淀粉酶活性测定临床应用中的几个问题

(整期优先)网络出版时间:2013-04-14
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淀粉酶活性测定临床应用中的几个问题

马志荣1文庆成

马志荣1文庆成2通讯作者

(1北京大兴医院林校路街道社区卫生服务中心北京102600;

2中国协和医科大学100730)

【摘要】人血清中有胰淀粉酶和唾液淀粉酶。胰腺炎患者血清和尿淀粉酶活性升高,当临床遇急腹症,怀疑是胰腺炎时应查AMY活性。多种方法用于测定AMY活性,因测定原理和所用底物的差异,方法间存在系统误差,临床所用参考范围不能在方法间通用。为了提高淀粉酶临床诊断效率,必须注意淀粉酶活性升高临床意义的相对性及分析前质控和分析变异。

【关键词】淀粉酶;活性测定;胰腺炎

【中图分类号】R597+.2【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)05-0332-01

淀粉酶(Amylase,缩写AMY,英文全称:α-1,4-glucan4-glucanohydrolase,α-14-葡萄糖4-葡萄糖水解酶,EC3211),它是一种內切葡萄糖苷酶(endoglucosidase)随机作用于淀粉链内部α-1,4糖苷键。实验证明酶水解C1-O键,而不是O-C4键。水解直链淀粉时生成葡萄糖,少量麦芽糖和麦芽三糖;水解支鏈淀粉或糖原时终产物是葡萄糖,麦芽糖,麦芽三糖和α-极限糊精(α-limitdextrin)[1]。AMY作用的最适pH69-70,Ca2+++和Cl-是必须的辅助因子。多种不同检测技术应用到AMY活性测定,当前临床常规仍存在多种方法并存的状况[2]。因测定原理和所用底物的差异,方法间存在系统误差,临床所用参考范围不能在方法间通用.为了提高淀粉酶临床诊断效率,必须注意淀粉酶活性升高临床意义的相对性及分析前质控和分析变异,现仅就临床应用中需注意的几个问题讨论如下。

1方法间系统误差与参考范围[3]

AMY不同测定方法间因所用底物结构和试剂组成及反应条件的差异,方法间存在系统误差,现将收集到的EG7P与其它几种方法间的回归方程列于表1。

表1参考方法EG7P(Y)与其它

几种方法(x)间的回归分析(Y=a+bx)

Table3Regressionanalysisbetweenreference

EG7P(Y)methodandseveralothermethods(X).

表注:亚乙基-对-硝基酚-α-麦芽七糖苷〔EG7P〕;2-氯-对-硝基酚-α-麦芽七糖苷(CNPG7);对-硝基酚-α-麦芽五糖苷(PNPG5);对-硝基酚-α-麦芽四糖苷(PNPG4);对-硝基酚-α-麦芽七糖苷(PNPG7);苯甲基-对-硝基酚-α-麦芽五糖苷(BG5P);2-氯-对-硝基酚-α-麦芽三糖苷(CNPG3)

从表1数据可见,目前国内外临床实验室常规AMY测定方法仍然是多种方法并存,AMY参考范围更应强调各实验室建立自己检测系统的参考范围,而不能盲目照搬不属同方法组的参考值。IFCC推荐方法(37℃)测出的参考范围是31-107U/L,其它部分方法的参考值如表1所列。另外,婴幼儿血AMY活性约为成人的18%。血清AMY平均活性从婴幼儿阶段逐年升高,约经3-4年可达到成年人水平,而男女不同性别间无显著差异[4]。

2血清淀粉酶升高临床意义的相对性[5-6]

血AMY总活性在急性胰腺炎和唾液腺炎症时升高。AMY活性测定主要用于胰腺炎诊断。急性胰腺炎发作5-8小时AMY活性开始升高;约3~4天转归正常。峰值一般为参考值上限的4~6倍,最高可达40倍。急性胰腺炎时,尿AMY也增高,维持升高可持续7~10天,图1可供参考。非胰腺炎腹部病变,如阑尾炎、腹膜炎也能引起高淀粉酶血症,唾液腺病变,如感染、幅射损害,外科手术和肿瘤等也能引起唾液腺型(S-型)AMY活性升高以及AMY总活性升高.很多药物如阿斯匹林、可待因、乙醇、吗啡、四环素等可引起血AMY活性升高。另外,常见的AMY升高发生在肾功能障碍时,特别是肾小球滤过率低于50ml/min的肾功不全患者血AMY可升高至参考范围上限5倍以上。AMY总活性测定因缺乏特异而开发了其它一些实验(如脂肪酶和胰特异淀粉酶同工酶)用于急性腹痛的鉴别诊断。一些研究已证明与这些检验比较,AMY对胰腺炎的诊断率为54%~83%,诊断灵敏度(真阳性率)和特异性(真阴性率)分别为46%~90%和73%~96%。如果在测定AMY的同时测定脂肪酶(Lipase)或胰腺AMY同工酶则可提高诊断效率,以利于确立正确的诊断。

Figure1Afteracutepancreatitisoccurs,amylaseandlipaseactivitieschanges.

巨淀粉酶(Macroaauylase)是AMY与多种免疫球蛋白(imnuunoglobulins)之间的复合物。巨淀粉酶分子质量大(大于200KDa)不能被肾小球滤过,在尿中不存在[2]。通常,巨淀粉酶血症患者血清AMY活性升高而尿AMY低或正常,临床应注意辨别。

3分析前的质量控制[7]

血清和血浆都可用作标本。然而,一项研究发现,采用干片技术测AMY活性时,肝素抗凝血浆标本的测定结果明显高于血清标本的测定结果[4]。这可能是因为干片技术的独特性或在“湿化学”系统尚不知的肝素对AMY测定的影响造成的。因为钙离子(Ca2+)是AMY活性表达绝对需要的,所以某些具有“螯合作用”的抗凝剂,如柠檬酸,草酸和EDTA等不能用于收集AMY测定用的血浆标本。尿标本不论是随机尿还是定时尿不要加防腐剂。AMY的稳定性实验表明,室温放置4天没有丢失活性;5℃可稳定2周,-28℃为1年;-75℃为5年。尿标本在室温下12小时内应完成分析;5℃保存应在5天内完成检测,尿标本不要冰冻。AMY实验通常不受血红蛋白、胆红素或甘油三酯干扰。

4分析变异[7]

据美国临床实验室促进法(CLIA—88)和美国病理协会(CAP)提出的AMY实验可接受的变异标准是室间质评同方法组均值±30%,据CAP2007年调查表明临床实验室使用着不同的AMY测定方法和多种型号的仪器。在各实验室中运用的这些分析系统测定AMY活性的批内变异系数(CV%),从17%到91%不等,平均CV是54%。我国目前执行标准采纳的即是(CLIA-88)规定。因此,在临床应用AMY测定结果,比较连续监测前后AMY活性变化时,在考虑病情变化的同时,不能忽略分析变异这个较大的影响因素,以提高实验诊断效率。

参考文献

[1]王镜岩,徐长法.顾问生物化学[M].第3版.高等教育出版社,2003

[2]沈财成.淀粉酶的测定方法选择、评价和推荐方法,临床生物化学检验[M].第2版,主编:郑铁生,鄢盛恺,59-60,中国医药科技出版社,2010年

[3]ChenC.T,DineenH,NewtonJ.D.,Specificityofdifferentsubstratesusedinthreeamylaseassays.ClinChem1988;34:1363-1364

[4]GillardB.K,SimbalaJ.A,GoodglickL.Referencerangesforamylaseisoenzymesinserumandplasmaofinfantsandchildren.Clin.Chem.,1983;29:1119-1123

[5]刘北忠,淀粉酶临床评价,临床生物化学检验,第2版,主编:郑铁生,鄢盛恺,2010年,第341页,中国医药科技出版社,

[6]LottJ.A,LuC.J,Lipaseisoformsandamylaseisoenzymes:assaysandapplicationinthediagnosisofacutepancreatitis,Clin.Chem.1991;37:361-368

[7]MingJin,Amylase,in:MethodsofAnalysisinclinicalchemistry,5thEd:Kaplan.,byMosby,anaffiliateofElsevier;2010