验分析。结果miR-518c-5p在结直肠癌细胞HCT116(0.94±0.23)，HT29(2.41±0.40)，RKO(0.84±0.22)，COLO-678(1.04±0.33)，C2BBe1(1.45±0.41)，GP2d(0.97±0.30)中的表达量均低于正常结直肠细胞NCM460[(0.32±0.05)%，F＝14.010，P<0.01]，差异均有统计学意义。过表达miR-518c-5p[(2.40±0.36)%比(4.14±1.01)%，t＝2.811，P<0.05]，HT-29d的凋亡率显著增加[(0.22±0.07)%比(0.77±0.22)%，t＝4.126，P<0.05]；敲低miR-518c-5p[(2.51±0.70)%比(0.45±0.11)%，t＝5.011，P<0.05]；HT-29d的凋亡率显著降低[(0.20±0.10)%比(0.10±0.03)%，t＝2.970，P<0.05]；敲低PTBP1后，HT-29d的凋亡水平上升[(0.23±0.04)%比(0.67±0.03)%，t＝15.240，P<0.05]；但是，敲低TMEM61后，HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.24±0.04)%比(0.26±0.01)%，t＝0.840，P>0.05]。过表达miR-518c-5p(2.31±0.30比4.02±1.01，t＝2.828，P<0.05]和PTBP1后，HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.24±0.08)%比(0.23±0.04)%，t＝0.194，P>0.05]；敲低miR-518c-5p[(2.40±0.70)%比(0.38±0.09)%，t＝4.975，P<0.05]和PTBP1后，发现HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.21±0.07)%比(0.25±0.09)%，t＝0.608，P>0.05]。结论miR-518c-5p能够通过靶向PTBP1 mRNA的3’端非编码区(3’UTR)来减少PTBP1的表达，以达到促进结直肠癌细胞HT-29凋亡的目的。

简介：摘要目的探讨微小RNA-140-5p（miR-140-5p）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中的表达及其在ESCC细胞增殖和侵袭中的作用。方法即时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）分析ESCC组织和细胞样本中miR-140-5p的表达。将阴性对照和miR-140-5p类似物转染Eca109和KYSE70细胞，细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）和Transwell分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力的变化，双荧光素酶报告实验证实miR-140-5p与葡萄糖转运蛋白1（Glut1）的相互作用，Western blot用来检测转染后Glut1蛋白的表达。结果GEO数据分析结果表明，ESCC组织中miR-140-5p的表达水平显著低于正常组织，差异均具有统计学意义（P<0.01）。qPCR结果显示，ESCC组织和细胞中miR-140-5p的表达均显著低于正常组织和正常食管上皮细胞Het-1A，差异均具有统计学意义（P<0.01）。miR-140-5p的表达与ESCC患者肿瘤的分化程度、TNM分期和淋巴结转移均密切相关，高表达miR-140-5p的ESCC患者生存率显著高于低表达患者，差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-140-5p类似物显著上调Eca109和KYSE70细胞中miR-140-5p的表达，其表达上调显著抑制Eca109和KYSE70细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验结果表明，Glut1是ESCC细胞中miR-140-5p的直接作用靶点，其在ESCC组织中表达显著上调，其与miR-140-5p表达呈负相关关系，miR-140-5p类似物显著抑制Eca109和KYSE70细胞中Glut1蛋白的表达。结论miR-140-5p在ESCC的发生发展中发挥重要作用，靶向miR-140-5p/Glut1可能成为ESCC患者新的治疗策略。